BCA蛋白 檢測試劑盒

貓: PC0020

尺寸: 500時間 (酶標儀) / 50時間 (分光光度計)

貯存: BSA 蛋白標準品4℃保存 3 月， 或在-20℃下 1 年, 其他試劑室溫保存 1 年

成分:

	500時間 (50時間)	貯存
BCA試劑	100毫升	RT
帶試劑	3毫升	RT
PBS 稀釋	30毫升	RT
BSA標準(5毫克/毫升牛血清白蛋白)	1毫升	-20℃

產品描述:

• BCA 蛋白檢測試劑盒原理:
  • 基於蛋白質將 Cu^2+ 還原為 Cu^+.
  • BCA在鹼性條件下與Cu^+形成紫藍色絡合物.
  • 在 562nm 處檢測吸光度.
  • 透過將吸光度與標準曲線進行比較來完成蛋白質定量.
• 與洗滌劑的兼容性:
  • 常見的洗滌劑如 安全資料表, 海衛一 X-100, 和 Tween 不影響測試結果.
• 對某些藥物的敏感性:
  • 受螯合劑的影響 (乙二胺四乙酸, EGTA), 還原劑 (數位地面電視, 巰基乙醇), 和脂質.
• 高背景考慮:
  • 由於樣品稀釋或裂解物導致高背景的情況, 考慮使用 Bradford 蛋白質檢測試劑盒.

協定

A. 微孔板讀者

1. BCA工作方案

稀 1 Cu 試劑的體積 50 BCA 試劑體積 (1:50). 如果發生降水, 混合後就會消失. BCA 工作試劑可在室溫下保存 24 小時.

2. BSA標準工作液

稀釋 10μl BSA (5毫克/毫升) 用 PBS 直至 100μl (0.5毫克/毫升). 添加 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20µl BSA 標準工作液 (0.5毫克/毫升) 到 96 孔板, 加入 PBS 直至 20μl.

3. 適當稀釋樣品. 最好做幾個漸變, 例如 2, 4, 和 8 倍稀釋. 加入 20μl 樣品至 96 孔

筆記: 避免操作步驟錯誤, 使樣本點位於 1/2 盡可能落後標準線, 由於移液管在取少量樣品時誤差較大, 而標準線前面的點可能不是很準確.

4. BCA反應

加入200μl BCA工作液 96 孔板, 37℃孵育15-30min. 措施

562nm處的吸光度, 並繪製標準曲線，計算樣品蛋白質含量. 使用培養箱時避免水分蒸發影響測試結果.

乙. 分光光度計

1. BCA工作方案

稀 1 Cu 試劑的體積 50 BCA 試劑體積 (1:50). 如果發生降水, 混合後就會消失. BCA 工作試劑可在室溫下保存 24 小時.

2. BSA標準工作液

稀釋 100μl BSA (5毫克/毫升) 用 PBS 直至 1 毫升 (0.5毫克/毫升).

3. 準備八個 (或更多) 5毫升離心管, 並添加試劑如下:

離心管 無.	1	2	3	4	5	6	7 (樣本 1)	8 (樣本 2)	9 (樣本 3)
BSA標準工作液	0	40微升	80微升	120微升	160微升	200微升	200微升	200微升	200微升
公共廣播公司	200微升	160微升	120微升	80微升	40微升	0	0	0	0
BCA工作方案	2毫升	2毫升	2毫升	2毫升	2毫升	2毫升	2毫升	2毫升	2毫升

筆記

孵化於 37 ℃ 15-30分鐘. 測量 562nm 處的吸光度, 並繪製標準曲線，計算樣品蛋白質含量. 使用培養箱時避免水分蒸發影響測試結果.

1. Cu試劑及PBS稀釋液長期不使用時可在2-8℃保存. 當BCA試劑在低溫下結晶沉澱時, 37℃孵育完全溶解，不影響使用.
2. 如果樣本中含有大量幹擾物質, 請使用BCA蛋白檢測試劑盒 (PC0020).
3. 為了您的安全與健康, 請戴手套和紗布口罩

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