Proteina BCA Kit di analisi

Gatto: PC0020

Misurare: 500T (Microplate Reader) / 50T (Spettrofotometro)

Magazzinaggio: Lo standard proteico BSA è immagazzinato a 4 ℃ per 3 mesi， o a -20 ℃ per 1 anno, Altri reagenti tengono a temperatura ambiente per 1 anno

Componenti:

	500T (50T)	Magazzinaggio
Reagente BCA	100ml	RT
Con reagente	3ml	RT
Diluizione PBS	30ml	RT
Standard BSA(5mg/ml di superficie corporea)	1ml	-20℃

Descrizione del prodotto:

• Il principio del kit di test della proteina BCA:
  • Basato sulla riduzione di Cu^2+ a Cu^+ da parte delle proteine.
  • BCA forma un complesso blu viola con Cu^+ in condizioni alcaline.
  • L'assorbanza viene rilevata a 562 nm.
  • La quantificazione delle proteine ​​viene eseguita confrontando l'assorbanza con una curva standard.
• Compatibilità con detergenti:
  • Detergenti comuni come Scheda di sicurezza, Tritone X-100, e due non influiscono sui risultati del test.
• Sensibilità a determinati agenti:
  • Colpito da agenti chelanti (EDTA, Egta), riducendo gli agenti (digitale terrestre, mercaptoetanolo), e lipidi.
• Considerazioni su background elevati:
  • In caso di background elevato a causa di diluizione del campione o lisato, Prendi in considerazione l'utilizzo del kit di test Bradford Protein.

Protocollo

UN. MicropiastraLettore

1. Soluzione di lavoro BCA

Diluire 1 volume del reagente Cu con 50 volumi di reagente BCA (1:50). Se si verificano precipitazioni, scomparirà dopo aver mescolato. Il reagente di lavoro BCA potrebbe essere mantenuto a RT per 24 ore.

2. Soluzione di lavoro standard BSA

Diluire 10 μl di BSA (5mg/ml) con PBS fino a 100μL (0.5mg/ml). Aggiungere 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20Soluzione di lavoro standard μL BSA (0.5mg/ml) A 96 Bene piatti, Aggiungi PBS fino a 20 μl.

3. Diluire correttamente il campione. È meglio fare diversi gradienti, ad esempio 2, 4, E 8 volte diluizione. Aggiungi 20 μl di campione a 96 pozzetti

Nota: Per evitare errori nelle fasi del funzionamento, fare il punto di campionamento situato a 1/2 Dietro la linea standard il più possibile, Poiché la pipetta ha un grande errore quando prendi una piccola quantità di campione, e il punto davanti alla linea standard potrebbe non essere molto preciso.

4. Reazione BCA

Aggiungi 200 μl di soluzione di lavoro BCA a 96 Bene piatti, e incubare a 37 ℃ per 15-30 minuti. Misura

l'assorbanza a 562nm, e disegnare una curva standard per calcolare il contenuto di proteine ​​del campione. Evita l'evaporazione dell'acqua di influenzare i risultati del test quando si utilizza un incubatore.

B. Spettrofotometro

1. Soluzione di lavoro BCA

Diluire 1 volume del reagente Cu con 50 volumi di reagente BCA (1:50). Se si verificano precipitazioni, scomparirà dopo aver mescolato. Il reagente di lavoro BCA potrebbe essere mantenuto a RT per 24 ore.

2. Soluzione di lavoro standard BSA

Diluire 100 μl di BSA (5mg/ml) con PBS fino a 1 ml (0.5mg/ml).

3. Prepara otto (o più) 5provette da centrifuga da ml, e aggiungere reagenti come segue:

Tubi di centrifuga n.	1	2	3	4	5	6	7 (campione 1)	8 (campione 2)	9 (campione 3)
Soluzione di lavoro standard BSA	0	40ml	80ml	120ml	160ml	200ml	200ml	200ml	200ml
PBS	200ml	160ml	120ml	80ml	40ml	0	0	0	0
Soluzione di lavoro BCA	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml

Nota

Incubare a 37 ℃ per 15-30 minuti. Misura l'assorbanza a 562 nm, e disegnare una curva standard per calcolare il contenuto di proteine ​​del campione. Evita l'evaporazione dell'acqua di influenzare i risultati del test quando si utilizza un incubatore.

1. Il reagente Cu e la diluizione PBS possono essere conservati a 2-8 ℃ quando il reagente non viene utilizzato a lungo. Quando il reagente BCA si cristallizza e precipita a basse temperature, Può essere incubato a 37 ℃ per dissolversi completamente senza influenzarne l'uso.
2. Se il campione contiene molte sostanze interferenti, Si prega di utilizzare il dosaykit proteico BCA (PC0020).
3. Per la tua sicurezza e salute, Si prega di indossare guanti e maschera di garza

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