- หมายเลขสินค้า： AN2206001
- ข้อมูลจำเพาะ：48ต 100ต
การแนะนำสินค้า：
ชุดนี้สามารถขยายชิ้นส่วนกรดนิวคลีอิกเฉพาะจากตัวอย่างเช่นขนนก, เลือด, และเนื้อเยื่อของนกต่าง ๆ (รวมทั้ง Psittaciformes, Columbiformes, นก Galliformes, Ciconiiformes, กรูฟอร์มิฟอร์ม, และ Anseriformes บางตัว), โดยใช้ พีซีอาร์.
มันรวมถึงการผสมต่อต้านการยับยั้ง 2 × TAQ PCR Master Mix (ด้วยสีย้อม) และส่วนประกอบอื่น ๆ ที่จำเป็นสำหรับ PCR. ผลิตภัณฑ์ที่มีการขยายสามารถอยู่ภายใต้ agarose gel electrophoresis สำหรับการกำหนดผลลัพธ์โดยตรง.
เนื้อหาผลิตภัณฑ์：
| ส่วนประกอบรีเอเจนต์ | AN2206001-02 (100t) |
| รีเอเจนต์ C | 1มล |
| รีเอเจนต์ d | 1มล |
| รีเอเจนต์ E | 100ไมโครลิตร |
สภาพการเก็บรักษา：
เก็บที่อุณหภูมิ -20 ℃, อายุการเก็บรักษาเป็นอย่างน้อย 12 เดือน
การประมวลผลตัวอย่าง:
อ้างถึงชุดสกัด DNA ของจีโนมสัตว์อย่างรวดเร็ว (สำหรับการวิเคราะห์ PCR) คู่มือการใช้งานจาก Sanshibio (หมายเลขผลิตภัณฑ์: DP202) สำหรับการประมวลผลตัวอย่าง. จัดเก็บตัวอย่างที่ประมวลผลเพื่อใช้ในภายหลัง.
- การดำเนินการทดลอง：
- การจัดเตรียมตัวอย่าง (พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)
- การสกัดกรดนิวคลีอิก:
- ทำตามคำแนะนำจากไฟล์ “ชุดสกัด DNA อย่างรวดเร็วของจีโนมสัตว์ (สำหรับการวิเคราะห์ PCR)” หรือใช้ชุด/วิธีการสกัดกรดนิวคลีอิกที่เหมาะสมอื่น ๆ ที่ตรงตามข้อกำหนด. สกัดกรดนิวคลีอิกจากตัวอย่างประมวลผล.
- เป็นการดีที่สุดที่จะทดสอบกรดนิวคลีอิกที่สกัดได้โดยเร็วที่สุด. เก็บไว้บนน้ำแข็ง, หรือเก็บไว้ที่ 4 ° C หรือ -20 ° C หากไม่ได้ใช้ทันที.
- การเตรียมระบบปฏิกิริยา (พื้นที่เพิ่มตัวอย่าง)
2.1 การเตรียมการผสมปฏิกิริยา:
- คำนวณปริมาตรของรีเอเจนต์ที่จำเป็นตามจำนวนตัวอย่าง.
- การเตรียมการเฉพาะมีดังนี้: ปิเปต (n × 7.5 µl ของทดสอบรีเอเจนต์ C + n × 10 µl ของทดสอบรีเอเจนต์ d + n × 1 µl ของทดสอบรีเอเจนต์ E) เข้าไปในหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยงที่สะอาด. ผสมให้เข้ากันโดยการปิเปต, และ aliquot 18 µl เข้าไปในแต่ละหลุมของก 0.2 หลอดมล. PCR (ท่อปั่นป่วน). (หากมีตัวอย่างมากมาย, เตรียมส่วนผสมล่วงหน้าและเก็บไว้สั้น ๆ ที่ 2-8 ° C; ใช้ภายใน 2 ชั่วโมง.)
2.2 เพิ่ม 2 µl ของกรดนิวคลีอิกตัวอย่างที่สกัดไปยังแต่ละส่วนผสมของปฏิกิริยา, หมวกท่อ, บันทึกรายละเอียด, และนำปริมาณทั้งหมดไปที่ 20 µl ต่อปฏิกิริยา. ผสมให้เข้ากันและหมุนเหวี่ยงสำหรับ 30 วินาทีก่อนที่จะวางใน เครื่องพีซีอาร์ สำหรับการขยาย.
การขยาย PCR (พื้นที่การขยายและการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์)
โปรโตคอล PCR:
- การสูญเสียสภาพเริ่มต้นที่ 94 ° C สำหรับ 3 นาที.
- 32 รอบ: 94°C สำหรับ 30 วินาที (การเสียชีวิต), 50°C สำหรับ 45 วินาที (การหลอม), 72°C สำหรับ 50 วินาที (ส่วนขยาย).
- ส่วนขยายสุดท้ายที่ 72 ° C สำหรับ 8 นาที, จากนั้นถือที่ 4 ° C.
- เย็นผลิตภัณฑ์ขยายอย่างละเอียดที่ 4 ° C (หรืออย่างรวดเร็วที่ -20 ° C เป็นเวลาประมาณ 5 นาที) สำหรับ 15 นาที.
อะกาโรสเจลอิเล็กโทรโฟรีซิส(การใช้ agarose gel electrophoresis ในแนวนอนเป็นตัวอย่าง)
4.1 เตรียมเจล:
ตามปริมาณของเจลที่จะหล่อและความเข้มข้นของเจล (1%~ 1.5%), วัดปริมาณบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟเรซิสที่เหมาะสม (แทหรือ tbe, ด้วยหมายเลขผลิตภัณฑ์ DA001 หรือ DA002 ตามลำดับ, หรือผลิตภัณฑ์ที่เทียบเท่าตามข้อกำหนด), และเทลงในขวดสามเหลี่ยม.
บันทึก: บัฟเฟอร์การหล่อเจลและบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟเรซิสจะต้องสอดคล้องกัน.
4.2 ชั่งน้ำหนัก agarose อย่างระมัดระวัง (หมายเลขผลิตภัณฑ์: ใช่ 003, หรือแบรนด์ที่เทียบเท่า), และเพิ่มลงในขวด. ครอบคลุมขวดด้วยกระดาษ parchment หรือฟิล์มปิดผนึกและละลาย agarose โดยการให้ความร้อนในไมโครเวฟ. ความร้อนจนเดือด, สวมถุงมือทนความร้อน, และค่อยๆหมุนขวด. ทำซ้ำจนกว่า agarose จะละลายอย่างเต็มที่.
บันทึก: กระบวนการละลาย agarose ควรใช้การต้มหลายครั้งเพื่อป้องกันการแก้ปัญหาจากความร้อนสูงเกินไปและเดือด. ตรวจสอบให้แน่ใจว่า agarose ถูกละลายอย่างเต็มที่เพื่อหลีกเลี่ยงการก่อให้เกิดภาพอิเล็กโทรโฟเรซิสที่ไม่ชัดเจน.
4.3 เพิ่มสีย้อมกรดนิวคลีอิก (หมายเลขผลิตภัณฑ์: DA004, หรือแบรนด์ที่เทียบเท่า) ไปยัง agarose ที่ละลายอย่างเต็มที่.
4.4 เทสารละลาย agarose ลงในถาดหล่อเจลและใส่หวีที่ตำแหน่งที่เหมาะสม. ความหนาของเจลควรอยู่ระหว่าง 3 ถึง 5 มม.
4.5 อนุญาตให้เจลแข็งตัวที่อุณหภูมิห้อง (เกี่ยวกับ 30 นาทีถึง 1 ชั่วโมง). ถอดหวีออกอย่างระมัดระวังและวางเจลลงในถังอิเล็กโทรโฟเรซิสที่เติมล่วงหน้าด้วยบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟเรซิส.
อิเล็กโทรโฟเรซิสและการโหลดตัวอย่าง:
4.6 โหลด 5 µl ของเครื่องหมาย DNA (หมายเลขผลิตภัณฑ์: ใช่ 005, หรือแบรนด์ที่เทียบเท่า) และ 10 µl ของผลิตภัณฑ์ขยายความเย็นลงในหลุม. หลังจากโหลดตัวอย่างทั้งหมด, ปล่อยให้ยืน 2 นาทีก่อนเปิดแหล่งจ่ายไฟ. ตั้งค่าแรงดันไฟฟ้า (70-120วี) และเวลาทำงาน (20-30 นาที) ตามเงื่อนไข.
การตีความผลลัพธ์
การกำหนดผลลัพธ์:
- หากวงเดียวปรากฏขึ้นที่ประมาณ 700 บีพี, ตัวอย่างถูกกำหนดให้เป็นเพศชาย.
- หากสองแถบขยายปรากฏขึ้นประมาณ 700bp และ 400bp (หรือมีวงดนตรีที่มีการขยายเพียงหนึ่งเดียวเท่านั้นที่ปรากฏขึ้นประมาณ 400bp), ตัวอย่างถูกกำหนดให้เป็นผู้หญิง.
- หากมองไม่เห็นวงดนตรี, ไม่พบยีนที่เฉพาะเจาะจงสำหรับการระบุเพศของนกในตัวอย่าง. ขอแนะนำให้ทำซ้ำการสกัดกรดนิวคลีอิกและการขยายหรือติดต่อฝ่ายสนับสนุนด้านเทคนิคของผู้ผลิตเพื่อขอความช่วยเหลือ.
ข้อควรระวัง：
- เพื่อป้องกันการปนเปื้อน, การทดลองควรแบ่งพาร์ติชันอย่างเคร่งครัด, ด้วยการแยกทางกายภาพระหว่างโซนต่าง ๆ เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามที่เกิดจากปัจจัยมนุษย์. สวมเสื้อกาวน์แล็บและถุงมือยางในระหว่างการทดลอง, และใช้เครื่องมือแยกกันในด้านต่างๆ. ควรเปลี่ยนถุงมือและเสื้อโค้ทแล็บเมื่อเคลื่อนที่ระหว่างพื้นที่.
- รีเอเจนต์ควรละลายอย่างเต็มที่ก่อนการใช้งาน, แต่ควรหลีกเลี่ยงรอบการแช่แข็งซ้ำ ๆ ซ้ำ ๆ. ทำตามคำแนะนำอย่างเคร่งครัดสำหรับการเตรียมน้ำยาและการเพิ่มตัวอย่าง. โต๊ะทำงาน, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปต, และเครื่องมืออื่นๆ ควรฆ่าเชื้อด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อที่มีคลอรีนเป็นประจำ, เอทานอล, สารชำระล้างกรดนิวคลีอิก, หรือหลอด UV.
- หลังจากปฏิกิริยา PCR เสร็จสมบูรณ์, อย่าเปิดฝาทันที. รอให้เย็นพอก่อนที่จะเปิดเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของละอองลอยในระดับสูงสุดเท่าที่จะเป็นไปได้.
- ชุดนี้ใช้สำหรับการขยายยีนที่เฉพาะเจาะจงในนกที่ไม่ใช่พาสเซอรีน (สัตว์ปีก), สำหรับผลิตภัณฑ์อื่น ๆ ที่เกี่ยวข้อง, โปรดปรึกษา Sanli Bio. ผลิตภัณฑ์นี้ใช้สำหรับการวิจัยทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น และไม่ได้มีไว้สำหรับการวินิจฉัยทางคลินิกหรือวัตถุประสงค์อื่น.
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์