Nukleinsäure-Nachweiskit zur Geschlechtsidentifizierung bei Vögeln (PCR-Methode)

• Artikel-Nr： AN2206001
• Spezifikation：48T 100T

Produkteinführung：

Dieses Kit kann spezifische Nukleinsäurfragmente aus Proben wie Federn verstärken, Blut, und Gewebe verschiedener Vögel (einschließlich Psittaciformes, Columbiformes, Galliformes, Ciconindes, Gruiformes, und einige Anseriformes), verwenden PCR.

Es enthält einen Anti-Hemmung 2 × Taq PCR Master Mix (mit Farbstoff) und andere für PCR erforderliche Komponenten. Die amplifizierten Produkte können direkt einer Agarosegelelektrophorese zur Ergebnisbestimmung unterzogen werden.

Produktinhalte：

Reagenzkomponenten	AN2206001-02 （100T）
Reagenz c	1ml
Reagenz d	1ml
Reagenz e	100µL

Lagerbedingungen：

Bei -20℃ lagern, Die Haltbarkeit beträgt mindestens 12 Monate

Probenverarbeitung:

Siehe das tierische genomische DNA -Rapid -Extraktionskit (für PCR-Analyse) Bedienungsanleitung aus Sanshibio (Produktnummer: DP202) zur Probenverarbeitung. Speichern Sie die verarbeiteten Muster für die spätere Verwendung.

1. Experimenteller Betrieb：

• Probenvorbereitung (Probenvorbereitungsbereich)
• Nukleinsäureextraktion:
• Befolgen Sie die Anweisungen aus der „Kit zur schnellen Extraktion tierischer genomischer DNA (für PCR-Analyse)“ Oder verwenden Sie ein anderes geeignetes Nukleinsäure -Extraktionskit/eine Methode, die den Anforderungen entspricht. Extrahieren Sie Nukleinsäuren aus den verarbeiteten Proben.
• Es ist am besten, die extrahierten Nukleinsäuren so schnell wie möglich zu testen. Halten Sie sie auf Eis, oder speichern Sie sie bei 4 ° C oder -20 ° C, wenn nicht sofort verwendet wird.

2. Vorbereitung des Reaktionssystems (Bereich zum Hinzufügen von Proben)

2.1 Reaktionsmischungspräparation:

• Berechnen Sie das Volumen der Reagenzien basierend auf der Anzahl der Proben.
• Die spezifische Vorbereitung ist wie folgt: Pipette (N × 7.5 µl des Testreagens c + N × 10 µl des Testreagens d + N × 1 µl des Testreagens e) in eine saubere Zentrifugenröhre. Durch Pipettieren gründlich mischen, und Aliquot 18 µl in jede Vertiefung von a 0.2 ML PCR -Rohr (Zentrifugenröhre). (Wenn es viele Proben gibt, Bereiten Sie die Mischung im Voraus vor und lagern Sie sie kurz bei 2-8 ° C.; innen verwenden 2 Std.)

2.2 Hinzufügen 2 µl der extrahierten Proben -Nukleinsäure an jedes Reaktionsgemisch, Kappen Sie die Röhren, Notieren Sie die Details, und bringen das Gesamtvolumen auf 20 µl pro Reaktion. Gut mischen und zentrifugieren für 30 Sekunden vor dem Platzieren in a PCR-Maschine zur Verstärkung.

PCR-Amplifikation (Bereich Amplifikation und Produktanalyse)

PCR -Protokoll:

• Anfängliche Denaturierung bei 94 ° C für 3 Protokoll.
• 32 Zyklen von: 94°C für 30 Sekunden (Denaturierung), 50°C für 45 Sekunden (Glühen), 72°C für 50 Sekunden (Verlängerung).
• Endgültige Verlängerung bei 72 ° C für 8 Protokoll, dann bei 4 ° C halten.
• Kühlen Sie die Verstärkerprodukte gründlich bei 4 ° C ab (oder schnell bei -20 ° C für ungefähr 5 Protokoll) für 15 Protokoll.

Agarosegelelektrophorese(Verwendung horizontaler Agarosegelelektrophorese als Beispiel als Beispiel)

4.1 Vorbereitung des Gels:

Gemäß der Menge an Geld und der Gelkonzentration (1%~ 1,5%), Messen Sie ein geeignetes Volumen an Elektrophorese -Puffer (Tae oder tbe, mit Produktnummern DA001 oder DA002 jeweils, oder gleichwertige Produkte, die den Anforderungen entsprechen), und gießen Sie es in einen dreieckigen Kolben.

Notiz: Der Gel -Gusspuffer und der Elektrophorese -Puffer müssen konsistent sein.

4.2 Wägen Sie den Agarose sorgfältig ab (Produktnummer: Ja003, oder eine äquivalente Marke), und fügen Sie es in den Kolben hinzu. Decken Sie den Kolben mit Pergamentpapier oder Versiegelungsfilm ab und lösen Sie die Agarose auf, indem Sie ihn in einer Mikrowelle erhitzen. Bis zum Kochen erhitzen, Tragen Sie hitzebeständige Handschuhe, und schwirmen den Kolben sanft. Wiederholen Sie, bis sich die Agarose vollständig aufgelöst hat.

Notiz: Der Agarose -Auflösungsprozess sollte mehrere kurze Kochungen verwenden, um zu verhindern, dass die Lösung überhitzt und kocht. Stellen Sie sicher, dass die Agarose vollständig aufgelöst ist, um zu vermeiden, dass unklare Elektrophorese -Bilder verursacht werden.

4.3 Nukleinsäurefarbstoff hinzufügen (Produktnummer: Ja004, oder eine äquivalente Marke) zum voll gelösten Agarose.

4.4 Gießen Sie die Agaroselösung in eine Gelgussschale und setzen Sie einen Kamm an geeigneten Positionen ein. Die Geldicke sollte dazwischen sein 3 Zu 5 mm.

4.5 Lassen Sie das Gel bei Raumtemperatur festigen (um 30 Minuten bis 1 Stunde). Entfernen Sie den Kamm vorsichtig und platzieren Sie das Gel in einen mit Elektrophoresepuffer vorgefüllten Elektrophorese-Tank.

Elektrophorese und Probenbelastung:

4.6 Laden 5 µl DNA -Marker (Produktnummer: Ja005, oder eine äquivalente Marke) Und 10 µl der abgekühlten Verstärkungsprodukte in die Brunnen. Nach dem Laden aller Proben, Lassen Sie stehen 2 Minuten vor dem Einschalten des Netzteils. Stellen Sie die Spannung ein (70-120V) und Laufzeit (20-30 Protokoll) gemäß den Bedingungen.

Ergebnisinterpretation

Ergebnisse bestimmen:

• Wenn eine einzelne Bande ungefähr erscheint 700 bp, Die Probe wird als männlich bestimmt.
• Wenn zwei verstärkte Bänder um 700 bp und 400 bp erscheinen (oder nur ein verstärktes Band erscheint um 400 bp), Die Probe wird als weiblich bestimmt.
• Wenn keine Bänder sichtbar sind, Die spezifischen Gene für die Identifizierung des Geschlechts der Vogelgeschäfte wurden in der Probe nicht nachgewiesen. Es wird empfohlen, die Nukleinsäure -Extraktion und -verstärkung wiederherzustellen oder die technische Unterstützung des Herstellers für Unterstützung zu erhalten.

Vorsichtsmaßnahmen：

• Um eine Kontamination zu verhindern, Das Experiment sollte streng aufgeteilt sein, mit körperlicher Isolation zwischen verschiedenen Zonen, um eine durch menschliche Faktoren verursachte Kreuzkontamination zu vermeiden. Tragen Sie während des Experiments Laborkittel und Latexhandschuhe, und separate Tools in verschiedenen Bereichen verwenden. Handschuhe und Labormäntel sollten geändert werden, wenn sich zwischen den Bereichen bewegen.
• Reagenzien sollten vor dem Gebrauch vollständig aufgetaut sein, aber wiederholte Gefrierzyklen sollten vermieden werden. Befolgen Sie die Anweisungen ausschließlich zur Vorbereitung der Reagenzien und der Probeneradung. Arbeitbänken, Zentrifugen, Pipetten, und andere Instrumente sollten regelmäßig mit chlorhaltigen Desinfektionsmitteln desinfiziert werden, Ethanol, Nukleinsäure-Dekontaminationsmittel, oder UV -Lampen.
• Nach Abschluss der PCR -Reaktion, Öffnen Sie den Deckel nicht sofort. Warten Sie, bis es sich ausreichend abkühlt.
• Dieses Kit wird nur zur Verstärkung spezifischer Gene in einigen Nicht-Pass-Vögeln verwendet (Geflügel), Für andere verwandte Produkte, Bitte konsultieren Sie Sanli Bio. Dieses Produkt dient nur zur Verwendung von wissenschaftlicher Forschung und ist nicht für klinische Diagnose oder andere Zwecke bestimmt.