Kit di rilevamento dell'acido nucleico per l'identificazione del sesso aviario (Metodo PCR)

• oggetto numero： AN2206001
• Specifica：48T 100T

Introduzione al prodotto：

Questo kit può amplificare specifici frammenti di acido nucleico da campioni come le piume, sangue, e tessuto di vari uccelli (Compreso Psittaciformes, Columbiformes, Galliformi, Ciconindes, Gruiformes, e alcuni Anseriformi), usando PCR.

Include un mix master anti-inibizione 2 × Taq PCR (con colorante) e altri componenti richiesti per la PCR. I prodotti amplificati possono essere sottoposti direttamente all'elettroforesi su gel di agarosio per la determinazione dei risultati.

Contenuto del prodotto：

Componenti del reagente	AN2206001-02 （100T）
Reagente c	1ml
Reagente d	1ml
Reagente e	100µl

Condizioni di stoccaggio：

Conservare a -20 ℃, La durata della conservazione è almeno 12 mesi

Elaborazione del campione:

Fare riferimento al kit di estrazione rapida del DNA genomico animale (Per analisi PCR) Manuale di istruzioni da Sanshibio (Numero di prodotto: DP202) per l'elaborazione del campione. Memorizzare i campioni elaborati per un uso successivo.

1. Operazione sperimentale：

• Preparazione del campione (Area di preparazione del campione)
• Estrazione di acido nucleico:
• Seguire le istruzioni da “Kit di estrazione rapida del DNA genomico animale (Per analisi PCR)” o utilizzare qualsiasi altro kit/metodo adatto di estrazione dell'acido nucleico che soddisfi i requisiti. Estrarre acidi nucleici dai campioni elaborati.
• È meglio testare gli acidi nucleici estratti il ​​prima possibile. Tienili sul ghiaccio, o conservarli a 4 ° C o -20 ° C se non immediatamente utilizzati.

2. Preparazione del sistema di reazione (Area aggiuntiva del campione)

2.1 Preparazione della miscela di reazione:

• Calcola il volume dei reagenti necessari in base al numero di campioni.
• La preparazione specifica è la seguente: Pipetta (N × 7.5 µl di reagente di prova C + N × 10 µl di reagente di prova D + N × 1 µl di reagente di prova E) in una tuba di centrifuga pulita. Mescola accuratamente pipettando, e aliquota 18 µl in ogni pozzo di a 0.2 ML Tubo PCR (Tuba centrifuga). (Se ci sono molti campioni, Preparare la miscela in anticipo e conservarla brevemente a 2-8 ° C; usare all'interno 2 ore.)

2.2 Aggiungere 2 µl dell'acido nucleico del campione estratto per ciascuna miscela di reazione, tappo i tubi, Registra i dettagli, e portare il volume totale a 20 µl per reazione. Mescolare bene e centrifuga per 30 secondi prima di posizionare in a Macchina per PCR per amplificazione.

Amplificazione PCR (Area di amplificazione e analisi del prodotto)

Protocollo PCR:

• Denaturazione iniziale a 94 ° C per 3 minuti.
• 32 cicli di: 94°C per 30 secondi (denaturazione), 50°C per 45 secondi (ricottura), 72°C per 50 secondi (estensione).
• Estensione finale a 72 ° C per 8 minuti, Quindi tieni premuto a 4 ° C.
• Raffreddare accuratamente i prodotti di amplificazione a 4 ° C (o rapidamente a -20 ° C per circa 5 minuti) per 15 minuti.

Elettroforesi in gel di agarosio(Usando l'elettroforesi di gel di agarosio orizzontale come esempio)

4.1 Preparare il gel:

Secondo la quantità di gel da lanciare e la concentrazione di gel (1%~ 1,5%), Misura un volume appropriato di tampone elettroforesi (Tae o tbe, Con i numeri di prodotto DA001 o DA002 rispettivamente, o prodotti equivalenti che soddisfano i requisiti), e versalo in un pallone triangolare.

Nota: Il tampone di fusione in gel e il tampone di elettroforesi devono essere coerenti.

4.2 Pesare con cura l'agarosio (Numero di prodotto: Sì003, o un marchio equivalente), e aggiungilo al pallone. Coprire il pallone con carta pergamena o filmare il film e sciogliere l'agarosio riscaldandolo in un forno a microonde. Riscaldare fino a ebollizione, Indossare guanti resistenti al calore, e gira delicatamente il pallone. Ripeti fino a quando l'agarosio non viene completamente sciolto.

Nota: Il processo di dissoluzione dell'agarosio dovrebbe utilizzare più brevi bollette per evitare che la soluzione si surriscalda e bolle. Assicurarsi che l'agarosio sia completamente sciolto per evitare di causare immagini di elettroforesi poco chiare.

4.3 Aggiungi colorante di acido nucleico (Numero di prodotto: Sì004, o un marchio equivalente) all'agarosio completamente disciolto.

4.4 Versare la soluzione di agarosio in un vassoio di fusione in gel e inserire un pettine in posizioni appropriate. Lo spessore del gel dovrebbe essere tra 3 A 5 mm.

4.5 Consenti al gel di solidificarsi a temperatura ambiente (Di 30 minuti a 1 ora). Rimuovere con cura il pettine e posizionare il gel in un serbatoio di elettroforesi pre-riempita con tampone elettroforesi.

Elettroforesi e caricamento del campione:

4.6 Carico 5 µl di marker di DNA (Numero di prodotto: Sì005, o un marchio equivalente) E 10 µl dei prodotti di amplificazione raffreddati nei pozzi. Dopo aver caricato tutti i campioni, Lascia stare 2 minuti prima di accendere l'alimentazione. Imposta la tensione (70-120V) e tempo di esecuzione (20-30 minuti) Secondo le condizioni.

Interpretazione del risultato

Determinare i risultati:

• Se una singola band appare approssimativamente 700 p.b, Il campione è determinato per essere maschio.
• Se due bande amplificate appaiono intorno a 700 bp e 400 bp (o solo una banda amplificata appare intorno a 400 bp), Il campione è determinato per essere femmina.
• Se non sono visibili bande, I geni specifici per l'identificazione di genere aviario non sono stati rilevati nel campione. Si consiglia di rifare l'estrazione e l'amplificazione dell'acido nucleico o contattare il supporto tecnico del produttore per l'assistenza.

Precauzioni：

• Per prevenire la contaminazione, L'esperimento dovrebbe essere rigorosamente partizionato, con isolamento fisico tra zone diverse per evitare la contaminazione incrociata causata da fattori umani. Indossare cappotti da laboratorio e guanti in lattice durante l'esperimento, e utilizzare strumenti separati in diverse aree. I guanti e i cappotti da laboratorio dovrebbero essere cambiati quando si muove tra le aree.
• I reagenti dovrebbero essere completamente scongelati prima dell'uso, Ma dovrebbero essere evitati ripetuti cicli di congelamento. Seguire le istruzioni rigorosamente per la preparazione del reagente e l'aggiunta del campione. Banchi di lavoro, centrifughe, Pipette, e altri strumenti dovrebbero essere regolarmente disinfettati usando disinfettanti contenenti cloro, etanolo, agenti di decontaminazione dell'acido nucleico, o lampade UV.
• Dopo aver completato la reazione PCR, Non aprire immediatamente il coperchio. Attendi che si raffreddi sufficientemente prima di aprirsi per evitare la contaminazione dell'aerosol nella massima misura possibile.
• Questo kit viene utilizzato solo per amplificare i geni specifici in alcuni uccelli non passantili (pollame), Per altri prodotti correlati, Si prega di consultare Sanli Bio. Questo prodotto è solo per uso di ricerca scientifica e non è destinato alla diagnosi clinica o ad altri scopi.