Спецификация
ДНК-полимераза Taq 1000 U со смешанным буфером (Доставка с ледоколом)
Хранилище Условия:
ДНК -полимераза TAQ и TAQ ПЦР Наборы должны храниться в -30 до -15 ° C в морозильной камере с постоянной температурой при получении.
Тест:
Примечания перед началом:
- Предоставлен буфером ПЦР, содержащий реагент для загрузки геля и красители для отслеживания геля.
- Буфер ПЦР и буфер ПЦР даст конечную концентрацию 1.5 MM MGCL2 в реакционной смеси. При необходимости отрегулировать концентрацию MG2+, добавив, добавив 25 ММ МГЛ2.
- Высококачественная смеси DNTP PCR-класса DNTP (10 мм) доступен отдельно при необходимости.
- Держите трубки ПЦР на льду, пока не помещают в термоцикл.
- Включите управление NO шаблона (NTC) в каждом анализе.
Подготовка и смешивание:
- Оттаивание буферов и реагентов при комнатной температуре или на льду, Затем держите их на льду после полного оттаивания.
- Приготовьте реакционную смесь, содержащую все компоненты ПЦР, кроме матрицы ДНК. Подготовить 10% больше объема, чем требуется.
- Тщательно перемешать реакционную смесь и распределить его в трубки ПЦР.
- Добавить шаблон ДНК (≤1 мкг/реакция) в ПЦР -трубки. Для RT-PCR, Добавить аликвоту из реакции обратной транскриптазы, не превышает 10% окончательного объема ПЦР.
Настройка реакции с использованием ДНК -полимеразы Seno Taq
| Компонент | Объем/реакция | Конечная концентрация |
| Реакционная смесь | ||
| 10x ПЦР -буферˢ или | 10 мкл | 1Икс |
| 10x нагрузочный буфер ПЦР(необязательный) | ||
| DNTP Mix (10 мм каждого) | 2 мкл | 200 мкм каждого DNTP |
| Праймер1 | Переменная | 0.1–0,5 мкм |
| Праймер2 | Переменная | 0.1–0,5 мкм |
| ДНК-полимераза Taq | 0.5 мкл | 2.5 единицы/реакция |
| Вода без РНКазы | Переменная | |
| ДНК шаблона (добавлен на шаг 4) | Переменная | ≤1 мкг/реакция |
| Общий объем реакции | 100 µlˢ² |
Тепло Велосипед:
Программа термического цикла в соответствии с инструкциями производителя. Обратитесь к предоставленной программе езды на велосипеде.
Оптимизированные условия циклирования для ДНК -полимеразы TAQ
| Шаг | Время | Температура | Комментарий |
|---|---|---|---|
| Начальная денатурация | 3 мин | 94°С | |
| 3-шаг езда на велосипеде: | |||
| Денатурация | 0.5–1 мин | 94°С | |
| Отжиг | 0.5–1 мин | 50–68 ° C. | Примерно на 5 ° C ниже TM праймеров. |
| Расширение | 1 мин | 72°С | Для продуктов ПЦР дольше, чем 1 КБ, Используйте время продления приблизительно 1 мин на КБ ДНК. |
| Количество циклов | 25–35 | ||
| Окончательное расширение | 10 мин | 72°С |
Упрощен Горячий старт:
Начать ПЦР -программу. Как только термоцикл достиг 94 ° C, Поместите трубки ПЦР в циклере для улучшения специфичности.
Пост-ПЦР:
- После усиления, Образцы могут храниться при 2–8 ° С в течение ночи или при -20 ° С для более длительного хранения.
- Продукты ПЦР могут быть непосредственно загружены на агарозное гель с использованием буфера для ПЦР нагрузки без предварительного добавления буфера для погрузки и гель-склеивания. Обратитесь к предоставленной таблице для расстояния миграции и красителей для отслеживания геля.
Расстояние миграции от красителей для отслеживания геля в буфере ПЦР нагрузки
| % Тэ (Поступил) агароза гель | Красный краситель | Оранжевый краситель |
| 0.8 | 500 (270) б.п. | ~ 80 (<10) б.п. |
| 1.0 | 300 (220) б.п. | ~40 (<10) б.п. |
| 1.5 | 250 (120) б.п. | ~20 (<10) б.п. |
| 2.0 | 100 (110) б.п. | <10 (<10) б.п. |
| 3.0 | 50 (100) б.п. | <10 (<10) б.п. |
Отзывы
Отзывов пока нет.