Набор для извлечения геномной ДНК из стула или почвы

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0241	SN0242
Колонки для экстракции ДНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Реагент для удаления гуминовой кислоты I	50мл	2х50мл
Реагент для удаления гуминовой кислоты II	50мл	2х50мл
Реагентный буфер Ⅳ	30 мл	2×30 мл
Реагентный буфер C plus	30 мл	2×30 мл
Буфер удаления ингибитора	30мл	2х30мл
Лизоцим	1мл	2х1мл
Протеиназа К	1мл	2х1мл
РНКаза А	1мл	2х1мл
Промывной буфер 1	15 мл	2 × 15 мл
Элюирующий буфер	20 мл	2 ×20 мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) и в сухих условиях, со сроком годности 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в течение 1 год в прохладной и сухой среде. Лизоцим, Протеиназа К, и РНКаза А содержат консерванты, возможность транспортировки при комнатной температуре, но для длительного хранения, их следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор реагентов предназначен для исследований в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора реагентов содержат раздражители.. Рекомендуются защитные меры, такие как ношение защитной одежды и очков..

3.3 Во время использования этого набора реагентов, высокоскоростная центрифуга, водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, стерильная деионизированная вода, и EP-трубки должны быть подготовлены пользователем..

4. Знакомство с набором реагентов

Этот набор обеспечивает быстрый и эффективный метод очистки микробной геномной ДНК из почвы., фекалии, и образцы рвоты. Он широко используется для извлечения микробной ДНК из почвы., фекалии, и рвота.

 

Этот набор эффективно удаляет примеси и ингибиторы из пробы., снижение тормозных реакций в последующих экспериментах, таких как ПЦР. Весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа.. Извлеченную ДНК можно напрямую использовать для ПЦР., Саузерн-блоттинг, и другие приложения.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Прежде чем начать эксперимент:

А. Реагентный буфер IV может выпадать в осадок в условиях низких температур. Мы рекомендуем нагревать при температуре 65℃для 5 минуты. После растворения осадка, его можно использовать нормально.

Б. Перед использованием, добавьте указанное количество безводного этанола в Промывной буфер 1 как указано на этикетке бутылки. Отметьте галочкой на этикетке, что указано добавление безводного этанола..

С. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решение содержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА может повлиять на последующие эксперименты, рекомендуется заменить элюционный буфер стерильной деионизированной водой..

1. Образец обработки (Удаление ингибитора):

А. Образцы фекалий и рвоты: Добавьте примерно 200 мг образца, который необходимо экстрагировать., добавлять 1мл реагента для удаления гуминовой кислоты I, тщательно перемешать для 1-2 минуты, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты, выбросить супернатант, добавлять 560мкл буфера IV к грануле, перевернуть и тщательно перемешать, переваривать при 85℃ для 5 минуты, перевернуть и перемешать 6-7 раз во время пищеварения, затем перейдите к шаг 2.

Б. Образцы почвы: Вес примерно 0,1 г.-0.5г просеянной почвы, добавлять 500мкл буфера IV и 100 мкл реагента для удаления гуминовой кислоты I, перевернуть и тщательно перемешать, переваривать при 85℃ для 5 минуты, перевернуть и перемешать 6-7 раз во время пищеварения, затем перейдите к шаг 2.

(Примечание: Реагент для удаления гуминовой кислоты I/Реагент для удаления гуминовой кислоты II в основном используется для почв с высоким содержанием гуминовых кислот, такие как лесные почвы и осадочные почвы. Добавлять 1мл реагента для удаления гуминовой кислоты I к образцу, вихрь, трясти за 1-2 минуты, центрифуга в 8,000 об/мин для 2 минуты, выбросить супернатант, затем добавьте 1мл реагента для удаления гуминовой кислоты II, вихрь, центрифуга в 8,000 об/мин для 2 минуты, выбросить супернатант. This step can further reduce soil humic acid inhibitors but significantly reduce DNA yield.)

2. Центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты, перенесите супернатант в новую центрифужную пробирку (перенесено около 500 мкл жидкости), добавить 20 мкл протеиназы К (10 мг/мл), 20мкл Лизоцим, и 20 мкл РНКазы А, и инкубировать при 65℃ в течение 2 минуты.
3. Добавьте равный объем Реагент Буфер С плюс (перенесено около 560 мкл жидкости) к лизату, хорошо перемешать. Если появился белый осадок, пусть все уладится; это не повлияет на последующие эксперименты после исчезновения осадка.
4. Добавьте равный объем этанола в Реагент Буфер С плюс (например, добавлять 560мкл Реагент Буфер С плюс, затем добавьте 560 мкл этанола), хорошо перемешать. Могут быть осадки, но это не повлияет на последующие эксперименты.
5. Добавьте полученную жидкость в колонку для экстракционной очистки ДНК. (рукав) (примерно 650-700 мкл каждый раз), центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить собранную отработанную жидкость, и снова вставьте пробирку для сбора в колонку для экстракционной очистки ДНК. (рукав) для следующего шага.
6. Добавлять 400мкл буфера для удаления ингибитора, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить отработанную жидкость, and reinsert the очистка ДНК column into the sleeve for the next step.
7. Добавлять 500мкл промывочного буфера 1 в колонку очистки экстракции ДНК (рукав), центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 1 минута.
8. Добавлять 300мкл промывочного буфера 1 снова в колонку очистки экстракции ДНК (рукав), центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 2 минуты.
9. Поместите колонку для очистки экстракции ДНК (рукав) в новую центрифужную пробирку, открыть крышку, и инкубировать при 65℃ в течение 2 минуты. При необходимости этот этап можно продлить, чтобы максимально выпарить этанол, чтобы остатки этанола не влияли на последующие эксперименты..
10. Капать 100мкл элюирующего буфера на мембрану, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты.

(Примечание: 1. Элюирование ДНК 50 мкл элюирующего буфера может увеличить концентрацию ДНК, но снизить общий выход ДНК.; 2. Элюированную ДНК можно повторно нанести на колонку для экстракционной очистки ДНК., снова центрифугировали при 12,000 об/мин для 2 минуты, и собираются для увеличения выхода ДНК.)