Пероксидаза (ПОД) Набор для анализа активности

Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..

Операционное оборудование: Спектрофотометр Номер каталога: BC0090 Размеры：50Т/48С

Компоненты:

Экстракт раствора: 60 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент I: 40 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент II: 0.5 мл ×1. Хранение при 4℃. Центрифуга перед использованием. Брать 0.22 мл реагента II и добавить 3.33 мл реагента I, Смешайте его для последующего использования (около 27 т). Подготовьте его для немедленного использования, или это может быть подготовлено пропорционально в соответствии с объемом образца.

Реагент III: 10 мл×1. Хранение при 4℃.

Описание продукта

Пероксидаза (ПОД, ЕС 1.11.1.7) широко существует у животных, растения, и микроорганизмы. Он может катализировать окисление фенолов и аминов перекисью водорода, и имеет двойной эффект устранения токсичности перекиси водорода, фенолы, и амины. В присутствии перекиси водорода, POD может катализировать H2O2 окислять специфические субстраты для получения одного вещества, которое имеет поглощение при 470 нм.

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки

Спектрофотометр, настольная центрифуга, трансфертер, 1 стеклянная кювета мл, ступка/гомогенизатор, лед и дистиллированная вода.

Процедура

я. Базовые приготовления:

А. Бактерии или клетки

Сбор бактерий или клеток в центрифужную трубку, Супернатант отбрасывается после центрифугирования. Предлагается взять на себя 5 миллион бактерий/клетки и добавить 1 мл раствора экстракта. Бактерии или клетки разделяются ультразвуком (Власть: 20% или 200 Вт, время работы 3с, интервал 10 с, повторить для 30 раз). Центрифуга в 8000 rpm и 4 ℃ для 10 минуты, Супернатант используется для тестирования.

Б. Салфетка

Рекомендуется взять на себя 0.1 г ткани и добавить 1 мл раствора экстракта, полностью шлифовать на льду.

Центрифуга в 8000 об/мин для 10 минут при 4℃, Супернатант используется для тестирования.

С. сыворотка (плазма) образец: Обнаружение образца

II. Определение процедура

1. Предварительно разогрейте спектрофотометр для 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 470 нм, установить ноль с дистиллированным
2. Поместите реагент i, Реагент II и реагент III при 37 ℃ (млекопитающее) или 25℃(другие виды) для 10 минуты до этого
3. Добавьте реагенты из следующего списка:

Название реагента (мкл)	Пробирка
Образец	15
Дистиллированная вода	270
Реагент I	520
Реагент II	130
Реагент III	135

Вышеупомянутые реагенты добавлены в 1 ML Стеклянная кювета в последовательности, немедленно смешанный и рассчитанный. Значения поглощения A1 для 30 S и A2 для 90 -х годов в 470 НМ записаны, ΔA ＝ A2-A1.

III. Расчеты

я. сыворотка (плазма)образец

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество фермента, катализирующих поглощение 0.01 изменить в 470 NM в реакционной системе в минуту каждый миллилитр сыворотки (плазма).

ПОД(Ед/мл)= ΔA × VRV ÷ vSV ÷ 0,01 ÷ T = 7133 × ΔA

II. Салфетка, бактерии или культурные клетки

А. Концентрация белка

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество фермента, катализирующих поглощение 0.01 изменить в 470 NM в реакционной системе в минуту каждый миллиграмм белок.

ПОД(Ед/мг прот)＝ ΔA × VRV ÷(VSV × CPR)÷ 0,01 ÷ t = 7133 × ΔA ÷ cpr

Б. Вес образца

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество фермента, катализирующих поглощение 0.01 изменить в 470 NM в реакционной системе в минуту каждую грамм -ткань.

ПОД(U/g свежий вес)＝ ΔA × VRV ÷(W × vsv ÷ vs)÷ 0,01 ÷ t = 7133 × ΔA ÷ w

С. Cellamount

Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество фермента, катализирующих поглощение 0.01 изменить в 470 NM в системе реакции в минуту каждый 10 тысяча бактерий или клетки.

ПОД(Ячейка U / 104)＝ ΔA × VRV ÷(500× vsv ÷ vs)÷ 0,01 ÷ t = 14,27 × ΔA

Веревка: Общий объем реакции, 1.07 мл; Всв: Общий объем супернатанта, 0.015 мл; Против: Извлеките объем раствора, 1 мл;

Т: Время реакции, 1 минута;

КПР: Концентрация белка образца, мг/мл; Вт: Вес образца, г;

500: Общее количество бактерий или клеток, 5 миллион.

Примечание:

1. Если есть много образцов, которые будут определены за один раз, смесь реагента I, II, III и дистиллированная вода могут быть приготовлены пропорционально, и смесь может быть размещена на 37 ℃ (млекопитающее) или 25℃ (другие виды) Для более чем 10 минуты. 15 мкл образца и 1055 мкл смеси может быть добавлена ​​для определения.
2. Если ΔA меньше, чем 0.005, Время реакции может быть расширено на 5 минуты. Если ΔA больше, чем 0.5 или в реакционном растворе больше пузырьков, образец можно разбавить экстрактом и определить, и формула расчета умножается на соответствующее разведение.
   

   Рекомендации

   • Ведущий . Активность пероксидазы как биохимический маркер для сопротивления мускуса ( Огурец Мело ) Pseudoperonospora cubensis[Дж]. Фитопатология, 1992,82(7).
   • Doerge D r , Divi r l , Черчвелл м я . Идентификация цветного продукта окисления гваакола, полученного пероксидазами[Дж]. Аналитическая биохимия, 1997,250(1):10-17.

   сопутствующие товары

   BC0190/BC0195 Полифенолксидаза (PPO) Набор для анализа активности BC0210/BC0215 Фенилаланин аммиак лиаза (Приятель) Набор для анализа активности BC0170/BC0175 Супероксиддисмутаза (ДЕРН) Набор для анализа активности BC0200/BC0205 Каталаза (КОТ) Набор для анализа активности