| Атрибут | Подробности |
|---|---|
| Номер кошки | SN0020 |
| Размер | 50Т/100Т |
| Хранилище | Хранится в 4 °C для кратковременного хранения. Для более длительного хранения, комплект можно хранить в -20 °С или -80 °С. |
Компоненты комплекта
| Компоненты | 50Т | 100Т |
| Лизисный буфер | 100мл | 200мл |
| Реагент А | 2.5мл | 5мл |
| Средний буфер | 25мл | 50мл |
| Сохранить буфер | 5мл | 10мл |
Описание продукта
- Изолирует чистые ядра из клеток и тканей животных. (мягкий: печень/мозг, жесткий: мышца, культурный)
- Приложения: гибель клеток (апоптоз), сигнализация, обмен веществ & исследования белка
- Ядра, свободные от белка & загрязнение нуклеазой
Протокол
Базовые приготовления:
- Ткани:
- Возьмите 100-200 мг свежих тканей. (печень, мозг, сердце)
- Промыть PBS/физраствором, сухой, разрезать на мелкие кусочки
- Гомогенизируйте с 1 мл предварительно охлажденного буфера Ly10is. & 50мкл Реагент А (ледяная ванна, 20Икс)
- Культивированные клетки:
- Переварить и промыть клетки
- Центрифуга (5-10мин, 800г), отбросить супернатант, собирать & считать клетки
- Ресуспендировать 5×10^7 клеток в 1 мл предварительно охлажденного лизирующего буфера
- Добавьте 50 мкл реагента А., гомогенизировать (ледяная ванна, 20-30Икс)
Ядерная изоляция:
- Перенесите гомогенат в центрифужную пробирку объемом 1,5 мл..
- Центрифуга (5мин, 700г, 4°С), отбросить супернатант (ядерная таблетка остается).
- Ресуспендируйте ядерный осадок с помощью 0,5 мл предварительно охлажденного лизирующего буфера..
- Перенесите в новую пробирку, содержащую 0,5 мл среднего буфера. (тщательно наслоено).
- Центрифуга (5мин, 700г, 4°С), отбросить супернатант (ядерная таблетка остается).
- Ресуспендируйте ядерный осадок в 5 мл среднего буфера..
- Центрифуга (10мин, 1000г, 4°С), отбросить супернатант (осадок очищенных ядер).
Хранилище:
- Ресуспендируйте очищенные ядра в 50–100 мкл буфера Store или желаемого буфера..
- Ядра готовы к использованию или могут храниться при температуре -70°C.
Примечания:
Обеспечение полноты ядер:
- Низкая температура: Всю процедуру проводите при низкой температуре..
- Скорость: Работайте быстро на протяжении всего процесса.
- Разрушение клеток: Ключевым моментом является разрушение клеток, не повреждая органеллы..
- Ткани: Используйте стеклянный гомогенизатор небольшой емкости с плотно прилегающим пестиком для эффективной гомогенизации..
- Культивированные клетки: Разрушение прикрепившихся клеток является более сложной задачей.. Используйте небольшой гомогенизатор и плотный пестик для достижения оптимальных результатов..
Центрифугирование:
- Рассчитайте правильную скорость центрифуги (об/мин) на основе желаемой относительной центробежной силы (RCF или перегрузка) используя формулу:
- Г = 1.11 х 10^-5 х Р х (об/мин)^ 2
- г: РШФ (г)
- об/мин: Оборотов в минуту (в квадрате)
- р: Радиус ротора (см)
Последующие приложения:
-
- Для вестерн-блота и 2D-PAGE, напрямую лизировать образец ядра, добавив загрузочный буфер.
сопутствующие товары
P1020 1×ПБС, PH7.2-7.4, 0.01М
P1015 Паспорт безопасности-Буфер загрузки страницы,4×(с DTT)
SM0020 Набор для экстракции митохондрий
Отзывы
Отзывов пока нет.