| Atributo | Detalles |
|---|---|
| Número de gato | SN0020 |
| Tamaño | 50T/100t |
| Almacenamiento | Almacenado en 4 ° C para almacenamiento corto. Para un almacenamiento más largo, El kit se puede almacenar en -20 ° C o -80 °C. |
Componentes del kit
| Componentes | 50t | 100t |
| Tampón de lisis | 100ml | 200ml |
| Reactivo A | 2.5ml | 5ml |
| Amortiguador medio | 25ml | 50ml |
| Búfer de almacenamiento | 5ml | 10ml |
Descripción del Producto
- Aísla los núcleos puros de las células y tejidos animales (suave: hígado/cerebro, duro: músculo, culto)
- Aplicaciones: muerte celular (apoptosis), señalización, metabolismo & estudios de proteínas
- Núcleos libres de proteínas & contaminación de nucleasa
Protocolo
Preparación de la muestra:
- Tejidos:
- Tome 100-200 mg de tejido fresco (hígado, cerebro, corazón)
- Lavar con PBS/solución salina, seco, Cortar en trozos pequeños
- Homogeneizar con 1 ml de tampón Ly10is precoludido & 50µl reactivo A (bañera de hielo, 20X)
- Células cultivadas:
- Digest y células de lavado
- Centrífugo (5-10mín., 800gramo), descartar sobrenadante, recolectar & células de cuenta
- Resuspend 5×10^7 células en 1 ml de tampón de lisis precoludido
- Agregue un reactivo de 50 µl a, homogenizar (bañera de hielo, 20-30X)
Aislamiento nuclear:
- Transferir homogeneizado a un tubo de centrífuga de 1.5 ml.
- Centrífugo (5mín., 700gramo, 4°C), descartar sobrenadante (permanece).
- Resuspender el sedimento nuclear con tampón de lisis precoludido de 0.5 ml.
- Transferir a un tubo nuevo que contiene 0,5 ml de tampón medio (en capas cuidadosamente).
- Centrífugo (5mín., 700gramo, 4°C), descartar sobrenadante (permanece).
- Resuspender el sedimento nuclear con 5 ml de amortiguador medio.
- Centrífugo (10mín., 1000gramo, 4°C), descartar sobrenadante (pellet de núcleos purificados).
Almacenamiento:
- Resuspend núcleos purificados en tampón de almacén de 50-100 μl o tampón deseado.
- Los núcleos están listos para su uso o se pueden almacenar a -70 ° C
Notas:
Garantizar núcleos completos:
- Temperatura baja: Realizar el procedimiento completo a baja temperatura.
- Velocidad: Trabajar rápidamente durante todo el proceso.
- Interrupción celular: La clave es romper las células sin dañar los orgánulos.
- Tejidos: Use un homogeneizador de vidrio de pequeña capacidad con un mazón ajustado para una homogeneización eficiente.
- Células cultivadas: Romper las células adherentes es más desafiante. Utilice el pequeño homogeneizador y la maja ajustada para obtener resultados óptimos.
Centrifugación:
- Calcule la velocidad centrífuga correcta (Rpm) Basado en la fuerza centrífuga relativa deseada (RCF o G-Force) Usando la fórmula:
- G = 1.11 x 10^-5 x r x (Rpm)^2
- GRAMO: RCF (gramo)
- Rpm: Rotaciones por minuto (cuadrado)
- Riñonal: Radio del rotor (cm)
Aplicaciones aguas abajo:
-
- Para Western Blot y 2d Page, directamente lisa la muestra nuclear agregando tampón de carga.
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