Соларбио Гидроксипролин (ГИП) Набор для анализа активности

Гидроксипролин (ГИП) Набор для анализа активности

Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..

Оборудование обнаружения: Спектрофотометр/считыватель микропланшетов

Кот нет: BC0255

Размер: 100Т/96С

 

Компоненты:

Экстракт раствора: 6 моль/л соляная кислота (HCl), Самоупомянутый реагент. Концентрированный HCl (37%) : H2O(V/V) =1:1, хранятся при комнатной температуре.

Реагент I: 8 мл×1, хранить в 4 ℃ и защитить от света. Реагент II: 8 мл×1, хранить в 4 ℃ и защитить от света. Стандартный: 0.5 мл×1, 0.5 мг/мл гидроксипролин, хранить при 4℃.

Описание:

HYP is one of the main components of collagen in the body. Большая часть коллагена распределена в коже, сухожилие, хрящ, и кровеносные сосуды и др.. Поэтому, Содержание HYP является важным индексом, отражающим метаболизм и степень фиброза ткани коллагена.

Образец гидролизуется для получения свободного HYP, который дополнительно окисляется хлорамином T. Окисленный продукт реагировал с п-диметиламинобензальдегидом с образованием красного соединения с характерным пиком поглощения в 560 нм. The content of HYP can be calculated by measuring the absorption value of sample hydrolysate at 560 нм.

Требуется, но не предусмотрено:

Шкалы, печь, Стеклянная трубка, центрифуга, водяная баня, Спектрофотометр/считыватель микропланшета, Микростексовая кювета/96-луночная тарелка, 6 моль/л hcl и дистиллированная вода.

Процедура:

я. Базовые приготовления

1. 1. Образец ткани:

Взвесить около 0.2 G образца в стеклянную трубку, Разрежьте ткань на кусочки как можно больше для пищеварения. Добавлять 2 мл раствора экстракта и крышка слегка свободно и не герметично, варить или испечь в 110 ℃ духовке для 2 к 6 часы, чтобы переваривать его, пока не появится видимый большой комок.

После охлаждения, отрегулировать pH до 6-8 с 10 Моль/л Нао (Не переутомляйте кислоту или над щелочью) затем постоянный объем до 4 мл с дистиллированной водой. Центрифугирование в 16000 об/мин для 20 minutes at 25℃ (Если после центрифугирования все еще есть нечистота, он может быть удален фильтрацией).

Возьмите супернатант для тестирования. (Черное вещество может быть сформировано в процессе, и если его нельзя переваривать в течение длительного времени, это может быть карбонизированное вещество. Это не влияет на эксперимент).

2. Клетки:

Брать 5 миллион клеток, добавлять 1 мл раствора экстракта, кипение, or oven at 110℃ for 2 к 6 часы переварить в прозрачное состояние.

После охлаждения, отрегулировать pH до 6-8 с 10 Моль/л Нао (Не переутомляйте кислоту или над щелочью) затем постоянный объем до 2 мл с дистиллированной водой. Центрифугирование в 16000 об/мин для 20 minutes at 25℃ (Если после центрифугирования все еще есть нечистота, он может быть удален фильтрацией).

Возьмите супернатант для тестирования.

II. Обнаружение

1. Предварительный нагрев спектрофотометра/считывателя микропланшетов для 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 560 NM и установить ноль с дистиллированным
2. Разбавить стандартный раствор 30, 15, 7.5, 3.75, 1.875, 0.938, 0.469, 0.234 мкг/мл.
3. Добавить реагенты в качестве следующей таблицы.

Реагент (мкл)	Пустая трубка (Б)	Пробирка (Т)	Стандартная трубка (С)
Образец	—	60	—
Стандартный	—	—	60
Реагент I	60	60	60
Хорошо перемешайте и оставьте при комнатной температуре для 20 минуты.
Реагент II	60	60	60
дистиллированная вода	180	120	120

Хорошо перемешать, инкубировать в 60 ℃ для 20 минуты, оставить это при комнатной температуре для 15 минуты, Возьмите 200 мкл реакционного раствора в Micro Glass Cuvette/96 сквозной пластины с плоской дном и проверьте значение поглощения AT 560 нм. ΔA = в — АБ.

III. Расчет

1. Создание стандарта

При составлении стандартной кривой, Концентрация стандартного раствора принимается в качестве оси x, и Δas (Δas = as-ab) принимается как ось Y. Линейное уравнение y = kx+b получается. Возьмите ΔAt (At-Ab) к уравнению, чтобы приобрести x.

2. Расчет содержания гидроксипролина:рассчитывается в соответствии со свежим весом образца:

Содержание гидроксипролина ткани (мкг/г свежий вес) = x × vs ÷(W × vs ÷ vte) = 4x ​​÷ w.

• Рассчитано в соответствии с концентрацией белка образца:

Содержание гидроксипролина ткани (мкг/мг прот) = x × vs ÷(Цпр×ВС) = x÷Cpr.

• Рассчитано по количеству бактерий:

Содержание клеточного гидроксипролина (мкг/104 ячейка) = x × vs ÷(N × vs ÷ vce )= 2x ÷ n.

ПРОТИВ: Объем добавленного образца, 0.06 мл;

Вт: Объем раствора экстракта ткани, 4 мл; Vce: Объем раствора клеточного экстракта, 2 мл;

Вт: Свежий вес образца, г;

Н: Количество ячеек,104 как единицы, 10000;

КПР: Концентрация белка образца, мг/мл.

Примечание

1. Если значение OD больше, чем 1.0, образец должен быть разбавлен должным образом, а затем определен. Обратите внимание на умножение множественного разбавления в формуле расчета.
2. Реагент имеет определенную токсичность. Пожалуйста, принимайте защитные меры во время операции, чтобы предотвратить вдыхание или контакт с кожей.
3. При расчете в соответствии с концентрацией белка образца, белок в сам образец должен быть извлечен отдельно и определяется.

Экспериментальные примеры

• 0.2g of mouse leg is taken for sample treatment, и супернатант вынимают и эксплуатируют в соответствии с этапами определения. ΔA = at-ab = 0.177-0.06 "=" 0.117 измеряется 96 колодезная пластина, и стандартная кривая y = 0,0383x + 0.022 привезен, и x = 2.48 является

Содержание гидроксипролина в ткани (мкг/г масса) = 4x ​​÷ w = 4 × 2.48 ÷ 0.2 "=" 49.6 мкг/г масса.

Recent Product Citations

• Литонг вентилятор,Цзякин Чен,Янменг Дао,и другие. Усиление хондрогенной дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток и восстановления хряща грелином. Журнал ортопедических исследований. Январь 2019;(IF3.043)

сопутствующие товары

BC1550/BC1555 Глютамино-пирувическая трансаминаза (Гф) Комплект анализа активности BC1560/BC1565 Глутамино-оксалакусная трансаминазаза (ПОЛУЧИЛ) Набор для анализа активности BC0290/BC0295 PLINE (Профиль) Набор для анализа содержания

BC1570/BC1575 Аминокислота (Аа) Комплект для анализа контента BC0180/BC0185 Cysteine (Cys) Комплект для анализа контента BC1580/BC1585 Глутаминовая кислота (Глю) Набор для анализа содержания

Технические характеристики:

Detection Limit: 0.057 мкг/мл

Линейный диапазон: 0.117-30 мкг/мл