Голубиный герпесвирус (ПиВС) Набор для тестирования нуклеиновых кислот (УНГ, Метод ПЦР-флуоресцентного зонда)

предмет номер: АП2409002 Спецификация: 50Т/100Т Хранилище: -20℃

Внедрение продукции:

Голубиный герпесвирус (ПиВС) — вирусное инфекционное заболевание, поражающее преимущественно молодых голубей, вызываемое вирусом герпеса типа Pigeon Herpesvirus. 1 (ПиХВ1). Это важный патоген, приводящий к синдрому болезни голубей у молодых голубей.. Клинически, для него характерны такие симптомы, как воспаление носа и конъюнктивы.. Зараженные голуби также могут проявлять депрессию., снижение аппетита, диарея, рвота, и неврологические симптомы. Поэтому, рано, стремительный, и удобное обнаружение PiHV имеет решающее значение для диагностики, замедление распространения заболевания, и предотвращение осложнений. Этот тестовый набор разработан на основе консервативных последовательностей гена PiHV., с оптимизированными условиями, обеспечивая точные количественные флуоресцентные ПЦР тестирование орального, клоакальные мазки, кровь, и другие образцы тканей птиц. Это позволяет быстро определить, заражен ли хост PiHV..

Содержание продукта:

Условия хранения:

Хранить при -20℃, срок годности не менее 12 месяцы.

Экспериментальная эксплуатация:

1. Базовые приготовления (Зона подготовки проб)

1.1 Образцы требований:

-Оральный/локальный мазок: Используйте стерильный ватный тампон, чтобы вставить его в горло или клоаку птицы., вращаясь три раза. Выньте его и поместите в центрифужную пробирку., вырезание открытой части, затем надежно закройте пробирку и промаркируйте ее.. Образцы, которые можно протестировать в течение 24 часы можно хранить при температуре 2-8°C; образцы, которые невозможно протестировать быстро, следует хранить при температуре -20°C..

-Цельная кровь: Используйте ЭДТА в качестве антикоагулянта.; не используйте гепарин. Требуется свежая цельная кровь, или его можно хранить при температуре 2-8°С не более 7 дни, или при температуре -20°С не более 3 месяцы. Повторных циклов замораживания-оттаивания следует избегать, насколько это возможно..

-Салфетка: Берут свежую ткань печени, не более 100 мг, и приготовьте гомогенат ткани, используя 200-500 мкл стерильной воды для последующей подготовки проб..

1.2 Базовые приготовления:

Обратитесь к Саншибио «Набор для быстрого извлечения ДНК генома животных (для ПЦР-анализа) Руководство» (Каталожный номер.: ДП202), или другие наборы/методы для экстракции нуклеиновых кислот, отвечающие соответствующим требованиям., для извлечения нуклеиновых кислот из обработанных образцов. Извлеченные образцы нуклеиновой кислоты следует поместить в холодильник и протестировать как можно скорее.; их можно хранить при температуре 4°С не более 7 суток или при температуре -20°С не более 6 месяцы.

2. Подготовьте реакционную систему (Область добавления образца)

2.1 Достаньте каждый компонент комплекта., полностью оттаять при комнатной температуре, и центрифуга для 10 секунды, чтобы собрать жидкость со стенок пробирки и крышек внизу. Подготовьте реакционную систему в соответствии с количеством образцов. (п+2) (то есть, n тестовых образцов + 1 положительный контроль + 1 отрицательный контроль). Конкретно, подготовить (п+2) ПЦР-пробирки, дозирование 23 мкл реагента для тестирования PiHV в каждую пробирку, и храните их в холодильнике для дальнейшего использования..

2.2 Затем, последовательно добавьте 2 мкл отрицательного контроля., выделенная нуклеиновая кислота образца, и положительный контроль PiHV к тестируемому реагенту. Надежно закройте пробирки и запишите информацию.; общий объем для каждой реакции должен составлять 25 мкл.. Тщательно перемешать, центрифуга для 10 секунды, и провести эксперимент по амплификации в приборе ПЦР.

3. ПЦР-амплификация (Область амплификации и анализа продуктов)

50°C Обеззараживание ферментами UNG для 2 минуты; 95°C предварительная денатурация для 2 минуты; 95денатурация °C для 10 секунды, с последующим отжигом при 60°C и удлинением для 35 секунды, для 40 циклы, сбор сигналов флуоресценции при 60°C. Выберите канал флуоресценции FAM (при использовании серии ABI или аналогичных инструментов количественной ПЦР в реальном времени, при необходимости свяжитесь с производителем заранее или добавьте калибровочный краситель ROX самостоятельно; в противном случае, следуйте обычной процедуре).

4. Определение результата

4.1 Условия проверки экспериментальных результатов:

Значение Ct канала FAM положительного управления < 28 и демонстрирует «С» фигурная кривая усиления; отрицательный контроль не имеет значения Ct или значение Ct ≥ 38 и нет «С» фигурная кривая усиления, указание действительных результатов; в противном случае, повторите эксперимент. Если повторное тестирование остается недействительным, пожалуйста, свяжитесь с техническим персоналом производителя.

4.2 Определение результата выборки:

Значение Ct ≤ 33 и демонстрирует «С» фигурная кривая усиления, оценен как PiHV положительный;

Значение Ct 33 < Кт < 38 считается подозрительным; рекомендуется повторное тестирование (экстракция нуклеиновой кислоты может быть некачественной или имеются сильные ингибирующие примеси (например, остатки дезинфицирующих средств, антикоагулянты) ингибирование усиления; предложить повторную обработку образца для выделения и амплификации нуклеиновых кислот.; сначала исключите ложноположительные результаты, вызванные аэрозольным загрязнением, прежде чем повторно извлекать нуклеиновые кислоты и проводить повторное тестирование.). Если аэрозольное загрязнение исключено и значение Ct повторного тестирования канала FAM < 33 с четкой кривой усиления, он определяется как PiHV положительный; в противном случае, он определяется как отрицательный;

Нет значения Ct или значение Ct ≥ 38 и нет «С» фигурная кривая амплификации определяется как PiHV отрицательная.

Меры предосторожности:

• Чтобы предотвратить загрязнение, эксперимент должен быть строго разделен, и физическая изоляция между перегородками предпочтительна во избежание перекрестного загрязнения из-за человеческого фактора.. Во время эксперимента надевайте лабораторные халаты и латексные перчатки., использовать инструменты самостоятельно в разных областях, при необходимости меняйте перчатки и лабораторные халаты. После ПЦР, не открывайте крышку сразу; откройте его после достаточного охлаждения, чтобы свести к минимуму аэрозольное загрязнение..
• Полностью разморозьте реагенты перед использованием., но избегайте повторных циклов замораживания-оттаивания. В комплект входят пробирки для ПЦР-реакций емкостью 0,2 мл.; если нужна замена, перенос после полного оттаивания. Строго следуйте инструкциям по приготовлению реагентов и добавлению проб.. Рабочие станции, центрифуги, пипетки, и другие инструменты следует регулярно дезинфицировать хлорсодержащими дезинфицирующими средствами., алкоголь, средства обеззараживания нуклеиновых кислот, или УФ-свет.
• Отрицательный результат не обязательно означает, что хозяин не заражен вирусом.. Плохое качество образца, низкая вирусная нагрузка, или наличие сильных ингибирующих веществ (например, алкоголь, дезинфицирующие средства, антикоагулянты, и т. д.) может привести к неудачному извлечению нуклеиновой кислоты (обнаружение) и «отрицательный» результат. Следуйте критериям интерпретации результатов, и когда есть подозрительные результаты, сначала исключить аэрозольное загрязнение. Если есть другие вопросы, обратитесь к техническому персоналу производителя.
• Этот продукт предназначен только для одноразового использования. Компоненты реагента чувствительны к естественному свету.; избегать воздействия света во время упаковки и хранения. После упаковки, не замораживать-оттаивать повторно. Только для научных исследований; не для клинической диагностики или других целей.