Herpesvirus golubova (PiHV) Kit za testiranje nukleinske kiseline (Ukinuti, PCR-fluorescentna metoda sonde)

Stavka br: AP2409002 Specifikacija: 50T/100T Skladištenje: -20℃

Predstavljanje proizvoda:

Herpesvirus golubova (PiHV) is a viral infectious disease primarily affecting young pigeons caused by Pigeon Herpesvirus Type 1 (PiHV1). It is an important pathogen leading to pigeon squab disease syndrome in young pigeons. Clinically, it is characterized by symptoms such as nasal and conjunctival inflammation. Infected pigeons may also exhibit depression, smanjen apetit, proljev, povraćanje, i neuroloških simptoma. Stoga, early, brza, a zgodno otkrivanje PiHV-a ključno je za dijagnozu, Usporavanje širenja bolesti, i sprječavanje komplikacija. This test kit is designed based on the conserved sequences in the PiHV gene, with optimized conditions, enabling accurate fluorescent quantitative PCR testing of oral, cloacal swabs, krv, i drugih uzoraka tkiva ptica. This allows for a quick determination of whether the host is infected with PiHV.

Sadržaj proizvoda:

Uvjeti skladištenja:

Čuvati na -20℃, rok trajanja je najmanje 12 mjeseca.

Eksperimentalni rad:

1. Priprema uzorka (Prostor za pripremu uzorka)

1.1 Zahtjevi za uzorke:

-Oral/Clocal Swab: Use a sterile cotton swab to insert into the bird’s throat or cloaca, rotating three times. Remove it and place it in a centrifuge tube, cutting off the exposed part, then securely cap the tube and label it. Samples that can be tested within 24 hours can be stored at 2-8°C; samples that cannot be tested promptly should be stored at -20°C.

-Whole Blood: Koristite EDTA kao antikoagulans; do not use heparin. Fresh whole blood is required, or it can be stored at 2-8°C for no more than 7 dana, or at -20°C for no more than 3 mjeseca. Repeated freeze-thaw cycles should be avoided as much as possible.

-Tkivo: Take fresh liver tissue not exceeding 100 mg, and prepare a tissue homogenate using 200-500μL of sterile water for subsequent sample preparation.

1.2 Priprema uzorka:

Refer to Sanshibio’s “Animal Genome DNA Rapid Extraction Kit (for PCR Analysis) Priručnik” (Catalog No.: DP202), ili druge komplete/metode za ekstrakciju nukleinskih kiselina koje ispunjavaju relevantne zahtjeve, to extract nucleic acids from processed samples. The extracted nucleic acid samples should be placed in an ice box and tested as soon as possible; they can be stored at 4°C for no more than 7 dana ili na -20°C ne više od 6 mjeseca.

2. Prepare the Reaction System (Sample Addition Area)

2.1 Izvadite svaku komponentu kompleta, potpuno otopiti na sobnoj temperaturi, and centrifuge for 10 seconds to collect liquid from the tube walls and caps at the bottom. Prepare the reaction system according to the number of samples (n+2) (Tj., n test samples + 1 pozitivna kontrola + 1 negativna kontrola). Specifically, prepare (n+2) PCR tubes, dispensing 23μL of the PiHV Testing Reagent into each tube, and keep them in an ice box for later use.

2.2 Zatim, sequentially add 2μL of the Negative Control, ekstrahirani uzorak nukleinske kiseline, and PiHV Positive Control to the testing reagent. Cap the tubes securely and record the information; the total volume for each reaction should be 25μL. Temeljito promiješajte, centrifuga za 10 sekundi, and conduct the amplification experiment in the PCR instrument.

3. PCR amplifikacija (Područje pojačanja i analize proizvoda)

50°C UNG enzyme decontamination for 2 minuta; 95°C pre-denaturation for 2 minuta; 95°C denaturation for 10 sekundi, followed by 60°C annealing and extension for 35 sekundi, za 40 ciklusi, collecting fluorescence signals at 60°C. Select the fluorescence channel FAM (if using ABI series or similar real-time quantitative PCR instruments, contact the manufacturer in advance if needed or add ROX calibration dye yourself; inače, Slijedite normalan postupak).

4. Result Determination

4.1 Conditions for Validating Experimental Results:

Vrijednost Ct kanala pozitivne kontrole FAM < 28 and exhibits an “S” oblikovana krivulja pojačanja; negativna kontrola nema Ct vrijednost ili Ct vrijednost ≥ 38 i br “S” oblikovana krivulja pojačanja, indicating valid results; inače, ponovite eksperiment. If retesting remains invalid, Molimo kontaktirajte tehničko osoblje proizvođača.

4.2 Sample Result Determination:

Ct vrijednost ≤ 33 and exhibits an “S” oblikovana krivulja pojačanja, judged as PiHV positive;

Ct value 33 < Ct < 38 smatra se sumnjivim; retesting is recommended (nucleic acid extraction may be substandard or there are strong inhibitory contaminants (Npr., residues from disinfectants, antikoagulansi) inhibiting amplification; suggest reprocessing the sample for nucleic acid extraction and amplification; first rule out false positive results caused by aerosol contamination before re-extracting nucleic acids and retesting). If aerosol contamination is ruled out and the FAM channel retesting Ct value < 33 with a clear amplification curve, it is determined as PiHV positive; inače, određuje se kao negativan;

Nema Ct vrijednosti ili Ct vrijednost ≥ 38 i br “S” shaped amplification curve is determined as PiHV negative.

Mjere predostrožnosti:

• Za sprječavanje kontaminacije, eksperiment treba biti strogo podijeljen, a poželjna je fizička izolacija između pregrada kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija uzrokovana ljudskim čimbenicima. Tijekom eksperimenta nosite laboratorijske kute i rukavice od lateksa, samostalno koristiti alate u različitim područjima, promijenite rukavice i laboratorijske kute kada je to potrebno. Nakon PCR-a, nemojte odmah otvarati poklopac; otvorite ga nakon dovoljnog hlađenja kako biste smanjili kontaminaciju aerosolom.
• Prije upotrebe potpuno otopite reagense, ali izbjegavajte ponavljane cikluse smrzavanja i odmrzavanja. PCR reakcijske epruvete koje se nalaze u kompletu su od 0,2 ml; ako je potrebna zamjena, prijenos nakon potpunog odmrzavanja. Strogo slijedite upute za pripremu reagensa i dodavanje uzorka. Radne stanice, centrifuge, pipete, a ostale instrumente treba redovito dezinficirati dezinficijensima koji sadrže klor, alkohol, sredstva za dekontaminaciju nukleinske kiseline, ili UV svjetlo.
• Negativan rezultat ne znači nužno da domaćin nije zaražen virusom. Loša kvaliteta uzorka, nisko opterećenje virusima, ili prisutnost jakih inhibitornih tvari (kao što su alkohol, dezinfekcijska sredstva, antikoagulansi, itd.) može rezultirati neuspješnom ekstrakcijom nukleinske kiseline (otkrivanje) i a “negativan” proizlaziti. Slijedite kriterije tumačenja rezultata, a kada postoje sumnjivi rezultati, prvo isključite kontaminaciju aerosolom. Ako ima još pitanja, obratite se tehničkom osoblju proizvođača.
• Ovaj proizvod je samo za jednokratnu upotrebu. Komponente u reagensu osjetljive su na prirodno svjetlo; izbjegavajte izlaganje svjetlosti tijekom pakiranja i skladištenja. Nakon pakiranja, nemojte opetovano zamrzavati-otapati. Samo za znanstvena istraživanja; ne za kliničku dijagnozu ili druge svrhe.