Введение

Набор Hipure для вирусной РНК подходит для очистки вирусной РНК из таких образцов, как бесклеточная жидкость организма или культуральная среда.. В основе набора лежит технология очистки на колонке с силикагелем.. Он не требует токсичной экстракции фенолом и хлороформом и трудоемкого осаждения спиртом при экстракции.. Весь процесс экстракции занимает всего 25 минуты. Набор подходит для извлечения вирусной РНК из образцов бесклеточной жидкости объемом 1–140 мкл, например сыворотки., плазма, бесклеточная жидкость организма или культуральная среда. Продукт успешно излечил гепатит B A/C., РНК гепатита С, ОРВИ и ВИЧ. Полученную РНК можно непосредственно использовать для RT.-ПЦР, Северная гибридизация и обнаружение вирусов.

Подробности

Технические характеристики

Принцип

Колонка с силикагелем Hipure основана на фильтрующей мембране из стекловолокна с высокой силой связывания.. При условии высокой концентрации ионизирующего агента (такой как гуанидин гидрохлорид или гуанидинизотиоцианат), мембрана фильтра может адсорбировать нуклеиновую кислоту посредством водородной связи и электростатического, при этом белок и другие примеси не адсорбируются и не удаляются. Мембрану фильтра, адсорбированную нуклеиновой кислотой, промывают для удаления остаточного белка и соли.. Окончательно, нуклеиновая кислота, адсорбированная на мембране фильтра, может быть промыта буфером с низким содержанием соли. (например, буфер TE) или вода. Полученная нуклеиновая кислота имеет высокую чистоту и может быть непосредственно использована в различных последующих экспериментах..

Образец гомогенизируют и лизируют в лизате., и РНК высвобождается в лизат. Высокая концентрация гуанидинизотиоцианата, содержащегося в лизате, денатурирует и инактивирует эндогенную или экзогенную РНКазу., при этом РНК защищена от деградации. Лизат центрифугируют для удаления нерастворимых примесей.. После добавления этанола для корректировки условий связывания, его переносят в колонну для фильтрации. РНК адсорбируется на мембране колонки, при этом белок удаляется без адсорбции. Колонку промывают буфером VHB для удаления белка и других примесей., промывают буфером RW2 для удаления соли. Наконец, РНК элюируется водой, не содержащей РНКазы.. Элюированную РНК можно напрямую использовать в RT-PCR., Нозерн-блот, очистка поли-А, перевод in vitro, и т. д..

Преимущества

• Быстрый — несколько образцов могут быть извлечены в 20 минуты по колоночному методу
• Высокое качество — Тотальную РНК высокой чистоты можно напрямую использовать в различных чувствительных последующих приложениях.
• Безопасный — не требуется экстракция фенола хлороформом
• Чувствительный — РНК может быть восстановлена ​​на уровне PG.
• Высокая доходность — РНК-носитель содержащиеся в продукте, максимизируют извлечение следов нуклеиновой кислоты

Содержимое комплекта

Хранение и стабильность

РНК-носитель по прибытии следует хранить при температуре 2–8°C.. Однако, кратковременное хранение (вплоть до 12 недели) при комнатной температуре (15–25°С) не влияет на их работоспособность. Остальные компоненты набора можно хранить при комнатной температуре. (15–25°С) и стабильны по крайней мере 18 месяцев в таких условиях