Набор для анализа нуклеиновых кислот вируса гепатита С (ПЦР-флюоресцентный зондовый метод) Только для исследований

Наименование товара

Набор для анализа нуклеиновых кислот вируса гепатита С (ПЦР-метод флуоресцентного зонда)

Спецификация упаковки

48 Т

Внедрение продукции

• Набор предназначен для количественного определения вируса гепатита С in vitro. (ВГС) нуклеиновая кислота (РНК) в образцах сыворотки.
• Он предназначен для пациентов, которым необходимо пройти тестирование на вирус гепатита С, и тех, кто проходит противовирусное лечение гепатита С..
• Набор может обнаруживать распространенные клинические типы ВГС., включая типы 1 к 6.
• В первую очередь он контролирует содержание и изменения РНК ВГС в крови у пациентов с гепатитом С, чтобы оценить реакцию и эффективность лечения..
• Однако, на тест не следует полагаться исключительно для оценки состояния пациента..
• Комплексная оценка, объединение клинических показателей и других показателей лабораторных испытаний, необходимо.
• Этот набор не следует использовать для скрининга источника крови на ВГС..
• Набор извлекает РНК ВГС из образцов сыворотки с помощью лизата, содержащего магнитные шарики, и амплифицирует ее в той же пробирке..
• РНК вируса гепатита С подвергается обратной транскрипции в кДНК вируса гепатита С с помощью обратной транскриптазы и количественно определяется с использованием метода зонда TaqMan в анализе в реальном времени..
• Продукты калибровки и контроля качества для этого набора представляют собой клинические образцы сыворотки, содержащие инактивированный вирус гепатита С..
• Набор контролирует образцы на наличие ингибиторов ПЦР, обнаруживая внутренние метки, чтобы избежать ложноотрицательных результатов..

информация о продукте

Примечания:

а. Параметры калибраторов (①~④) и фиксированные значения для продуктов сильно положительного и слабо положительного контроля качества могут различаться в зависимости от партии. (все в пределах указанного диапазона). Подробную информацию можно найти на прикрепленной странице в комплекте..

б. Не смешивайте компоненты из комплектов с разными номерами партий..

с. В комплект тестовых материалов, предоставляемых самостоятельно, входят пробирки для ПЦР-реакций емкостью 0,2 мл., центрифуга, различные характеристики пипеток и всасывающих головок, магнитная рамка, и магнитная рама, рекомендованная компанией.

Условия хранения и срок действия:

1. Набор для экстракции нуклеиновых кислот: Храните это 2 до 8°С.
2. Набор для ПЦР-амплификации: Хранить при температуре -20°C ± 5°C, чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания. (не более чем 3 раз).
3. Срок годности: Этот комплект действителен для 12 месяцы. Пожалуйста, используйте его в течение срока действия.. Дату производства и срок годности можно найти на этикетке..
4. Моделируемый эксперимент по транспортировке показывает, что условия транспортировки не влияют на стабильность и годность продукта.. Однако, время транспортировки не должно превышать 7 дни.

Применимые инструменты:

• СЛАН-96П
• МХ3000П/3005П
• Приборы для флуоресцентной ПЦР в реальном времени AB17500

Образцы требований:

1. Применимый тип образца: сыворотка.
2. Сбор образцов: Соберите 2–5 мл венозной крови стерильным шприцем и поместите ее в стерильную сушильную пробирку. (желательно с разделительным гелем) при комнатной температуре для 30 минуты. Центрифуга при 1500 г для 35 минут для разделения сыворотки и клеток. Перенесите супернатант (избегать эритроцитов) в стерильную центрифужную пробирку без ферментов ДНК и РНК на хранение..
3. Хранилище: Образцы сыворотки не следует хранить при температуре 2–8°C более двух недель.. Допускается длительное хранение при температуре ниже -20°C., но избегайте многократного замораживания и оттаивания. Перед тестированием образцы следует вернуть при комнатной температуре..
4. Транспорт: Образцы следует транспортировать с сухим льдом или в пенопластовом контейнере., замороженный, и запечатанный.

Метод калибровки:

(я) Подготовка реагентов (Зона подготовки реагентов):

1. Выньте различные компоненты реагентов и дайте им достичь комнатной температуры..
2. Приготовление экстракта: Полностью перемешать лизат ВГС (РЛБ) содержит магнитные шарики перед использованием. Смешать в соотношении (Лизат ВГС 1501/человек + Внутренний стандарт ВГС 1.01/человек). Немедленно внесите 1501/лунку в пробирку для амплификации ПЦР., обеспечение того, чтобы экстракт находился на дне пробирки. Если есть клейкая вытяжка для стен и магнитные шарики, осторожно покачивайте на операционном столе, чтобы убедиться, что они достигли дна трубки.
3. Приготовление реагента для ПЦР-амплификации: Подготовьте реакционную жидкость HCV RT-PCR и смесь ферментов HCV в соответствии с количеством образцов., Продукты отрицательного контроля качества ВГС, ВГС слабоположительный контроль качества продукции, Продукты строгого положительного контроля качества ВГС, и продукты для калибровки HCV. Смешать в соотношении (38.01 Реакционная жидкость HCV RT-PCR/человек + Смесь ферментов ВГС 2,01/человек), и полностью смешать с PCR-Mix для немедленного использования..

(II) Экстракция и очистка нуклеиновых кислот (Зона обработки образцов):

1. Добавлять 1001 образцов для тестирования или ВГС, ВГС, ВГС, и калибровка ВГС. Аккуратно подуйте и перемешайте 2–3 раза., затем дайте постоять при комнатной температуре 5 минуты.
2. Перенесите пробирку для ПЦР в магнитную рамку. (рекомендовано компанией) и стоять за 3 минуты. Слейте супернатант с помощью пипетки или устройства отрицательного давления., будьте осторожны, чтобы не удалить магнитные шарики.
3. Держите пробирку ПЦР на магнитной рамке., добавлять 2501 промывочной жидкости HCV (ПББ) в каждую скважину, стоять за 1 минута, затем слейте надосадочную жидкость с помощью пипетки или устройства отрицательного давления., гарантируя отсутствие остатков жидкости.
4. Повторить шаг 3 с RWB для следующей стирки, будьте осторожны, чтобы не оставить остатков жидкости на дне пробирки для ПЦР..

(III) Добавление реагента для расширения (Зона обработки образцов): Добавьте подготовленную ПЦР-микс в 401 на лунку в пробирку для ПЦР, содержащую магнитные шарики нуклеиновой кислоты. Закройте трубку усиления, и осторожно подпрыгните, чтобы перевернуть магнитные шарики, обеспечение полного смешивания ПЦР-микса. Центрифуга горизонтально и временно. Перенесите пробирки с ПЦР-реакцией в зону обнаружения и поместите их на прибор для флуоресцентной количественной ПЦР для обнаружения..

(IV) ПЦР-амплификация (Тестовая зона):

1. Поместите пробирку для реакции ПЦР в ампликатор., установить отрицательный контроль качества по ВГС, Слабый положительный контроль качества ВГС, Строгий положительный контроль качества ВГС, Калибровка ВГС ①~④, и образцы, подлежащие испытаниям согласно соответствующему приказу. Установите название образца и концентрацию калиброванного продукта..
2. Выполните процедуру амплификации флуоресцентной ПЦР., используя SLAN-96P следующим образом (MX3000P/3005P и ABI7500P похожи.).

Получение результатов:

1. Описание кривой усиления: Обычно, кривая усиления имеет структуру S-типа.
2. Базовая настройка: Выберите стабильную фоновую область флуоресценции в качестве базовой линии..
3. Настройка порога: Он должен превосходить высшую точку кривой усиления продукции отрицательного контроля качества..
4. Анализ результатов: После установки базовой линии и пороговой линии, проанализировать результаты. Выберите канал FAM для получения образцов и результатов испытаний продукции для контроля качества.; используйте канал HEX или VIC по мере необходимости. (Обратитесь к инструкции по эксплуатации прибора для получения информации о конкретных настройках.).

Исходная величина:

• Нижний предел обнаружения составляет 15 МЕ/мл, количественный предел 50 МЕ/мл, с целевым значением Ct 40, и внутренний стандарт Ct 40.

Оценка эффективности эксперимента:

1. Все калибровочные продукты должны иметь положительные коэффициенты линейной корреляции ≥0,980..
2. Продукт отрицательного контроля качества не должен быть обнаружен., с внутренним стандартным значением Ct 40.
3. Значение Ct сильного положительного контроля качества должно быть <32, начиная от (0.5 к 5.0) х 10^4 МЕ/мл; слабо положительное значение QC Ct должно быть <37, с результатами количественного определения в диапазоне от (100 к 700) МЕ/мл.
4. Эти требования должны быть выполнены в рамках одного и того же эксперимента.; в противном случае, результаты считаются недействительными и требуют повторного тестирования.

Интерпретация результатов испытаний:

1. Для результатов теста образца от 50 до 1,010^8 МЕ/мл, с кривой S-типа, значение Ct образца 40, и значение внутреннего стандарта Ct 40, результаты действительны и могут быть прямо отмечены как положительные с соответствующим значением концентрации..
2. Если результат анализа пробы превышает 1,010^8 МЕ/мл, разбавьте образец и повторите анализ.
3. Если результаты пробных испытаний <50 МЕ/мл РНК ВГС, с образцом значения Ct 40 и значение внутреннего стандарта Ct 40, вирусная нагрузка низкая, и о результатах можно сообщить напрямую, хотя концентрация приведена только для справки.
4. Если результаты пробных испытаний <15 МЕ/мл РНК ВГС, с образцом значения Ct 40 и значение внутреннего стандарта Ct 40, заявленная концентрация ниже нижнего предела набора; если внутренний стандарт ненормален или отсутствует, результаты недействительны и требуют расследования и повторного тестирования..

Ограничения метода обнаружения:

• Клиническая диагностика и лечение должны учитывать симптомы пациента., история болезни, и другие тесты.
• Неправильное обращение с пробой может привести к неточным результатам..
• Другие типы образцов требуют проверки перед использованием..
• Количественное определение РНК ВГС зависит от нескольких факторов..
• Набор для обнаружения оптимизирован для конкретных инструментов ПЦР..

Показатели эффективности продукта:

• Протестировано на соответствие национальному стандарту материала со степенью соответствия 100%.
• Количественный предел 50 МЕ/мл, с минимальным пределом обнаружения 15 МЕ/мл.
• Точность оценивается с коэффициентом вариации ≤5%.
• Линейный диапазон 50 из них 1,010^8 МЕ/мл, с коэффициентом линейной корреляции ≥0,980.
• Обнаруживает типы ВГС 1 к 6.
• Демонстрирует специфичность без перекрестной реактивности или взаимодействия со стороны обычных веществ..
• Сравнительные исследования показали надежность.

Внимание:

• Этот набор предназначен для тестирования in vitro.. Перед использованием ознакомьтесь с руководством.
• Обеспечьте надлежащее обращение с вирусными экстракция РНК и участие в ПЦР-амплификации.
• Следуйте установленным протоколам безопасности.
• Условия хранения: Набор для экстракции нуклеиновых кислот хранится в 2 до 8°С; Набор для ПЦР-амплификации хранится при температуре -20°C ± 5°C..
• Срок действия составляет 12 месяцы; проверить дату производства и срок годности.
• Условия транспортировки не должны превышать 7 дни.
• Применимый тип образца — сыворотка.; тщательно собирать и обрабатывать образцы.
• Пробы не следует хранить в течение длительного времени или подвергать многократному замораживанию/оттаиванию..
• Правильная транспортировка с использованием методов охлаждения имеет важное значение..
• Приготовление реагентов включает доведение компонентов до комнатной температуры и смешивание лизата ВГС перед использованием..
• Приготовление реагента для ПЦР-амплификации следует производить в соответствии с количеством образца..
• Экстракция нуклеиновой кислоты включает осторожное добавление образцов и использование магнитной рамки..
• Расширение добавления реагентов и амплификация ПЦР должны следовать точным шагам..
• Процедура амплификации флуоресцентной ПЦР требует соблюдения протоколов, специфичных для конкретного прибора..
• Калибровка результатов и интерпретация должны проводиться тщательно..
• Ограничения теста, включая потенциальные мутации, влияющие на результаты, должны быть рассмотрены.
• Для обеспечения точного тестирования необходимо внимательно следить за показателями эффективности продукта и мерами предосторожности..
• Постоянный контроль качества и соблюдение протоколов безопасности имеют первостепенное значение для получения надежных результатов..