C型肝炎ウイルス核酸アッセイキット (PCR-蛍光プローブ法) 研究専用

製品名

C型肝炎ウイルス核酸アッセイキット (PCR-蛍光プローブ法)

梱包仕様

48 T

製品導入

• このキットは、C 型肝炎ウイルスの in vitro 定量測定に使用されます。 (HCV) 核酸 (RNA) 血清サンプル中.
• HCV感染検査が必要な患者およびC型肝炎の抗ウイルス治療を受けている患者を対象としています。.
• このキットは一般的な臨床型の HCV を検出できます, 種類も含めて 1 に 6.
• 主に血中のHCV RNA量とC型肝炎患者の変化をモニタリングして、治療反応と有効性を評価します。.
• しかし, 検査は患者の状態を評価するためだけに依存すべきではありません.
• 総合的な評価, 臨床成績と他の臨床検査指標を組み合わせる, 必要です.
• このキットは、HCV の血液源スクリーニングには使用しないでください。.
• このキットは、磁気ビーズを含むライセートを使用して血清サンプルから HCV RNA を抽出し、同じチューブ内で増幅します。.
• HCV RNA は逆転写酵素によって HCV cDNA に逆転写され、リアルタイムアッセイで TaqMan プローブ技術を使用して定量されます。.
• このキットの校正および品質管理製品は、不活化された C 型肝炎ウイルスを含む臨床血清サンプルです。.
• このキットは、偽陰性を回避するために内部標識を検出することによりサンプルの PCR 阻害剤を監視します。.

製品詳細

アイテム	商品情報	基礎	仕様と積載量
RLB	核酸抽出試薬	HCV ライセート (磁気ビーズを含む)	水酸化ナトリウム, 塩化カリウム, トリスベース, および立体構造磁気ビーズ
RWB	HCVリンス液	塩化カリウム, 酢酸ナトリウム	25.0ボトルあたりml
1	PCR増幅試薬	HCV RT-PCR反応液	プライマー, プローブ, デオキシリボヌクレオシド三リン酸, そしてマグネシウムイオン
2	HCV酵素混合物	M-MLV逆転写酵素, DNAポリメラーゼ	あ 1001
3	較正	HCVキャリブレーション① (1.0~3.0) 10^6TU/ml	固定値の HCV 陽性血清サンプル (不活性化された)
4	較正	HCVキャリブレーション② (1.0~3.0) 10^2 IU/ml	固定値の HCV 陽性血清サンプル (不活性化された)
5	較正	HCVキャリブレーション③ (1.0~3.0) 10^4 IU/ml	固定値の HCV 陽性血清サンプル (不活性化された)
6	較正	HCVキャリブレーション④ (1.0~3.0) U/ml	固定値の HCV 陽性血清サンプル (不活性化された)
7	品質管理製品	HCV 強陽性の品質管理製品 (0.5~5.0) U/ml	HCV 陽性混合血清サンプル (すでに無効化されています)
8	品質管理製品	HCV弱陽性の品質管理製品 (100~700) IU/ml	HCV 陽性混合血清サンプル (すでに無効化されています)
9	品質管理製品	HCV陰性の品質管理製品	HCV 陰性混合血清サンプル (すでに無効化されています)
10	内部ラベル	HCV 内部ラベル	内部標準核酸テンプレート

備考:

ある. 校正器製品のパラメータ (①～④) 強陽性および弱陽性の品質管理製品の固定値はバッチ間で異なる場合があります。 (すべて指定された範囲内にある). 詳細はキット付属ページをご参照ください.

b. 異なるバッチ番号のキットのコンポーネントを混合しないでください。.

c. 自己提供の検査アイテムには0.2ml PCR反応チューブが含まれます, 遠心, ピペットや吸引ヘッドの各種仕様, 磁気フレーム, 同社推奨のマグネットフレーム.

保管条件と有効期限:

1. 核酸抽出キット: に保管します 2 8℃まで.
2. PCR増幅キット: 凍結と融解を繰り返さないように、-20°C ± 5°C で保管してください。 (以上ではありません 3 回).
3. 有効期間: このキットの有効期限は、 12 月. 有効期限内にご利用ください. 製造日と使用期限はラベルに記載されています.
4. 模擬輸送実験により、輸送条件が製品の安定性と有効性に影響を与えないことが示されています。. しかし, 輸送時間を超えてはなりません 7 日々.

適用楽器:

• SLAN-96P
• MX3000P/3005P
• AB17500 リアルタイム蛍光 PCR 装置

サンプル要件:

1. 適用サンプル種類: 血清.
2. サンプル収集: 滅菌注射器を使用して 2 ～ 5ml の静脈血を採取し、滅菌乾燥チューブに入れます。 (できれば分離ゲルを使用する) 室温で 30 分. 1500gで遠心分離します 35 血清と細胞を分離するのに数分. 上清を移す (赤血球を避ける) DNA および RNA 酵素を含まない滅菌遠心管に移して保存します.
3. ストレージ: 血清サンプルは 2 ～ 8°C で 2 週間以上保存しないでください。. -20℃以下での長期保管が可能, ただし、凍結と融解を繰り返すことは避けてください。. サンプルは試験前に室温に戻す必要があります.
4. 交通機関: 検体はドライアイスまたは発泡ボックスに入れて輸送する必要があります, 凍った, そして封印された.

校正方法:

(私) 試薬の準備 (試薬準備エリア):

1. 各種試薬成分を取り出し、室温に戻します。.
2. 抽出物の調製: HCV ライセートを完全に混合します (RLB) 使用前に磁気ビーズが入っている. の割合で混ぜます (HCV ライセート 1501/ヒト + HCV 内部標準 1.01/ヒト). 直ちに 150μl/ウェルを PCR 増幅チューブに分注します, 抽出物がチューブの底にあることを確認します. 粘着壁エキスと磁気ビーズがあれば, 手術台の上でゆっくりと振動させて、チューブの底に確実に到達するようにします。.
3. PCR増幅試薬の調製: サンプル数に応じてHCV RT-PCR反応液とHCV酵素混合物を調製, HCV陰性品質管理製品, HCV弱陽性の品質管理製品, HCV ストロングポジティブ品質管理製品, および HCV 校正製品. の割合で混ぜます (38.01 HCV RT-PCR 反応液/ヒト + HCV酵素混合物 2.01/ヒト), すぐに使用できるように PCR-Mix に完全に混合します.

(Ⅱ) 核酸の抽出と精製 (検体処理エリア):

1. 追加 1001 検査対象のサンプルまたは HCV, HCV, HCV, およびHCVキャリブレーション. 2～3回軽く吹き混ぜてください, その後、室温でしばらく放置します 5 分.
2. PCR チューブを磁気フレームに移します。 (会社から勧められた) そして立ってください 3 分. ピペットまたは陰圧装置を使用して上清を排出します。, 磁気ビーズを取り除かないように注意してください.
3. PCR チューブを磁気フレーム上に置いておきます, 追加 2501 HCV 洗浄液の (RWB) それぞれの井戸へ, 支持する 1 分, 次に、ピペットまたは陰圧装置を使用して上清を排出します。, 液体が残らないようにする.
4. ステップを繰り返します 3 RWBでもう一度洗浄します, PCR チューブの底に液体が残らないように注意してください。.

(Ⅲ) 膨張試薬の添加 (検体処理エリア): 準備した PCR ミックスを次の場所に追加します。 401 核酸磁性ビーズを含む PCR チューブにウェルごとに. 増幅管を覆う, 優しく跳ね返って磁性ビーズを反転させます, PCR-Mix が完全に混合されていることを確認する. 水平方向および一時的に遠心分離する. PCR 反応チューブを検出エリアに移し、検出用の蛍光定量 PCR 装置上に置きます。.

(IV) PCR増幅 (テストエリア):

1. PCR 反応チューブをアンプリケーターに置きます, HCV 陰性品質管理を設定する, HCV弱陽性の品質管理, HCV ストロングポジティブ品質管理, HCVキャリブレーション①～④, および対応する順序に従ってテストされるサンプル. サンプル名と校正された製品濃度を設定します.
2. 蛍光 PCR 増幅手順を実行します。, SLAN-96Pを次のように使用します (MX3000P/3005P と ABI7500P は類似しています).

ステップ	温度 (℃)	時間	定期的な番号
逆転写	45	15 分	1
前変性	95	5 分	–
変性	94	15 秒	50
アニーリング, 伸長, および蛍光取得	58	45 秒	(蛍光の収集)
チャンネルの選択	–	–	–

結果の取得:

1. 増幅曲線の説明: 通常, 増幅曲線はS型パターンを示します.
2. ベースライン設定: 安定した蛍光バックグラウンド領域をベースラインとして選択します.
3. しきい値の設定: ネガティブ品質管理製品の増幅曲線の最高点を超える必要があります。.
4. 結果の分析: ベースラインと閾値ラインを設定した後, 結果を分析する. サンプルおよび品質管理製品のテスト結果については、FAM チャネルを選択してください; 必要に応じて HEX または VIC チャネルを使用します. (特定の設定については、機器の操作説明書を参照してください。).

参考値:

• 検出下限は次のとおりです。 15 IU/ml, 定量限界は 50 IU/ml, 目標Ct値は 40, および内部標準 Ct は 40.

実験効果判定:

1. すべての校正製品は、0.980 以上の正の線形相関係数を示す必要があります。.
2. 陰性品質管理製品は検出を示さなくてはなりません, 内部標準 Ct 値は 40.
3. 強力な陽性品質管理の Ct 値は次のとおりです。 <32, からの範囲 (0.5 に 5.0) × 10^4 IU/ml; 弱陽性の QC Ct 値は次のとおりです。 <37, 定量化結果の範囲は次のとおりです。 (100 に 700) IU/ml.
4. これらの要件は同じ実験内で満たされる必要があります; さもないと, 結果は無効とみなされ、再テストが必要です.

テスト結果の解釈:

1. サンプル検査結果が 50~1.010^8 IU/ml の場合, S字カーブ付き, サンプルのCt値 40, と内部標準Ct値 40, 結果は有効であり、対応する濃度値で陽性として直接報告できます。.
2. 検体検査結果が1.010^8 IU/mlを超えた場合, サンプルを希釈して再検査してください.
3. サンプルテストの結果が <50 IU/ml HCV RNA, サンプルの Ct 値は 40 と内部標準Ct値 40, ウイルス量は低いです, 結果を直接報告することができます, 濃度は参考値です.
4. サンプルテストの結果が <15 IU/ml HCV RNA, サンプルの Ct 値は 40 と内部標準Ct値 40, 報告された濃度がキットの下限値を下回っている; 内部標準が異常または欠落している場合, 結果は無効であり、調査と再テストが必要です.

検出方法の限界:

• 臨床診断と治療では患者の症状を考慮する必要があります, 病歴, およびその他のテスト.
• サンプルの取り扱いを誤ると不正確な結果が生じる可能性があります.
• 他の種類のサンプルは使用前に検証が必要です.
• HCV RNA の定量化はいくつかの要因に依存します.
• 検出キットは特定の PCR 機器用に最適化されています.

製品性能指標:

• 国家標準の材料に対してテストされ、適合率は次のとおりです。 100%.
• 定量限界は 50 IU/ml, 最小検出限界は 15 IU/ml.
• 精度は変動係数 ≤ 5% で評価されます.
• 直線範囲は 50 ～ 1.010^8 IU/ml, 線形相関係数が ≥0.980.
• HCV の型を検出します 1 に 6.
• 交差反応性や一般的な物質による干渉なしに特異性を実証.
• 比較研究により信頼性が示されています.

注意:

• このキットは体外検査用です. 使用前にマニュアルを確認してください.
• ウイルスのため適切な取り扱いを確保する RNA抽出 PCR増幅の関与.
• 確立された安全プロトコルに従ってください.
• 保管条件: 核酸抽出キットは次の場所に保管されています。 2 8℃まで; PCR 増幅キットは -20°C ± 5°C で保管.
• 有効期間は 12 月; 製造日と賞味期限を確認する.
• 輸送条件は以下を超えてはなりません 7 日々.
• 適用サンプルタイプは血清です; サンプルを注意深く収集し、処理する.
• サンプルを長期間保存したり、凍結/解凍を繰り返したりしないでください。.
• 冷却方法を使用した適切な輸送が不可欠です.
• 試薬の調製には、成分を室温に調整し、使用前に HCV ライセートを混合することが含まれます。.
• PCR増幅試薬はサンプル量に応じて調製する必要があります.
• 核酸抽出には、サンプルの慎重な追加と磁気フレームの使用が含まれます。.
• 拡張試薬の添加と PCR 増幅は正確な手順に従う必要があります.
• 蛍光 PCR 増幅手順では、機器固有のプロトコルに従う必要があります.
• 結果の校正と解釈は慎重に行う必要があります.
• テストの制限事項, 結果に影響を与える潜在的な突然変異を含む, 考慮する必要があります.
• 正確なテストを行うには、製品の性能指標と注意事項に厳密に従う必要があります.
• 信頼性の高い結果を得るには、継続的な品質管理と安全プロトコルの順守が最も重要です.