Набор для экстракции тотальной РНК крови (Удаление геномной ДНК)

1. Компоненты набора реагентов

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) в сухой среде и может храниться в течение 12 месяцы.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор предназначен для исследовательских целей в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора содержат раздражители.; желательно принять необходимые меры предосторожности (например, носить защитную одежду и очки).

3.3 Для использования этого комплекта требуется дополнительное оборудование, такое как высокоскоростная центрифуга., водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, жидкий азот, хлороформ, стерильная деионизированная вода, и EP трубки.

4. Знакомство с набором реагентов

The RNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying RNA from blood and other fluid tissues. It is suitable for most biological fluids and tissues. This RNA purification kit can be applied to blood samples exceeding 0.5 мл, and through DNA removal technology, the extracted RNA is virtually free of genomic DNA.

The RNA Fast Purification Kit allows for the extraction of total RNA (включая ядерную РНК и цитоплазматическую РНК) от крови внутри 2 часы. The purified RNA can be directly used for applications such as RT-ПЦР, Нозерн-блоттинг, и т. д.. Весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа., making the RNA purification kit well-suited for various other sample types.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Меры предосторожности перед началом эксперимента:

А. Перед использованием, add the specified amount of ethanol to Wash Buffer 1 как указано на этикетке флакона с реагентом., and mark a check on the label to indicate the addition of ethanol.

B.Elution Buffer is a 0.1x TE solution containing a minimal amount of EDTA. Если ЭДТА повлияет на последующие эксперименты, it is recommended to use sterile deionized water as a substitute for the Elution Buffer.

1. Образец обработки: Take 200μL of blood into an EP tube, добавлять 80μL of Red Blood Cell Lysis Buffer 10x, and mix thoroughly by pipetting.
2. Добавлять 500μL RNA Extraction Buffer 1 плюс, vigorously shake to mix, центрифуга при 12000 об / мин для 3 минуты.
3. Transfer the supernatant to a очистка ДНК столбец, центрифуга при 12000 об / мин для 1 минута.
4. Добавлять 250μL of ethanol to the supernatant, pipette and mix, transfer the liquid to the RNA purification column, центрифуга при 12000 об / мин для 30 секунды, выбросить супернатант.
5. Добавлять 600μL Inhibitor Removal Buffer к колонке очистки РНК, центрифуга при 12000 об / мин для 30 секунды, выбросить супернатант.
6. Добавлять 600μL Wash Buffer 1 к колонке очистки РНК, центрифуга при 12000 об / мин для 30 секунды, выбросить супернатант.

(Примечание: Confirm that ethanol has been added to Wash Buffer 1. Ethanol presence significantly affects subsequent experiments. Поэтому, membrane drying is crucial. После центрифугирования, убедиться, что этанол остается до элюирования, then discard the waste and collection tube. После использования буфера для стирки 1, the membrane on the RNA purification column should have a slight color. После центрифугирования, Осторожно удалить колонку очищения РНК, ensuring it does not touch the collection tube to prevent ethanol interference.)

7. Повторить шаг 6.
8. Centrifuge the empty tube at 12000rpm for 2 минуты (to evaporate residual ethanol).
9. Поместите колонку для очистки РНК в новую центрифужную трубку, drip 100μL Elution Buffer onto the membrane, инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минуты (15℃~25℃), центрифуга при 12000 об / мин для 1 минута.

(Примечание: Eluting RNA with 50μL Elution Buffer can increase RNA concentration but reduce total RNA yield.)