Kit Ekstraksi RNA Total Darah (Penghapusan DNA Genomik)

1. Komponen kit reagen

2. Penyimpanan

Kit reagen ini harus disimpan pada suhu kamar (15-25℃) di lingkungan yang kering dan dapat dilestarikan 12 bulan.

3. Petunjuk Penggunaan Kit Reagen

3.1 Kit ini ditujukan untuk tujuan penelitian biologi molekuler dan tidak boleh digunakan untuk diagnosis atau pengobatan penyakit.

3.2 Beberapa komponen dalam kit mengandung bahan pengiritasi; disarankan untuk mengambil tindakan pencegahan yang diperlukan (seperti memakai pakaian pelindung dan kacamata).

3.3 Penggunaan kit ini memerlukan peralatan tambahan seperti centrifuge berkecepatan tinggi, mandi air (mandi logam), pencampur pusaran, etanol anhidrat, nitrogen cair, khloroform, air deionisasi steril, dan tabung EP.

4. Pengantar Kit Reagen

Kit pemurnian RNA memberikan metode yang cepat dan efisien untuk memurnikan RNA dari darah dan jaringan cairan lainnya. Ini cocok untuk sebagian besar cairan dan jaringan biologis. Kit pemurnian RNA ini dapat diterapkan pada sampel darah yang melebihi 0.5 ml, dan melalui teknologi penghapusan DNA, RNA yang diekstraksi hampir bebas dari DNA genomik.

Kit Pemurnian Cepat RNA memungkinkan ekstraksi Total RNA (termasuk RNA nuklir dan RNA sitoplasma) dari darah di dalam 2 jam. RNA yang dimurnikan dapat langsung digunakan untuk aplikasi seperti RT-PCR, Northern blotting, dll.. Seluruh proses pemurnian tidak memerlukan reagen beracun seperti fenol-kloroform, Membuat Kit Pemurnian RNA cocok untuk berbagai jenis sampel lainnya.

5. Prinsip dan Prosedur Eksperimental

6. Proses Ekstraksi

Tindakan pencegahan sebelum memulai percobaan:

A. Sebelum digunakan, Tambahkan jumlah etanol yang ditentukan ke buffer cuci 1 seperti yang ditunjukkan pada label botol reagen, dan tandai cek pada label untuk menunjukkan penambahan etanol.

B. Elusi Buffer adalah solusi 0,1x TE yang mengandung jumlah minimal EDTA. Jika EDTA mempengaruhi percobaan selanjutnya, disarankan untuk menggunakan air deionisasi steril sebagai pengganti buffer elusi.

1. Pemrosesan Sampel: Ambil 200μl darah ke dalam tabung EP, menambahkan 80μl buffer lisis sel darah merah 10x, dan aduk rata dengan memipeting.
2. Menambahkan 500μl buffer ekstraksi RNA 1 plus, Goyang dengan kuat untuk dicampur, Centrifuge pada 12000rpm untuk 3 menit.
3. Transfer supernatan ke a pemurnian DNA kolom, Centrifuge pada 12000rpm untuk 1 menit.
4. Menambahkan 250μl etanol untuk supernatan, pipet dan campur, Pindahkan cairan ke kolom pemurnian RNA, Centrifuge pada 12000rpm untuk 30 detik, buang supernatannya.
5. Menambahkan 600buffer penghapusan penghambat μl ke kolom pemurnian RNA, Centrifuge pada 12000rpm untuk 30 detik, buang supernatannya.
6. Menambahkan 600μl buffer cuci 1 ke kolom pemurnian RNA, Centrifuge pada 12000rpm untuk 30 detik, buang supernatannya.

(Catatan: Konfirmasikan bahwa etanol telah ditambahkan ke buffer cuci 1. Kehadiran etanol secara signifikan mempengaruhi percobaan selanjutnya. Karena itu, pengeringan membran sangat penting. Setelah sentrifugasi, Pastikan tidak ada etanol yang tersisa sebelum elusi, Kemudian buang limbah dan tabung pengumpulan. Setelah menggunakan buffer cuci 1, Membran pada kolom pemurnian RNA harus memiliki sedikit warna. Setelah sentrifugasi, Lepaskan kolom pemurnian RNA dengan hati -hati, memastikan tidak menyentuh tabung pengumpulan untuk mencegah gangguan etanol.)

7. Ulangi langkah 6.
8. Centrifuge tabung kosong pada 12000rpm untuk 2 menit (untuk menguap sisa etanol).
9. Tempatkan kolom pemurnian RNA dalam tabung centrifuge baru, meneteskan buffer elusi 100μl ke membran, Inkubasi pada suhu kamar untuk 5 menit (15℃ ~ 25 ℃), Centrifuge pada 12000rpm untuk 1 menit.

(Catatan: Eluting RNA dengan buffer elusi 50μL dapat meningkatkan konsentrasi RNA tetapi mengurangi hasil RNA total.)