商品番号： EH003 仕様：1mL ストレージ: -20℃で保存
製品導入：
- リアルタイム専用試薬 PCR を利用して SYBR Green I 色素ベースの蛍光法.
- 抗体でブロックされたホットスタート酵素を配合し、低温条件下でのプライマー二量化やプライマーの非特異的アニーリングによる非特異的増幅を抑制します。.
- 増幅反応の特異性を高める.
- 高い増幅効率が特徴, 強力な検出特異性と感度, 良い安定性, 簡単な操作性.
- 広い定量範囲内で堅牢な標準曲線を生成します, 正確な定量化を可能にする.
- さまざまな蛍光定量 PCR 装置と互換性があります, Applied Biosystems 製のものを含む, エッペンドルフ, バイオラッド, ロッシュ, その他国内ブランド.
商品内容：
| コンポーネント | EH003-02 |
| 2× SYBR グリーン qPCR ミックス | 1mL |
注記：
- ROX Reference Dye は、特定のリアルタイム PCR 増幅装置におけるウェル間の蛍光シグナル誤差を補正します.
- ROX Reference Dye I は、ABI PRISM 7000/7700/7300/7900HT および Step One Plus リアルタイム PCR システムに適しています.
- ROX Reference Dye II は以下と互換性があります。 7500 リアルタイムPCRシステム, 7500 高速リアルタイム PCR システム, ストラタジーン MX3000P, MX3005P, およびMX4000.
- ROX 参照色素 I および II は両方とも、反応では最終濃度 1 倍で使用する必要があります。.
- LightCycle のような機器, サーマルサイクラーダイスリアルタイムシステムⅡ, およびスマート サイクラー システムでは、ROX 参照色素を使用する必要はありません。.
ストレージ:
-20℃で保存, 最低保存期間は 12 月.
アクティビティの定義:
活性化されたマヒマヒ精子 DNA をテンプレート/プライマーとして使用する, アクティビティは次のように定義されます 1 ユニット (U) 酸不溶性物質が組み込まれている, 取り上げることで 10 ヌクレオチドの nmol 30 74℃で5分.
品質管理:
この製品は品質検査を受けており、デオキシリボヌクレアーゼ・エンドヌクレアーゼ活性を含んでいません。, デオキシリボヌクレアーゼ エキソヌクレアーゼ活性, リボヌクレアーゼの汚染. 宿主ゲノムDNA残存量は以下の通り 10 コピー.
製品の用途:
リアルタイム蛍光定量的qPCR (染色方法) DNAまたはcDNAを増幅します; 絶対定量的 qPCR; 相対定量的 qPCR.
使用説明書:
- 必要な試薬が完全に溶解するまで室温で平衡化します。, ゆっくりとよく混ぜます (ボルテックスしないでください), 過剰な気泡の形成や凍結融解サイクルの繰り返しを避けるために、短時間の遠心分離後に使用してください。. 頻繁に使用する場合, 4℃で保存. 押下した成分に応じて PCR 反応ミックスを調製します (アイスボックス上で反応混合物を準備します):
| 試薬 | 25システム容量 μL | 最終濃度 |
| 2× SYBR グリーン qPCR ミックス | 12.5μL | 1× |
| プライマーI (10μM) | 0.5-2.5μL | 0.2-1.0μM |
| ファーストⅡ (10μM) | 0.5-2.5μL | 0.2-1.0μM |
| ROX 参照色素 I または ROX 参照色素 II | 0.5μLまたは0.25μL | 1× |
| テンプレートDNA | 1-5μL | — |
| ああ2○ | 25μLまで | — |
注記：各成分の量は実際のニーズに応じて調整できます. ROX Reference Dye の追加は、使用されている特定のモデルに基づいてユーザーが決定する必要があります。.
- 一般的に, 反応には二段階法を使用できます. 2段階法で増幅が不十分な場合, 3 ステップの方法を使用して PCR 反応プログラムをセットアップできます。.
| 方法・手順 | 2段階リアルタイムPCR | 3 ステップのリアルタイム PCR | サイクル |
| 95℃ (変性前) | 2-5分 | 2-5分 | 1 |
| 95℃ (変性) | 10-20秒 | 10-20秒 | 35-45サイクル |
| 55℃～65℃ (アニーリング) | 20秒 – 1min（蛍光を収集） | 10-20秒 | |
| 72℃ (拡大) | — | 20秒 – 1min（蛍光を収集） | |
| 融解曲線 | — | — | — |
注記： 実際のニーズに応じて反応条件を調整および最適化できます。. 融解曲線プログラムは、使用する増幅装置のプログラムに基づいて選択および適合させる必要があります。.
- 反応が完了した後, 増幅曲線と融解曲線の結果を分析する. 詳細な分析方法については、リアルタイム PCR 装置のユーザーマニュアルを参照してください。.
予防:
- 適切な焼鈍を選択してください (拡大) プライマー設計に基づく温度, プライマーを使用した場合の Tm は通常約 60°C. アニーリング温度が低いプライマーの場合, 3 段階の方法が推奨されます. 使用するプライマーの最終濃度は0.2～1.0μMの範囲で調整可能です。. DNAテンプレートの濃度に応じて濃度を調整可能.
- SYBR Green I 色素は、二本鎖 DNA に結合すると蛍光を発する非特異的色素です。 (二本鎖DNA). しかし, 強い光の下では簡単に劣化します. したがって, プライマーを設計するとき, プライマーダイマーの形成をできるだけ避けることが重要です. 使用中, 結果の精度を高めるために、強い光に長時間さらされることは避けてください。, 感度, そして特異性.
- マグネシウムイオン濃度を高めると、PCR 反応に対する SYBR Green I の阻害効果が減少する可能性があります. 本製品を使用して蛍光 PCR 反応を最適化する場合, マグネシウムイオン濃度を少し増やすことをお勧めします。 (0.5-3.0標準的な PCR 反応よりも高い mM).
- 増幅前後に専用エリアとピペットを使用, 手袋を着用する, そして頻繁に変更する. PCR反応終了後, PCR産物による検査環境の汚染を最小限に抑えるため、反応チューブを開けないでください。.
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