Mezcla de qPCR verde Sanshibio 2× SYBR

Artículo No： EH003 Especificación：1Almacenamiento en ml: Conservar a -20°C

Introducción del producto：

• Reactivo especializado para tiempo real PCR utilizando el SIBR Método de fluorescencia basado en colorante verde I.
• Contiene una enzima de inicio en caliente bloqueada por anticuerpos para suprimir la amplificación no específica causada por la dimerización de cebadores o el recocido no específico de cebadores en condiciones de baja temperatura..
• Mejora la especificidad de la reacción de amplificación..
• Presenta una alta eficiencia de amplificación, fuerte especificidad y sensibilidad de detección, buena estabilidad, y fácil uso operativo.
• Genera una curva estándar robusta dentro de un amplio rango cuantitativo, permitiendo una cuantificación precisa.
• Compatible con una variedad de instrumentos de PCR cuantitativa de fluorescencia, incluidos los de Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, roche, y otras marcas nacionales.

Contenido del producto：

Nota：

• El tinte de referencia ROX corrige errores de señal de fluorescencia entre pocillos en ciertos instrumentos de amplificación de PCR en tiempo real.
• El tinte de referencia ROX I es adecuado para ABI PRISM 7000/7700/7300/7900HT y el sistema de PCR en tiempo real Step One Plus..
• ROX Reference Dye II es compatible con 7500 Sistema de PCR en tiempo real, 7500 Sistema de PCR rápido en tiempo real, Stratagene Mx3000P, Mx3005p, y MX4000.
• Tanto el tinte de referencia ROX I como el II deben usarse en una concentración final de 1x en las reacciones..
• Instrumentos como LightCycler, Termociclador Dice Sistema en tiempo real II, y el sistema Smart Cycler no requieren el uso de tinte de referencia ROX.

Almacenamiento:

Conservar a -20°C, con una vida útil mínima de 12 meses.

Definición de actividad:

Uso del ADN del esperma mahi-mahi activado como plantilla/cebador, la actividad se define como 1 unidad (Ud.) de material insoluble en ácido incorporado, tomando 10 nmol de nucleótidos dentro 30 minutos a 74°C.

Control de calidad:

Este producto ha sido sometido a pruebas de calidad y no tiene actividad desoxirribonucleasa endonucleasa., actividad exonucleasa desoxirribonucleasa, y contaminación por ribonucleasa. El contenido residual del ADN genómico del huésped está por debajo 10 copias.

Usos del producto:

Fluorescencia en tiempo real qPCR cuantitativa (Método de tinte) amplifica el ADN o el ADNc; qPCR cuantitativa absoluta; qPCR cuantitativa relativa.

Instrucciones de uso:

• Deje que los reactivos necesarios se equilibren a temperatura ambiente hasta que se disuelvan por completo., mezclar suavemente (no agitar), Úselo después de una breve centrifugación para evitar la formación excesiva de burbujas y ciclos repetidos de congelación y descongelación.. Si se usa con frecuencia, conservar a 4°C. Prepare la mezcla de reacción de PCR de acuerdo con los componentes presionados (preparar la mezcla de reacción en una caja de hielo):

Nota：Las cantidades de cada componente se pueden ajustar según las necesidades reales.. Los usuarios deben determinar la adición del tinte de referencia ROX según el modelo específico que se esté utilizando..

• En general, Se puede usar un método de dos pasos para la reacción. Si la amplificación no es satisfactoria con el método de dos pasos, Se puede emplear un método de tres pasos para configurar el programa de reacción de PCR.

Nota： Las condiciones de reacción se pueden ajustar y optimizar según las necesidades reales.. El programa de curva de fusión debe seleccionarse y adaptarse en función del programa del instrumento de amplificación que se esté utilizando..

• Una vez completada la reacción, analizar la curva de amplificación y los resultados de la curva de fusión. Consulte el manual del usuario del instrumento de PCR en tiempo real para conocer los métodos de análisis detallados..

Precauciones:

1. Seleccione el recocido apropiado (extensión) temperaturas basadas en el diseño del cebador, con la Tm de imprimación normalmente alrededor de 60°C. Para imprimaciones con temperaturas de recocido más bajas., Se recomienda un método de tres pasos.. La concentración final de los cebadores usados ​​se puede ajustar dentro del rango de 0,2-1,0 μM.. La concentración de la plantilla de ADN se puede ajustar según su concentración..
2. El tinte SYBR Green I es un tinte no específico que emite fluorescencia al unirse al ADN bicatenario. (ADNbc). Sin embargo, Se degrada fácilmente bajo luz intensa.. Por lo tanto, al diseñar cebadores, Es importante evitar la formación de dímeros de cebador tanto como sea posible.. Durante el uso, Se debe evitar la exposición prolongada a luz intensa para mejorar la precisión de los resultados., sensibilidad, y especificidad.
3. Aumentar la concentración de iones de magnesio puede reducir el efecto inhibidor de SYBR Green I en las reacciones de PCR. Al optimizar las reacciones de PCR de fluorescencia utilizando este producto, es aconsejable aumentar ligeramente la concentración de iones magnesio (0.5-3.0mM más alto que las reacciones de PCR estándar).
4. Utilice áreas y pipetas dedicadas antes y después de la amplificación., usar guantes, y cámbalos con frecuencia. Después de completar la reacción de PCR, No abra los tubos de reacción para minimizar la contaminación del entorno de prueba con productos de PCR..