Kit d'analyse des protéines Solarbio BCA

Le BCA (Acide bicinchoninique) Le kit d'essai protéique est une méthode largement utilisée pour la quantification des concentrations de protéines dans un échantillon. Ce test repose sur la détection colorimétrique du cuivre(II) ions réduits par des protéines dans des conditions alcalines. L'intensité de la couleur violette résultante est proportionnelle à la concentration de protéines, permettre une quantification précise.

Voici un guide général sur la façon d'utiliser un Protéine BCA Kit d'analyse:

Matériaux requis:

1. Kit d'analyse de protéines BCA
2. Échantillons de protéines (Solutions standard ou échantillons inconnus)
3. Microplaque ou cuvettes
4. Micropipettes et conseils
5. Lecteur de microplaques ou spectrophotomètre
6. Eau distillée

Procédure:

1. Préparation des normes protéiques:
   • Préparer une série de normes protéiques avec des concentrations connues. Ces normes seront utilisées pour créer une courbe standard pour la quantification.
2. Préparation des échantillons:
   • Diluer vos échantillons de protéines à une concentration dans la plage des normes. Il est important d'avoir des échantillons dans la plage linéaire du test pour une quantification précise.
3. Préparation du réactif de travail BCA:
   • Mélanger le réactif BCA A (Solution d'acide bicinchoninique) et réactif BCA B (Cuivre(II) solution de sulfate) dans un 50:1 rapport. Assurer un mélange complet.
4. Incubation:
   • Ajoutez le réactif de travail BCA à vos normes et échantillons, puis incuber le mélange réactionnel à une température appropriée (généralement 37 ° C) pour 30 minutes. Pendant ce temps, Les protéines dans les échantillons réduiront les ions cuivre, formant un complexe de couleur violet.
5. La mesure:
   • Après l'incubation, mesure l'absorbance de chaque puits à une longueur d'onde autour 562 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques ou d'un spectrophotomètre. L'absorbance est directement proportionnelle à la concentration en protéines.
6. Création d'une courbe standard:
   • Tracer les valeurs d'absorbance des normes contre leurs concentrations connues pour créer une courbe standard. Cette courbe sera utilisée pour déterminer les concentrations de protéines d'échantillons inconnus.
7. Quantification des échantillons inconnus:
   • Mesurez l'absorbance de vos échantillons inconnus et utilisez la courbe standard pour déterminer leurs concentrations de protéines.
8. Analyse des données:
   • Calculez les concentrations de protéines en fonction de la courbe standard. La plupart des lecteurs de microplaques ont des logiciels qui peuvent automatiser ce processus.
9. Résultats:
   • Signalez les concentrations de protéines de vos échantillons dans les unités appropriées (par exemple., mg/ml) Basé sur le test BCA.

Il est important de suivre les instructions spécifiques fournies par le fabricant du kit de dosage des protéines BCA, Comme le protocole exact peut varier entre les kits. En plus, Assurez-vous que tous les réactifs sont correctement stockés, et le test est effectué dans les conditions recommandées pour des résultats précis et fiables.

Le kit de dosage de protéines BCA est basé sur la protéine réduit Cu2 + à Cu + et le principe selon lequel BCA forme un complexe bleu violet avec Cu1 + dans des conditions alcalines, suivi par la détection d'absorbance à 562 nm et en comparant la courbe standard pour quantifier la protéine.