- Composants du kit de réactifs
| Caractéristiques | 50T | 100T |
| Chat. Non. | SN0305AD | SN0306AD |
| Colonnes d'extraction d'ARN (ensemble) | 50 (ensemble) | 100 (ensemble) |
| Colonnes de nettoyage d'ADN (ensemble) | 50 (ensemble) | 100 (ensemble) |
| Extraction d'ARN Tampon i | 30 ml | 2×30 ml |
| Tampon d'élimination des inhibiteurs | 30 ml | 2×30 ml |
| Tampon de lavage 1 | 15 ml | 2×15 ml |
| Tampon d'élution | 20 ml | 20 ml |
| Manuel d'instructions | 1 | 1 |
- Stockage
Ce kit de réactifs peut être conservé à température ambiante (15-25℃) dans un environnement sec et est stable pendant 12 mois.
- Instructions d'utilisation du kit de réactifs
3.1 Ce kit est destiné à des fins de recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..
3.2 Certains composants du kit contiennent des irritants; il est conseillé de prendre les précautions nécessaires (comme porter des vêtements de protection et des lunettes).
3.3 L'utilisation de ce kit nécessite un équipement supplémentaire tel qu'une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, l'azote liquide, chloroforme, eau déminéralisée stérile, et tubes EP.
- Introduction au kit de réactifs
Ce kit de purification d'ARN fournit une méthode rapide et efficace pour purifier l'ARN total des plantes polysaccharides et polyphénols., convient à la plupart des tissus végétaux riches en polysaccharides et polyphénols. En général, les tissus végétaux riches en polysaccharides et polyphénols contiennent un niveau élevé de métabolites phénoliques et de polysaccharides secondaires, affectant considérablement l’efficacité de l’extraction de l’ARN. Ce kit peut éliminer efficacement les polysaccharides et les polyphénols, ainsi que d'éliminer efficacement la contamination de l'ADN des échantillons. Si l'expérience est sensible à l'ADN, il est recommandé d'utiliser des amorces couvrant les introns pour les expériences en aval.
Le kit de purification rapide de l'ARN peut extraire l'ARN total des tissus végétaux (y compris l'ARN nucléaire et l'ARN cytoplasmique) dans 1 heure. L'ARN extrait peut être directement utilisé pour la RT-RAP, Transfert du Nord, etc.. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme, ce qui rend ce kit de purification d'ARN adapté à divers autres types d'échantillons.
- Principes et procédures expérimentaux
- Processus d'extraction
Précautions avant de commencer l'expérience:
UN. Avant d'utiliser Tampon de lavage 1, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol absolu selon l'étiquette sur le flacon de réactif, et cochez la case sur l'étiquette pour indiquer que de l'éthanol absolu a été ajouté.
B. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE contenant un minimum d'EDTA. Si l'EDTA affecte les expériences ultérieures, il est recommandé de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.
- Traitement des échantillons:
UN. Collecte et stockage des matériaux:
Si des matériaux frais ne peuvent pas être utilisés immédiatement, placez-les dans l'azote liquide et conservez-les à -80°C.
B. Dans la mesure du possible, collecter des matériaux frais, car ils contiennent moins de polysaccharides et de polyphénols.
2. Broyer environ 100 mg d'échantillons frais ou pas plus de 20 mg de matière sèche utilisant de l'azote liquide.
3. Ajouter 600µl de tampon d'extraction d'ARN I, s'assurer qu'il n'y a pas de tissus en blocs dans l'échantillon broyé. Les tissus en bloc sont difficiles à lyser et peuvent réduire le rendement en ARN.
4. Vortex pour 30 secondes.
5. Centrifuger le lysat pour 5 minutes à 12,000 tr/min.
(Note: Les matières végétales polysaccharidiques peuvent produire beaucoup de substances collantes à cette étape, qui peut cisailler l'ARN dans les étapes suivantes. Donc, éliminer ces substances lors de cette étape.)
- Transférer le surnageant obtenu à l’étape précédente dans une colonne de purification DNA Clear, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, et récupérer le filtrat (Note: L'ARN est présent dans le filtrat).
- Ajouter 250µl d'éthanol absolu, mélanger par pipetage. S'il y a une petite quantité de précipitations, cela n'affecte pas les expériences ultérieures. Ajouter le liquide à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, et jetez le flux.
- Ajouter 700μl de tampon d'élimination des inhibiteurs à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, et jetez le flux.
- Ajouter 700µl de tampon de lavage 1 à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, et jetez le flux.
- Ajouter 500µl de tampon de lavage 1 à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12,000 tr/min pour 3 minutes, et jetez le flux.
- Placez la colonne de purification d'ARN dans un nouveau tube à centrifuger de 1,5 ml, sécher la membrane à l'air libre à température ambiante pendant 2 minutes.
(Note: Confirmez l’ajout d’éthanol au tampon de lavage 1. La présence d'éthanol affecte considérablement les expériences ultérieures. Donc, le séchage par membrane est crucial. Après centrifugation, s'assurer de l'absence d'éthanol avant l'élution. Jeter les déchets et le tube de collecte. Après avoir utilisé le tampon de lavage 1, la membrane de la colonne de purification d'ARN ne doit avoir qu'une légère couleur. Retirez délicatement la colonne de purification d’ARN après centrifugation, s'assurer qu'il ne touche pas le tube de prélèvement pour éviter la contamination par l'éthanol.)
- Goutte 50-100µl de tampon d'élution sur la membrane, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute, et récupérez la solution d'ARN.
(Note: L'élution de l'ARN avec 50 μl de tampon d'élution peut augmenter la concentration en ARN mais diminuer le rendement total en ARN..)
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