Polysaccharides et polyphénols ARN total végétal (Plus) Kit d'extraction de petite quantité

1. Composants du kit de réactifs

Caractéristiques	50T	100T
Chat. Non.	SN0305AD	SN0306AD
Colonnes d'extraction d'ARN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Colonnes de nettoyage d'ADN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Extraction d'ARN Buffer I	30 ml	2×30 ml
Tampon d'élimination des inhibiteurs	30 ml	2×30 ml
Tampon de lavage 1	15 ml	2×15 ml
Tampon d'élution	20 ml	20 ml
Manuel d'instructions	1	1

 

2. Stockage

This reagent kit can be stored at room temperature (15-25℃) dans un environnement sec et est stable pendant 12 mois.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit est destiné à des fins de recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit contiennent des irritants; il est conseillé de prendre les précautions nécessaires (comme porter des vêtements de protection et des lunettes).

3.3 L'utilisation de ce kit nécessite un équipement supplémentaire tel qu'une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, l'azote liquide, chloroforme, eau déminéralisée stérile, et tubes EP.

4. Introduction au kit de réactifs

This RNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying polysaccharide and polyphenol plant total RNA, suitable for most polysaccharide and polyphenol-rich plant tissues. En général, plant tissues rich in polysaccharides and polyphenols contain a high level of secondary phenolic metabolites and polysaccharides, significantly affecting RNA extraction efficiency. This kit can effectively remove polysaccharides and polyphenols, as well as efficiently eliminate DNA contamination from samples. If the experiment is sensitive to DNA, it is recommended to use primers spanning introns for downstream experiments.

The RNA Fast Purification Kit can extract total RNA from plant tissues (y compris l'ARN nucléaire et l'ARN cytoplasmique) dans 1 heure. L'ARN extrait peut être directement utilisé pour la RT-RAP, Transfert du Nord, etc.. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme, making this RNA purification kit suitable for various other sample types.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Précautions avant de commencer l'expérience:

UN. Avant d'utiliser Tampon de lavage 1, add the specified amount of absolute ethanol according to the label on the reagent bottle, et cochez la case sur l'étiquette pour indiquer que de l'éthanol absolu a été ajouté.

B. The Elution Buffer is a 0.1x solution TE contenant un minimum d'EDTA. Si l'EDTA affecte les expériences ultérieures, il est recommandé de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.

1. Traitement des échantillons:

UN. Collecte et stockage des matériaux:

Si des matériaux frais ne peuvent pas être utilisés immédiatement, placez-les dans l'azote liquide et conservez-les à -80°C.

B. Whenever possible, collect fresh materials, as they contain fewer polysaccharides and polyphenols.

2. Grind approximately 100 mg of fresh samples or not more than 20 mg de matière sèche utilisant de l'azote liquide.

3. Ajouter 600μl RNA Extraction Buffer I, ensuring there are no blocky tissues in the ground sample. Blocky tissues are difficult to lyse and can reduce RNA yield.

4. Vortex pour 30 secondes.

5. Centrifuger le lysat pour 5 minutes à 12,000 tr/min.

(Note: Polysaccharide plant materials may produce a lot of sticky substances at this step, which can shear RNA in subsequent steps. Donc, remove these substances during this step.)

6. Transfer the supernatant obtained in the previous step to a DNA Clear Purification Column, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, and collect the filtrate (Note: L'ARN est présent dans le filtrat).
7. Ajouter 250µl d'éthanol absolu, mix by pipetting. If there is a small amount of precipitation, cela n'affecte pas les expériences ultérieures. Add the liquid to the RNA purification column, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, and discard the flow-through.
8. Ajouter 700μl de tampon d'élimination des inhibiteurs à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, and discard the flow-through.
9. Ajouter 700µl de tampon de lavage 1 à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, and discard the flow-through.
10. Ajouter 500µl de tampon de lavage 1 à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 12,000 tr/min pour 3 minutes, and discard the flow-through.
11. Place the RNA purification column into a new 1.5ml centrifuge tube, air-dry the membrane at room temperature for 2 minutes.

(Note: Confirmez l’ajout d’éthanol au tampon de lavage 1. The presence of ethanol significantly affects subsequent experiments. Donc, le séchage par membrane est crucial. Après centrifugation, ensure the absence of ethanol before elution. Jeter les déchets et le tube de collecte. Après avoir utilisé le tampon de lavage 1, la membrane de la colonne de purification d'ARN ne doit avoir qu'une légère couleur. Retirez délicatement la colonne de purification d’ARN après centrifugation, s'assurer qu'il ne touche pas le tube de prélèvement pour éviter la contamination par l'éthanol.)

12. Goutte 50-100µl de tampon d'élution sur la membrane, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute, and collect the RNA solution.

(Note: Eluting RNA with 50μl Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)