- Componenti del kit di reagenti
| Specifiche | 50T | 100T |
| Gatto. NO. | SN0305AD | SN0306AD |
| Colonne di estrazione dell'RNA (impostato) | 50 (impostato) | 100 (impostato) |
| DNA Clean-Up Columns (impostato) | 50 (impostato) | 100 (impostato) |
| RNA Extraction Buffer I | 30 ml | 2×30 ml |
| Tampone di rimozione degli inibitori | 30 ml | 2×30 ml |
| Tampone di lavaggio 1 | 15 ml | 2×15 ml |
| Tampone di eluizione | 20 ml | 20 ml |
| Manuale di istruzioni | 1 | 1 |
- Magazzinaggio
This reagent kit can be stored at room temperature (15-25℃) in un ambiente asciutto ed è stabile per 12 mesi.
- Istruzioni per l'uso del kit di reagenti
3.1 Questo kit è destinato a scopi di ricerca in biologia molecolare e non deve essere utilizzato per la diagnosi o il trattamento di malattie.
3.2 Alcuni componenti del kit contengono sostanze irritanti; è opportuno prendere le dovute precauzioni (come indossare indumenti protettivi e occhiali protettivi).
3.3 L'utilizzo di questo kit richiede apparecchiature aggiuntive come una centrifuga ad alta velocità, bagnomaria (bagno di metallo), miscelatore a vortice, etanolo anidro, azoto liquido, cloroformio, acqua deionizzata sterile, e tubi EP.
- Introduzione al kit di reagenti
This RNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying polysaccharide and polyphenol plant total RNA, suitable for most polysaccharide and polyphenol-rich plant tissues. Generalmente, plant tissues rich in polysaccharides and polyphenols contain a high level of secondary phenolic metabolites and polysaccharides, significantly affecting RNA extraction efficiency. This kit can effectively remove polysaccharides and polyphenols, as well as efficiently eliminate DNA contamination from samples. If the experiment is sensitive to DNA, it is recommended to use primers spanning introns for downstream experiments.
The RNA Fast Purification Kit can extract total RNA from plant tissues (compreso l'RNA nucleare e l'RNA citoplasmatico) entro 1 ora. L'RNA estratto può essere utilizzato direttamente per la RT-PCR, Northern blotting, eccetera. L'intero processo di purificazione non richiede reagenti tossici come il fenolo-cloroformio, making this RNA purification kit suitable for various other sample types.
- Principi e procedure sperimentali
- Processo di estrazione
Precauzioni prima di iniziare l'esperimento:
UN. Prima di usare Tampone di lavaggio 1, add the specified amount of absolute ethanol according to the label on the reagent bottle, e seleziona la casella sull'etichetta per indicare che è stato aggiunto etanolo assoluto.
B. Il buffer di eluizione è un 0.1x soluzione TE contenente una quantità minima di EDTA. Se l'EDTA influisce sugli esperimenti successivi, si consiglia di sostituire il tampone di eluizione con acqua deionizzata sterile.
- Elaborazione del campione:
UN. Raccolta e stoccaggio dei materiali:
Se i materiali freschi non possono essere utilizzati immediatamente, metterli in azoto liquido e conservarli a -80°C.
B. Whenever possible, collect fresh materials, as they contain fewer polysaccharides and polyphenols.
2. Grind approximately 100 mg of fresh samples or not more than 20 mg di materiale secco utilizzando azoto liquido.
3. Aggiungere 600μl RNA Extraction Buffer I, ensuring there are no blocky tissues in the ground sample. Blocky tissues are difficult to lyse and can reduce RNA yield.
4. Vortex for 30 secondi.
5. Centrifugare il lisato 5 minuti a 12,000 giri/min.
(Nota: Polysaccharide plant materials may produce a lot of sticky substances at this step, which can shear RNA in subsequent steps. Perciò, remove these substances during this step.)
- Transfer the supernatant obtained in the previous step to a DNA Clear Purification Column, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 30 secondi, and collect the filtrate (Nota: RNA is present in the filtrate).
- Aggiungere 250ml di etanolo assoluto, mescolare pipettando. If there is a small amount of precipitation, it does not affect subsequent experiments. Add the liquid to the RNA purification column, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 30 secondi, and discard the flow-through.
- Aggiungere 700μl Inhibitor Removal Buffer alla colonna di purificazione dell'RNA, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 30 secondi, and discard the flow-through.
- Aggiungere 700μl Wash Buffer 1 alla colonna di purificazione dell'RNA, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 30 secondi, and discard the flow-through.
- Aggiungere 500μl Wash Buffer 1 alla colonna di purificazione dell'RNA, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 3 minuti, and discard the flow-through.
- Place the RNA purification column into a new 1.5ml centrifuge tube, air-dry the membrane at room temperature for 2 minuti.
(Nota: Confermare l'aggiunta di etanolo al tampone di lavaggio 1. The presence of ethanol significantly affects subsequent experiments. Perciò, membrane drying is crucial. Dopo la centrifugazione, ensure the absence of ethanol before elution. Eliminare i rifiuti e il tubo di raccolta. Dopo aver utilizzato il tampone di lavaggio 1, la membrana sulla colonna di purificazione dell'RNA dovrebbe avere solo un leggero colore. Rimuovere con attenzione la colonna di purificazione dell'RNA dopo la centrifugazione, assicurandosi che non tocchi la provetta di raccolta per evitare la contaminazione da etanolo.)
- Gocciolare 50-100μl Elution Buffer sulla membrana, centrifugare a 12,000 giri al minuto per 1 minuto, and collect the RNA solution.
(Nota: Eluting RNA with 50μl Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)
Recensioni
Non ci sono ancora recensioni.