Solarbio三酸甘油酯 (TG) 含量測定試劑盒

三酸甘油酯(TG) 含量測定試劑盒

筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.

操作設備: 酶標儀/分光光度計

目錄編號: BC0625

尺寸:100T/96S

成分:

試劑一: 自備試劑, 添加 80 mL 正庚烷和 80 mL 異丙醇至空玻璃瓶中. 密封攪拌均勻, 4℃保存.

試劑二: 3 mL×1瓶. 4℃保存.

試劑三: 10 mL×1瓶. 4℃保存.

試劑四: 3 mL×1瓶. 4℃保存, 避光. 試劑V: 10 mL×1瓶. 4℃保存, 避光. 試劑六: 10 mL×1瓶. 4℃保存, 避光.

標準: 粉劑×1瓶, 添加 5 使用前試劑 I 的毫升數. 1 mg/mL 三酸甘油酯標準溶液, 4℃保存.

產品描述:

三酸甘油酯(TG) 是由長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子, 它不僅是細胞膜的主要成分, 也是重要的呼吸基質. 用異丙醇萃取TG, TG經KOH皂化後水解為甘油和脂肪酸. 甘油被高碘酸氧化形成甲醛. 甲醛與乙醯丙酮在氯離子存在下縮合生成黃色成分. 黃色成分在以下位置具有特徵吸收： 420 nm 與 TG 含量成正比.

需要但未提供的試劑和設備:

分光光度計/酶標儀, 微型玻璃比色皿/96孔平底板, 正庚烷, 異丙醇, 水浴, 可調式移液器, 蒸餾水和 125 空瓶毫升數.

程式:

我. 樣品製備:

• 組織:

依組織質量的比例進行冰浴均質 (G): 試劑Ⅰ體積 (毫升) = 1: 5〜10 (建議採取約 0.1 g 組織並加入 1 試劑 I 的毫升數). 離心機在 8000 克為 10 4℃ 分鐘, 上清液用於測試.

• 細菌:

收集 5 百萬個細胞或細菌進入離心管, 然後棄去上清液, 最後添加 1 試劑 I 的毫升數. 用超音波分裂細菌或細胞 1 分分鐘 (力量 20%, 工作時間2s, 間隔1秒). 離心機在 8000 克為 10 4℃ 分鐘, 上清液用於測試.

• 血清: 探測

二. 程式:

1. 預熱分光光度計 30 分分鐘, 調整波長至 420 奈米, 用蒸餾水調零.
2. 水浴預熱至65℃.

試劑名稱 (微升)	空白管 (AB)	標準管( 作為)	試管(在)
蒸餾水	40	–	–
標準溶液	–	40	–
TG測試溶液	–	–	40
試劑Ⅰ	125	125	125
試劑Ⅱ	25	25	25
加入試劑I後充分混勻, 加入試劑II, 強烈搖晃 30 s, 站立幾分鐘. 分層後, 15 取上層溶液μL放入新的EP管中.

3. 檢測TG含量:

試劑名稱 (微升)	空白管 (AB)	標準管 (作為)	試管 (在)
上層解決方案	15	15	15
試劑Ⅲ (公升)	50	50	50
試劑IV (公升)	15	15	15
充分混合, 65℃水浴 3 分分鐘.
試劑Ⅴ (公升)	50	50	50
試劑Ⅵ (公升)	50	50	50
充分混合, 65℃水浴 3 分分鐘.

冷卻後, 將液體從 EP 管轉移至微型玻璃比色皿/96 孔平底板, 並測定吸光度 420 奈米.

筆記: 空白管和標準管只需測量一次.

三、. 計算:

1) 血清:

TG(毫克/分升)=C×(在- AB)÷(作為- AB)×100 =(在- AB)÷(作為- AB)×100

2) 組織:

蛋白質濃度:

TG(毫克/毫克蛋白質)= C×V×(在- AB)÷(作為- AB) ÷(心電圖×V)=(在- AB)÷(作為- AB) ÷心肺復甦

樣品重量:

TG(毫克/克) = C×V×(在- AB)÷(作為- AB) ÷W=(在- AB)÷(作為- AB) ÷W

3 ) 細菌或 細胞:

TG(U/104細胞) =C×(在- AB)÷(作為- AB) ÷D=(在- AB)÷(作為- AB) ÷D 1dL =100 毫升;

V: 試劑體積1, 1 毫升;

C: 標準濃度, 1 毫克/毫升;

心肺復甦: 樣品蛋白濃度 (毫克/毫升); 瓦: 樣品重量(G);

D: 細菌或細胞的密度, 104 細胞/毫升.

筆記:

1. 試劑盒中有揮發性物質. 實驗過程中應戴上手套及口罩. 使用後應及時蓋緊試劑瓶蓋。
2. 加入試劑Ⅱ後, 需要反覆劇烈振動, 使試液中的三酸甘油酯能夠充分萃取出來, 和振盪幅度, 時間, 重複次數及等待分層時間應為
3. 為了保證測試的重複性, 每次水浴後的冷卻時間應為
4. 如果試管的OD值大於 1.5, 建議測試前用試劑I適當稀釋樣品, 計算時乘以對應的稀釋倍數.

參考

• 弗萊徹 M J. 測定血清三酸甘油酯的比色法[J]. 臨床化學學報, 1968, 22(3): 393-397.
• 赫拉克勒斯 D M, 希恩·T·L. 化學發光法測定血清甘油和三酸甘油酯[J]. 分析化學, 1978, 50(1):22-25.

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技術規格:

檢測極限: 0.0372 毫克/毫升

線性範圍: 0.0625-3 毫克/毫升