Solarbio植物去氫酶 (PDHA) 活性測定試劑盒

植物脫氫酶 (PDHA) 活性測定試劑盒

筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.

操作設備: 酶標儀/分光光度計

目錄號: BC3125

尺寸:100T/48S

成分:

試劑一: 粉末×2. 4℃保存. 將一瓶粉末溶解在水中以製成 50 使用前毫升, 使用時配製溶液. 配製後4℃避光保存.

試劑二: 液體 100 毫升×2. 4℃保存.

試劑三: 乙酸乙酯, 需要但未提供.

產品描述:

植物脫氫酶的活性 (PDHA) 很大程度反映了機體的活躍狀態, 可直接顯示生物細胞降解其基質的能力.

氫受體2,3,5-三苯基氯化四唑 (技術中心) 生成紅色三苯甲腙 (鐵氟龍) 在細胞呼吸過程中接收氫氣後. TFF 在以下位置有一個特徵吸收峰 485 奈米, PDHA 活性可以透過測量吸光度來量化 485 奈米.

需要但未提供的試劑和設備:

酶標儀或分光光度計, 水浴, 桌上型離心機, 水浴, 移液器, 微型玻璃比色皿/96孔平底板 (非聚苯乙烯/聚丙烯材料), 研缽/均質器, 乙酸乙酯 (不允許快遞), 冰和蒸餾水.

程式:

我. 複雜的 萃取:

收集 0.1 克組織, 洗 3 或者 4 雙蒸汽水次數, 用濾紙吸乾備用.

二. 決心 程式:

• 預熱分光光度計/酵素標儀 30 分分鐘, 調整波長至 485 奈米, 用乙酸乙酯調零.
• 將下列試劑加入 5 mL EP 管:

試劑	對比管 (乙醯膽鹼)	試管 (在)
樣本 (G)	0.1	0.1
試劑一 (毫升)	–	1
試劑二 (毫升)	2	1
充分混合並在黑暗中靜置 3 37℃時數, 冰浴用於 5 取出後幾分鐘. 丟棄濾液, 用濾紙吸乾樣品, 置於砂漿中 / 均質器.
試劑三 (毫升)	1	1

 

三、. 計算:

A. 微型玻璃比色皿 (比色皿的光路, 1 公分)

單位定義: 一個酵素活性單位被定義為增加每一個酵素的吸光度的酵素量 0.01 每小時反應系統中每毫克組織蛋白.

PDHA活性(啊) =ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W

乙. 96 孔板 (比色皿的光路, 0.6 公分)

單位定義: 一個單位的酵素活性定義為 1 mg 的組織會增加每個組織的吸光度 0.005 反應體系中每小時.

PDHA活性(啊) =ΔA÷0.005÷T÷W=66.7×ΔA÷W

時間: 反應時間 (H), 3 小時; 瓦: 樣品重量, G.

筆記

1. 準備好後, 試劑I應保存於4℃, 避光並在一周內使用. 如果變成紅色, 它不能被使用.
2. 試劑 III 具有揮發性和毒性. 為了您的健康, 請穿實驗服, 面具, 和乳膠手套.
3. 暗反應完成後立即冰浴終止反應. 丟棄濾液, 用濾紙盡可能吸乾樣品.
4. 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測. 若吸光度較高，請稀釋上清液, 乘以公式中的稀釋倍.
5. 如果測試用 96 井平底板, 聚苯乙烯, 或聚丙烯材料 96 不建議使用平底板.

實驗範例:

1. 秤取 1 克蘆薈葉, 用雙蒸水清洗3~4次, 用濾紙吸去水分, 按確定步驟進行操作, 測量並計算 96 孔板, ΔA=AT-AC= 0.244-0.146 = 0.098, 計算酵素活性.

脫氫酶活性 (U/克質量) = 66.7×ΔA÷W = 6.5366 U/克質量.

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