Plant Dehydrogenase (PDHI) ชุดทดสอบกิจกรรม
บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.
อุปกรณ์การดำเนินงาน: Microplate Reader/ Spectrophotometer
หมายเลขแมว: BC3125
ขนาด:100ที/48ส
ส่วนประกอบ:
รีเอเจนต์ I: ผง×2. การเก็บรักษาที่ 4 ℃. Dissolve one bottle of powder in water to make 50 mL before use, prepare the solution when it will be use. Store at 4℃ and protect from light after prepared.
รีเอเจนต์ II: ของเหลว 100 mL×2. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
รีเอเจนต์ III: Ethyl acetate, จำเป็น แต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้.
รายละเอียดสินค้า:
The activity of plant dehydrogenase (PDHI) is largely reflecting the active state of the organism, which can directly indicate the ability of biological cells to degrade its matrix.
The hydrogen acceptor 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride (TTC) generates red triphenylformazone (TFF) after receiving hydrogen during cell respiration. TFF has a characteristic absorption peak at 485 นาโนเมตร, the PDHA activity can quantified by measuring the absorbance at 485 นาโนเมตร.
รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้:
Microplate Reader or spectrophotometer, อ่างอาบน้ำ, เครื่องหมุนเหวี่ยงบนโต๊ะ, อ่างอาบน้ำ, pipette, คิวเวทท์แก้วไมโคร/แผ่นก้นแบน 96 หลุม (non-polystyrene/polypropylene material), ปูน/โฮโมจีไนเซอร์, ethyl acetate (express delivery is not allowed), น้ำแข็งและน้ำกลั่น.
ขั้นตอน:
ฉัน. Complex extraction:
เก็บรวบรวม 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อ, ล้าง 3 หรือ 4 times with double steam water, blot dry with filter paper and set aside.
ครั้งที่สอง. การกำหนด ขั้นตอน:
- Preheat spectrophotometer/ microplate reader for 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 485 นาโนเมตร, set zero with ethyl acetate.
- Add the following reagents in 5 mL EP tubes:
| รีเอเจนต์ | Contrast tube (AC) | หลอดทดลอง (ที่) |
| ตัวอย่าง (ก) | 0.1 | 0.1 |
| รีเอเจนต์ I (มล) | – | 1 |
| รีเอเจนต์ II (มล) | 2 | 1 |
| Mix thoroughly and stand in dark for 3 hours at 37℃, ice bath for 5 minutes immediately after take out. Discard the filtrate, blot dry the sample with filter paper, place in mortar / homogenizer. | ||
| รีเอเจนต์ III (มล) | 1 | 1 |
สาม. การคำนวณ:
ก. micro glass cuvette (light path of the cuvette, 1 ซม.)
คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme increases the absorbance of every 0.01 for per hour every mg tissue protein in the reaction system.
PDHA Activity(U/g/h) =ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W
บี. 96 จานดี (light path of the cuvette, 0.6 ซม.)
คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of 1 mg of tissue increases the absorbance of every 0.005 for per hour in the reaction system.
PDHA Activity(U/g/h) =ΔA÷0.005÷T÷W=66.7×ΔA÷W
ต: เวลาเกิดปฏิกิริยา (ชม.), 3 ชั่วโมง; ว: น้ำหนักตัวอย่าง, ก.
บันทึก
- After prepared, Reagent I should store at 4℃, protect from light and used within one week. If it turns red, it cannot be used.
- Reagent III is volatile and toxic. For your health, please wear lab clothes, หน้ากาก, and latex gloves.
- Ice bath to stop the reaction immediately after the dark reaction was completed. Discard the filtrate, blot dry the sample with filter paper as much as possible.
- ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ. Dilute the supernatant if the absorbance is higher, multiply dilute times in the formula.
- If test with a 96 จานแบนดี, polystyrene, or polypropylene material 96 well flat-bottom plate is not recommended.
ตัวอย่างการทดลอง:
- Weigh 1g aloe leaves, wash them with double distilled water for 3–4 times, absorb the water with filter paper, operate according to the determination steps, measure and calculate with 96 จานดี, ΔA=AT-AC= 0.244-0.146 - 0.098, calculate the enzyme activity.
Dehydrogenase activity (มวลยู/กรัม) = 66.7×ΔA÷W = 6.5366 มวลยู/กรัม.
สินค้าที่เกี่ยวข้อง：
BC2030/BC2035 Isocitrate Lyase (ICL) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC3170/BC3175 Acetokinase (กก) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC2010/BC2015 Glycollic Oxidase Activity Assay Kit
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์