- 試劑盒的組成
| 規格 | 50時間 | 100時間 |
| 貓. 不. | SN0229 | SN0230 |
| DNA萃取柱 (放) | 50 (放) | 100 (放) |
| 試劑緩衝液B | 20毫升 | 2×20 毫升 |
| 試劑緩衝液C | 30 毫升 | 2×30 毫升 |
| 洗滌緩衝液 1 | 15 毫升 | 2 × 15 毫升 |
| 洗脫緩衝液 | 20 毫升 | 20 毫升 |
| 蛋白酶K | 1毫升 | 1毫升 |
| 溶菌酶 | 1毫升 | 1毫升 |
| 核糖核酸酶A | 1毫升 | 1毫升 |
| 使用說明書 | 1 | 1 |
- 貯存
該試劑盒應在室溫下保存 (15-25℃) 並且在乾燥條件下, 保存期限為 12 月. DNA 萃取純化柱可保存 1 在涼爽乾燥的環境中度過一年. 溶菌酶, 蛋白酶 K 和 RNase A 含有防腐劑, 允許在室溫下運輸, 但為了長期儲存, 應保存在-20℃.
- 試劑盒使用說明
3.1 本試劑盒適用於分子生物學研究，不得用於疾病診斷或治療.
3.2 試劑盒中部分成分含有刺激物. 建議採取防護措施，例如穿著防護衣和護目鏡.
3.3 本試劑盒使用過程中, 高速離心機, 水浴 (金屬浴), 渦旋混合器, 無水乙醇, 無菌去離子水, 和EP管需用戶自備.
- 試劑盒簡介
該套件提供了一種從各種體液和細菌培養液中分離DNA的快速有效的純化方法. 它利用基於矽的純化柱，有選擇地吸附核酸. 使用特定的緩衝溶液, 可以在內提取細菌DNA樣品 30 分分鐘. 整個純化過程不需要苯酚氯仿等有毒試劑. 提取的DNA可直接用於下游實驗 聚合酶鍊式反應, 南方印跡, 和別的.
- 實驗原理和程序
- 提取過程
開始實驗前:
- 試劑緩衝液B和C 低溫條件下可能會沉澱. 我們建議在 65℃ 加熱 5 分分鐘. 沉澱溶解後, 可以正常使用.
- 使用前, 加入規定量的無水乙醇 洗滌緩衝液 1如瓶子標籤上所示. 在標籤上打勾，表示添加了無水乙醇.
- 洗脫緩衝液是0.1x TE 解決方案含有極少量的 EDTA. EDTA是否可能影響後續實驗, 建議用無菌去離子水取代洗脫緩衝液.
- 樣品處理:
- 帶走 1 細菌培養, 離心機在 12,000 轉速為 1 分分鐘, 盡可能吸引上清液, 添加 200µl 試劑緩衝液 B到細菌細胞溶液. 一般來說, 殘留RNA對下游實驗的影響很小. 如果需要消除RNA干擾, 添加 10μL的rnasea (10毫克/毫升) 到混合物, 在37°C下孵育 2 在此期間的渦流分鐘.
- 如果處理的樣品包含革蘭氏陽性細菌, 添加 10μL溶菌酶 (10 毫克/毫升)和 200µl 試劑緩衝液 B. 一般來說, 殘留RNA對下游實驗的影響很小. 如果需要消除RNA干擾, 添加 10μL的rnasea (10毫克/毫升) 到混合物, 在37°C下孵育 15-30 在此期間的渦流分鐘.
- 添加 10μL蛋白酶K (10 毫克/毫升), 徹底倒轉並混合, 在65°C下的消化 2 分分鐘. 在此期間, 反轉並混合樣品溶液 6-7 消化後樣品溶液變得清晰的時間.
- 添加 200µl 試劑緩衝液 C到裂解物並混合. 如果出現白色沉澱, 它可以留下來定居; 一旦沉澱消失，它將不會影響隨後的實驗.
- 添加 200μL乙醇, 充分混合. 可能會發生一些降水，但不會影響隨後的實驗.
- 將獲得的液體轉移到DNA提取純度中, 置於室溫下 2 分分鐘, 離心機在 12,000 轉速為 30 秒. 將收集的廢物丟棄並將收集管重新插入下一步的淨化柱中.
- 添加 600µl 洗滌緩衝液 1, 離心機在 12,000 轉速為 30 秒, 丟棄廢棄物, 並將DNA提取純柱重新插入持有人.
(筆記: 確保添加乙醇以洗滌緩衝液 1.)
- 添加 500µl 洗滌緩衝液 1 至DNA萃取純化管柱, 離心機在 12,000 轉速為 2 分分鐘, 根據需要延長離心時間的干燥膜.
- 放置DNA萃取純化管柱 (持有者) 放入新的離心管中, 打開, 並在 65°C 下加熱 2 分分鐘. 盡可能擴展此步驟以蒸發乙醇, 防止乙醇殘基影響下游實驗.
- 添加 50-100µl 洗脫緩衝液到柱膜上, 離心機在 12,000 轉速為 2 分分鐘.
(筆記: 1. 洗脫 DNA 50 μL洗脫緩衝液可以增加DNA濃度，但會降低總DNA產量. 2. 可以將洗脫的DNA重新塗到DNA提取柱中, 再次離心 12,000 轉速為 2 分鐘以增強DNA產量。)
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