Bakteriengenom-DNA-Extraktionskit

• Bestandteile des Reagenzienkits

• Lagerung

Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25℃) und bei trockenen Bedingungen, mit einer Haltbarkeit von 12 Monate. Die DNA-Extraktions-Reinigungssäulen können aufbewahrt werden 1 Jahr in einer kühlen und trockenen Umgebung. Lysozym, Proteinase K and RNase A contain preservatives, ermöglicht den Transport bei Raumtemperatur, aber zur Langzeitlagerung, Sie sollten bei -20℃ aufbewahrt werden.

• Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits

3.1 Dieses Reagenzienkit ist für die molekularbiologische Forschung bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.

3.2 Einige Komponenten im Reagenzienkit enthalten Reizstoffe. Schutzmaßnahmen wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrille werden empfohlen.

3.3 Während der Verwendung dieses Reagenzienkits, eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren müssen vom Benutzer vorbereitet werden.

• Einführung in das Reagenzienkit

This kit provides a rapid and effective purification method for isolating DNA from various bodily fluids and bacterial culture fluids. It utilizes a silicon-based purification column that selectively adsorbs nucleic acids. With specific buffer solutions, bacterial DNA samples can be extracted within 30 Protokoll. Der gesamte Reinigungsprozess erfordert keine giftigen Reagenzien wie Phenolchloroform. The extracted DNA can be directly used for downstream experiments like PCR, Southern Blot, und andere.

• Experimentelle Prinzipien und Verfahren

• Extraktionsprozess

Vor Beginn des Experiments:

1. Reagenzpuffer B und C. kann bei niedrigen Temperaturen ausfallen. Wir empfehlen das Erhitzen bei 65 ℃ für 5 Protokoll. Nachdem sich der Niederschlag aufgelöst hat, es kann normal verwendet werden.
2. Vor Gebrauch, Fügen Sie die angegebene Menge an wasserfreiem Ethanol hinzu Waschpuffer 1Wie auf dem Flaschenetikett angegeben. Markieren Sie auf dem Etikett ein Häkchen, um die Zugabe von wasserfreiem Ethanol anzuzeigen.
3. Elutionspuffer ist ein0.1x TE-Lösungmit minimalen Mengen an EDTA enthält. Wenn EDTA nachfolgende Experimente beeinflussen könnte, Es ist ratsam, den Elutionspuffer durch steriles entionisiertes Wasser zu ersetzen.
4. Probenhandhabung:
5. Take around 1 ml of bacterial culture, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 1 Minute, Den Überstand so weit wie möglich absaugen, hinzufügen 200μl Reagenzpuffer Bto the bacterial cell solution. Allgemein, residual RNA has minimal impact on downstream experiments. If RNA interference needs to be eliminated, hinzufügen 10μl of RNaseA (10mg/ml) zur Mischung, incubate at 37°C for 2 minutes with vortexing during the period.
6. If the sample being processed contains Gram-positive bacteria, hinzufügen 10μl of Lysozyme (10 mg/ml)Und 200μl Reagenzpuffer B. Allgemein, residual RNA has minimal impact on downstream experiments. If RNA interference needs to be eliminated, hinzufügen 10μl of RNaseA (10mg/ml) zur Mischung, incubate at 37°C for 15-30 minutes with vortexing during the period.
7. Hinzufügen 10μl of Proteinase K (10 mg/ml), thoroughly invert and mix, digest at 65°C for 2 Protokoll. Während dieser Zeit, invert and mix the sample solution 6-7 times until the sample solution becomes clear after digestion.
8. Hinzufügen 200μl Reagenzpuffer C.to the lysate and mix. Wenn ein weißer Niederschlag erscheint, it can be left to settle; it won’t affect subsequent experiments once the precipitate disappears.
9. Hinzufügen 200μl of ethanol, gründlich mischen. Some precipitation might occur but won’t affect subsequent experiments.
10. Transfer the obtained liquid into a DNA extraction purification column, bei Zimmertemperatur stehen lassen 2 Protokoll, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 30 Sekunden. Discard the collected waste and reinsert the collection tube into the purification column for the next step.
11. Hinzufügen 600μl Waschpuffer 1, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 30 Sekunden, Entsorgen Sie den Abfall, and reinsert the DNA extraction purification column into the holder.

(Notiz: Ensure ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. Hinzufügen 500μl Waschpuffer 1 zur DNA-Extraktions-Reinigungssäule, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 2 Protokoll, extending the centrifugation time as needed for a drier membrane.
8. Platzieren Sie die DNA-Extraktions-Reinigungssäule (holder) in ein neues Zentrifugenröhrchen füllen, offen, und bei 65°C erhitzen 2 Protokoll. Extend this step as necessary to evaporate ethanol, preventing ethanol residues from affecting downstream experiments.
9. Hinzufügen 50-100μl Elutionspufferonto the column membrane, Zentrifuge bei 12,000 U/min für 2 Protokoll.

(Notiz: 1. Eluierende DNA mit 50 μl of Elution Buffer can increase DNA concentration but reduce the total DNA yield. 2. The eluted DNA from the eluate can be reapplied to the DNA extraction purification column, Zentrifuge erneut bei 12,000 U/min für 2 minutes to enhance DNA yield.)