โซล่าร์บิโอ ครีเอทีน ไคเนส (ซีเค) ชุดทดสอบกิจกรรม

ครีเอทีน ไคเนส (ซีเค) ชุดทดสอบกิจกรรม

บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.

อุปกรณ์การดำเนินงาน: สเปกโตรโฟโตมิเตอร์

หมายเลขแมว: BC1140

ขนาด:50ที/48ส

ส่วนประกอบ:

สารสกัดโซลูชั่น: 60 ml × 1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รีเอเจนต์ I: ผง× 1, เก็บไว้ในที่มืดที่ -20 ℃. ละลายใน 10 ML ของน้ำกลั่นก่อนใช้งาน, รีเอเจนต์ที่ไม่ได้ใช้จะถูกเก็บไว้ที่ -20 ℃หลังจากบรรจุใหม่, ห้ามแช่แข็งซ้ำ ๆ และการละลาย.

รีเอเจนต์ II: ผง× 1, เก็บไว้ที่ -20 ℃. ละลายใน 0.5 ML ของน้ำกลั่นก่อนใช้งาน, รีเอเจนต์ที่ไม่ได้ใช้จะถูกเก็บไว้ที่ -20 ℃หลังจากบรรจุใหม่, ห้ามแช่แข็งซ้ำ ๆ และการละลาย.

รีเอเจนต์ III: ผง× 2, เก็บไว้ที่ -20 ℃. ละลายใน 0.5 ML ของน้ำกลั่นก่อนใช้งาน, รีเอเจนต์ที่ไม่สามารถใช้งานได้จะถูกเก็บไว้ที่ -20 ℃หลังจากบรรจุใหม่, ห้ามแช่แข็งซ้ำ ๆ และการละลาย.

รีเอเจนต์ IV: ผง× 1, เก็บไว้ที่ -20 ℃. ละลายใน 0.65 ML ของน้ำกลั่นก่อนใช้งาน, รีเอเจนต์ที่ไม่ได้ใช้จะถูกเก็บไว้ที่ -20 ℃หลังจากบรรจุใหม่, ห้ามแช่แข็งซ้ำ ๆ และการละลาย.

รีเอเจนต์ V: 15 ml × 1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

 

รายละเอียดสินค้า:

creatine kinase (ซีเค) (อีซี 2.7.3.2) เป็นที่รู้จักกันในชื่อ creatine phosphokinase, ซึ่งส่วนใหญ่มีอยู่ในหัวใจ, กล้ามเนื้อ, และสมอง. มันสามารถย้อนกลับปฏิกิริยาของทรานส์-ฟอสฟอรัสระหว่าง creatine และ ATP. เป็นไคเนสที่สำคัญที่เกี่ยวข้องโดยตรงกับการขนส่งพลังงานของเซลล์, การหดตัวของกล้ามเนื้อและการฟื้นฟู ATP.

CK catalyzes creatine phosphate และ ADP เพื่อสร้าง creatine และ ATP, Hexokinase เร่งปฏิกิริยา ATP และกลูโคสเพื่อสร้างกลูโคส -6-phosphate, และกลูโคส -6-phosphate dehydrogenase กระตุ้นกลูโคส -6- ฟอสเฟตและ NADP+ เพื่อสร้าง NADPH, ส่งผลให้เพิ่มขึ้น 340 ค่าการดูดซับแสง NM, ซึ่งใช้เพื่อแสดงกิจกรรมของเอนไซม์ CK.

รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้

ตาชั่ง, เครื่องหมุนเหวี่ยงอุณหภูมิต่ำ, อ่างน้ำอุณหภูมิคงที่, สเปกโตรโฟโตมิเตอร์, 1 ml quartz cuvette และน้ำกลั่น.

ขั้นตอน

ฉัน. การสกัดสารละลายเอนไซม์ดิบ:

1. 1. ตัวอย่างเนื้อเยื่อ:

สัดส่วนของมวลเนื้อเยื่อ (ก): ปริมาณสารละลายสารสกัด (มล): 1:5~10 (ขอแนะนำให้ชั่งน้ำหนักประมาณ 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อ, เพิ่ม 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด) สำหรับความสม่ำเสมอ. เครื่องปั่นแยกที่ 10000 ×กรัม สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ℃, นำส่วนลอยเหนือตะกอนมาวางบนน้ำแข็งเพื่อทำการทดสอบ.

2. ตัวอย่างเซรั่ม:

ความมุ่งมั่นโดยตรง.

3. ตัวอย่างเซลล์:

จำนวนเซลล์ (104): ปริมาตรของสารสกัด(มล) คือ 500 ~ 1,000:1 (1 แนะนำให้เพิ่มสารสกัดด้วย ML 5 ล้านเซลล์), มีการเพิ่มโซลูชันสารสกัด, และเซลล์จะถูกทำลายด้วยคลื่นอัลตราโซนิกในอ่างน้ำแข็ง (พลัง: 300ว, เกี่ยวกับอัลตราโซนิก: 3ส, ช่วงเวลา: 7ส, เวลาทั้งหมด: 3 นาที). เครื่องปั่นแยกที่, 10000×กรัม สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ℃, supernatant และวางไว้บนน้ำแข็งสำหรับการทดสอบ.

ครั้งที่สอง. ทดสอบ ขั้นตอน:

1. เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ให้ร้อนมากกว่า 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 340 นาโนเมตร, และปรับเป็นศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
2. วิธีแก้ปัญหาการทำงาน: ผสมรีเอเจนต์ i, รีเอเจนต์ II, รีเอเจนต์ III, รีเอเจนต์ IV และรีเอเจนต์ V ในสัดส่วนของ 70:4:7:10:90 (อัตราส่วนปริมาตร) ก่อนใช้งาน. เตรียมเมื่อใช้วิธีแก้ปัญหา. บ่มสำหรับ 20 นาทีในอุณหภูมิห้องก่อนใช้งาน (ขั้นตอนนี้ไม่สามารถละเว้นได้).
3. ตารางปฏิบัติการ: เพิ่มรีเอเจนต์ต่อไปนี้ลงใน 1 ml cuvette

ชื่อรีเอเจนต์ (ไมโครลิตร)	หลอดเปล่า (เอบี)	หลอดทดลอง (ที่)
สารละลายเอนไซม์ดิบ	–	200
วิธีแก้ปัญหาการทำงาน	450	450
น้ำกลั่น	550	350
เพิ่มรีเอเจนต์ด้านบนลงในไฟล์ 1 ml quartz cuvette ตามลำดับ, ผสมให้เข้ากันและวัดค่าการดูดซับ A1 ที่ 340 NM สำหรับ 10 ส, วางอย่างรวดเร็วในอ่างน้ำ 37 ℃สำหรับ 3 นาที (เครื่องอ่านไมโครเพลทที่ควบคุมอุณหภูมิสามารถตั้งค่าเป็น 37 ℃), นำค่าการดูดกลืนแสง A2 ที่ 190 S และคำนวณΔAT = A2T- a1t, ΔAB = A2B- A1B, ΔA = ΔAT-ΔAB. หลอดว่างต้องทำเพียง 1-2 ครั้งเท่านั้น.

สาม. การคำนวณ ซีเค:

• คำนวณโดยความเข้มข้นของโปรตีนเนื้อเยื่อ:

คำจำกัดความของกิจกรรมของเอนไซม์: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์กระตุ้นการผลิตของ 1 NMOLOF NADPH ต่อนาทีที่ 37 ℃และ Ph7.0 ทุก ๆ มิลลิกรัมโปรตีน.

กิจกรรม CK (U/มก) = ΔA÷(ε× D)× VRT × 109 ÷ (VS × CPR) ÷ t = 268 ×ΔA÷ CPR

• คำนวณโดยคุณภาพของตัวอย่างเนื้อเยื่อ:

คำจำกัดความของกิจกรรมของเอนไซม์: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์กระตุ้นการผลิตของ 1 NMOL ของ NADPH ต่อนาทีที่ 37 ℃และ Ph7.0 ในตัวอย่างทุกกรัม.

กิจกรรม CK (น้ำหนักสด U/G) = ΔA÷(ε× D)× VRT × 109 ÷ (vs ÷ vst × w) ÷ t = 268 ×ΔA÷ W

• คำนวณโดยปริมาณซีรั่ม:

คำจำกัดความของกิจกรรมของเอนไซม์: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์กระตุ้นการผลิตของ 1 NMOL ของ NADPH ต่อนาทีที่ 37 ℃และ Ph7.0 ในซีรั่มทุกมิลลิลิตร.

กิจกรรม CK (ยู/มล) = ΔA÷(ε× D)× VRV × 109 ÷ vs ÷ t = 268 ×ΔA

• โดยจำนวนเซลล์:

คำจำกัดความของกิจกรรมของเอนไซม์: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์กระตุ้นการผลิตของ 1 NMOL ของ NADPH ต่อนาทีที่ 37 ℃และ Ph7.0 ทุก ๆ 10000 เซลล์.

กิจกรรม CK (U/104เซลล์)= ΔA÷(ε× D)× VRV × 109 ÷(vs ÷ vst × n)÷ t = 268 ×Δa÷ n

 

อี: ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ของ NADPH, 6.22× 103 L/mol/cm; ง: เส้นผ่านศูนย์กลางแสงของ Cuvette, 1 ซม.;

VRT: ปริมาตรทั้งหมดของระบบปฏิกิริยา, 0.001 มล;

VS: ปริมาตรของตัวอย่างในระบบปฏิกิริยา, 0.2 มล; VST: ปริมาตรของสารละลายสารสกัด, 1 มล;

ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล; ว: มวลของมวลตัวอย่าง, ก;

เอ็น: จำนวนเซลล์, 104 หน่วย; ต: เวลาการเกิดปฏิกิริยา, 3 นาที.

บันทึก:

1. CK ของเซรั่มไม่มั่นคง. ตัวอย่างจะถูกรวบรวมและวัดโดยเร็วที่สุด. CK ของเซรั่มมีความเสถียรสำหรับ 24 ชั่วโมงหลังจากถูกเก็บไว้ที่ 4 ℃ในที่มืด.
2. ปริมาณโปรตีนของตัวอย่างจะต้องถูกกำหนดแยกต่างหาก. โปรตีนบีซีเอ ชุดกำหนดเนื้อหาสามารถใช้สำหรับการกำหนด.
3. หากค่า OD มากกว่า 0.6, ตัวอย่างสามารถเจือจางได้อย่างเหมาะสมด้วยสารละลายสารสกัด, และสูตรการคำนวณสามารถเปลี่ยนแปลงได้ตามอัตราส่วนการเจือจาง.
4. ΔABโดยทั่วไปไม่เกิน 01.

กรณีทดลอง：

1. ใช้สมองเมาส์ 0.1 กรัม, เติมสารละลายสารสกัด 1 มล, เป็นเนื้อเดียวกันและบด. เอาส่วนเหนือตะกอนไป, จากนั้นเจือจางด้วยสารสกัด 4 เวลาและตรวจจับตามขั้นตอนที่วัดได้. คำนวณΔAT = A2T- a1t = 0.638-0.149 = 0.489, ΔAB = A2B-A1B = 0， ΔA = ΔAT-ΔAB = 0.489-0 = 0.489, คำนวณกิจกรรมของเอนไซม์ตามน้ำหนักตัวอย่าง:

กิจกรรม CK (น้ำหนัก U/G) = 268 ×ΔA÷ W × 4 (อัตราส่วนการเจือจาง) = 268 × 0.489 ÷ 0.1 × 4 (อัตราส่วนการเจือจาง （（）

= 5242.08U/g น้ำหนัก.

2. ใช้เป็ดเซรั่ม200μlเพื่อตรวจจับโดยตรง, คำนวณΔAT = A2T-A1T = 0.445-0.423 = 0.022, ΔAB = A2B- a1b = 0, ΔA = ΔAT-ΔAB = 0.022-0 = 0.022, คำนวณกิจกรรมของเอนไซม์ตามปริมาณของซีรั่ม:

กิจกรรม CK (u/ml) = 268 ×ΔA = 268 × 0.022 = 5.896 U/ml.

อ้างอิง：

• defang li, ในลู, Jichunhan, et al.eriodictyol ลดการบาดเจ็บจากกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือด. ชายแดนในภูมิคุ้มกันวิทยา. มกราคม 2561;(ถ้า 3.845)
• xu y, MENG X, hou x, และคณะ. การกลายพันธุ์ของ buthusmartensiikarsch antitumor-analgesic peptide peptide dibitsreducedinhibition ไปยัง HNAV1. 4 และ hnav1. 5 ช่องทางในขณะที่ยังคงกิจกรรมยาแก้ปวด[เจ].วารสารเคมีชีวภาพ, 2017, 292(44):18270-18280

สินค้าที่เกี่ยวข้อง：

BC2030/ BC2035 isocitrate lyase (ICL) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC3170/ BC3175 acetate kinase (กก) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC3120/ BC3125 โรงงาน dehydrogenase(PDHI) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC4220/ BC4225 4-coumaric acid coenzyme a ligase (4ซีแอล) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC4220/ BC4225 4-coumaric acid coenzyme a ligase (4ซีแอล) ชุดทดสอบกิจกรรม