ภาพรวมผลิตภัณฑ์
NR (อีซี 1.7.1.3) เป็นเอนไซม์ที่พบได้ทั่วไปในพืช. มีบทบาทสำคัญในการเปลี่ยนไนเตรตไนโตรเจนเป็นแอมโมเนียไนโตรเจน และยังเป็นเอนไซม์ที่เหนี่ยวนำได้ด้วย, ส่งผลต่อผลผลิตและคุณภาพของพืชผล. NR เร่งปฏิกิริยาการลดไนเตรตเป็นไนไตรท์: หมายเลข 3- + NADH+H+ → NO2- + แนด+ + น้ำ. ภายใต้สภาวะที่เป็นกรด, NO2 ที่ผลิต- สามารถมีส่วนร่วมในปฏิกิริยาไดอะโซไทเซชันเพื่อสร้างสารประกอบสีม่วงแดง. สารประกอบนี้มีการดูดซึมสูงสุดที่ 540 นาโนเมตร, และการเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงที่ 540 nm สามารถใช้แทนการทำงานของเอนไซม์ได้.
ส่วนประกอบชุดอุปกรณ์
- โซลูชันสต็อคตัวเหนี่ยวนำ: 50 มล. x 1 ขวด
- โซลูชั่นการสกัด: 30 มล. x 1 ขวด
- รีเอเจนต์หนึ่ง: 12 มล. x 1 ขวด
- รีเอเจนต์สอง: แป้งx 2 ขวด
- รีเอเจนต์สาม: 15 มล. x 1 ขวด
- รีเอเจนต์สี่: 15 มล. x 1 ขวด
- มาตรฐาน: 1 มล. x 1 ขวด
การเตรียมสารละลาย
- โซลูชั่นตัวเหนี่ยวนำ: เจือจางสารละลายสต๊อกตัวเหนี่ยวนำ 10 เท่าด้วยน้ำกลั่นก่อนใช้งาน. เอา 10 มิลลิลิตรของสารละลายสต๊อกตัวเหนี่ยวนำแล้วเติม 90 มิลลิลิตรของน้ำกลั่น. ผสมให้เข้ากัน. เตรียมความสดใหม่ก่อนการใช้งานแต่ละครั้ง.
- รีเอเจนต์สอง: เพิ่ม 1 มิลลิลิตรของน้ำกลั่น. แบ่งส่วนและเก็บที่อุณหภูมิ -20°C. สามารถเก็บไว้สำหรับ 2 สัปดาห์ที่อุณหภูมิ -20°C. ก่อนใช้งาน, เจือจางรีเอเจนต์สอง 50 เท่าด้วยน้ำกลั่น. เอา 10 μL ของรีเอเจนต์ 2 แล้วเติม 490 น้ำกลั่น ไมโครลิตร. ผสมให้เข้ากัน.
- มาตรฐาน: เตรียมก 0.1 สารละลายมาตรฐานโซเดียมไนไตรท์ ไมโครโมล/มิลลิลิตร โดยการเจือจาง 10 สารละลายมาตรฐานโซเดียมไนไตรท์ ไมโครโมล/มิลลิลิตร 100 เท่าด้วยน้ำกลั่นก่อนใช้งาน.
หมายเหตุ
- หากค่าการดูดกลืนแสงมากกว่า 0.8, เจือจางตัวอย่างด้วยสารละลายสำหรับสกัด. ให้ความสนใจกับการปรับปัจจัยการเจือจางตามสูตรการคำนวณ.
- ปฏิบัติตามลำดับการเติมรีเอเจนต์ที่ระบุไว้ในตารางการทดสอบตัวอย่างสำหรับการทดลองอย่างเคร่งครัด.
ขั้นตอนการทดลอง
ฉัน. ตัวอย่างการรักษา
-
การบำบัดเนื้อเยื่อล่วงหน้า:
- เติมสารละลายตัวเหนี่ยวนำในปริมาณที่เหมาะสมลงในบีกเกอร์. ล้างตัวอย่างสด, เช็ดให้แห้งด้วยกระดาษกรอง, และนำไปใส่ในสารละลายตัวเหนี่ยวนำ (พอที่จะจมอยู่ใต้น้ำ). ฟักตัวในที่มืดเพื่อ 2 ชั่วโมง. ลบตัวอย่าง, เช็ดให้แห้งด้วยกระดาษกรอง, และนำไปแช่แข็งที่อุณหภูมิ -20°C เป็นเวลา 30 นาที. ละลายตัวอย่างและทำให้แห้งด้วยกระดาษกรองอีกครั้ง. (ทำการรักษาแบบเหนี่ยวนำตามความจำเป็น. โดยทั่วไป, ไม่จำเป็นต้องมีการบำบัดแบบเหนี่ยวนำ. หากผลการทดลองก่อนไม่แสดงการเคลื่อนไหวใดๆ, จำเป็นต้องมีการบำบัดแบบเหนี่ยวนำ)
- ชั่งน้ำหนักประมาณ 0.1 กรัมของตัวอย่างและเพิ่ม 1 สารละลายสกัดมิลลิลิตรตามอัตราส่วนของน้ำหนักเนื้อเยื่อ (ก) ถึงปริมาตรสารละลายในการสกัด (มล) ของ 1:5 ถึง 10. บดในอ่างน้ำแข็ง, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 8000 ก, 4°C สำหรับ 10 นาที, และรวบรวมส่วนเหนือตะกอน. เก็บส่วนเหนือตะกอนไว้บนน้ำแข็งเพื่อทำการทดสอบ.
-
การบำบัดเซลล์หรือแบคทีเรียล่วงหน้า:
- เก็บตัวอย่างเซลล์หรือแบคทีเรียในหลอดหมุนเหวี่ยงและทิ้งส่วนลอยเหนือตะกอน. เพิ่ม 1 มล. ของสารละลายสกัดต่อ 5 ล้านเซลล์หรือแบคทีเรีย. Sonicate แบคทีเรียหรือเซลล์ (พลัง 200 ว, โซนิค 3 วินาที, ช่วงเวลา 10 วินาที, ทำซ้ำ 30 ครั้ง). เครื่องปั่นแยกที่ 8000 ก, 4°C สำหรับ 10 นาที, รวบรวมส่วนเหนือตะกอนและเก็บไว้บนน้ำแข็งเพื่อทำการทดสอบ.
ครั้งที่สอง. ขั้นตอนการทดสอบ
- เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่มองเห็นได้ล่วงหน้าอย่างน้อย 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 540 นาโนเมตร, และศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
- การทดสอบตัวอย่าง:
| ชื่อรีเอเจนต์ | หลอดทดลอง | หลอดควบคุม | ท่อมาตรฐาน | หลอดเปล่า |
|---|---|---|---|---|
| ตัวอย่าง | 100 ไมโครลิตร | – | – | – |
| 0.1 สารละลายมาตรฐาน ไมโครโมล/มิลลิลิตร | – | – | 100 ไมโครลิตร | – |
| น้ำกลั่น | – | 375 ไมโครลิตร | – | 475 ไมโครลิตร |
| รีเอเจนต์หนึ่ง | 375 ไมโครลิตร | – | 375 ไมโครลิตร | – |
| รีเอเจนต์สอง | 125 ไมโครลิตร | 125 ไมโครลิตร | 125 ไมโครลิตร | 125 ไมโครลิตร |
| รีเอเจนต์สาม | 250 ไมโครลิตร | 250 ไมโครลิตร | 250 |
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์