ชุดตรวจจับการกลายพันธุ์ของยีน EGFR ของมนุษย์ (วิธี PCR-เรืองแสง) 12T สำหรับการวิจัย

รายละเอียดสินค้า:

• ชื่อ: ชุดตรวจจับการกลายพันธุ์ของยีน EGFR
• วัตถุประสงค์: การตรวจหาเชิงคุณภาพ 11 การกลายพันธุ์ทั่วไปในยีน EGFR ของมนุษย์.
• ตัวอย่าง: ตัวอย่าง DNA จากส่วนที่ฝังพาราฟินของผู้ป่วยที่ได้รับการวินิจฉัยทางคลินิกว่าเป็นมะเร็งปอดชนิดไม่ใช่เซลล์ขนาดเล็ก.
• การยืนยัน: ผลิตภัณฑ์ได้รับการตรวจสอบประสิทธิภาพการตรวจจับการกลายพันธุ์ของยีนเป้าหมาย แต่ไม่ได้ใช้ร่วมกับยาเฉพาะในการทดลองทางคลินิก.

การใช้และข้อจำกัด:

• ใช้: ผลการตรวจพบสามารถช่วยในการคัดกรองผู้ป่วยมะเร็งปอดชนิดไม่ใช่เซลล์ขนาดเล็กที่เหมาะสมสำหรับการรักษาที่กำหนดเป้าหมาย EGFR.
• ข้อจำกัด: ผลการตรวจจับเพียงอย่างเดียวไม่สามารถใช้เป็นพื้นฐานเพียงอย่างเดียวสำหรับการวินิจฉัยทางคลินิก.

ข้อมูลความเป็นมา:

• อีจีเอฟอาร์: ตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตของผิวหนังชั้นนอก, โปรตีนเมมเบรนที่สำคัญต่อการเพิ่มจำนวนเซลล์, การเจริญเติบโต, ซ่อมแซม, และการอยู่รอดของเซลล์เนื้องอก.
• โครงสร้างยีน: ตั้งอยู่บนโครโมโซม 7 (7หน้า 12~14), ยีน EGFR ประกอบด้วย 28 เอ็กซอน. เอ็กซอน 18-24 สร้างโดเมนไทโรซีนไคเนสที่เข้ารหัสยีน.
• โฟกัสการกลายพันธุ์: การกลายพันธุ์ส่วนใหญ่เกิดขึ้นในเอ็กซอน 18-21, โดยเฉพาะอย่างยิ่งเอ็กซอน 19 การลบและ exon 21 การกลายพันธุ์ของ L858R.
• ความเกี่ยวข้องทางคลินิก: การกลายพันธุ์เหล่านี้ทำนายประสิทธิภาพของยาเป้าหมายในการรักษามะเร็งปอดชนิดเซลล์ไม่เล็กและแนะนำการเลือกใช้ยารักษาเนื้องอก.
• ข้อกำหนดขององค์การอาหารและยา: การตรวจจับการกลายพันธุ์ของยีน EGFR ได้รับคำสั่งสำหรับผู้ป่วยที่กำลังพิจารณาการรักษา EGFR-TKI.

โต๊ะ 1: การกลายพันธุ์ทั่วไปของยีน EGFR

การกลายพันธุ์	เอ็กซอน	การเปลี่ยนแปลงลำดับกรดอะมิโน	การเปลี่ยนแปลงลำดับฐาน	รหัสจักรวาล
เช่น 18-Mu-1	18	G719S	2155ช>ก	6252
เช่น 18-Mu-2	18	G719C	2155ช>ต	6253
เช่น 18-Mu-3	18	G719A	2156ช>ค	6239
เช่น 19-Mu-1	19	Glu746-Ala750del	2235-2249ของ	6223
อดีต 20-Mu-1	20	S768I	2303ช>ต	6241
อดีต 20-Mu-2	20	T790M	2369ค>ต	6240
เช่น 20-Mu-3	20	V769-D770insASV	2307_2308insGCCAGCGTG	12376
เช่น 20-Mu-4	20	H773-V774insH	2319_2320insCAC	12377
เช่น 20-Mu-5	20	D770-N771insG	2310_2311insGGT	12378
เช่น 21-Mu-1	21	L858R	2573ต>ช	6224
เช่น 21-Mu-2	21	L861Q	2582ต>ก	6213

หลักการทดสอบ

ชุดนี้ออกแบบมาเพื่อตรวจจับการกลายพันธุ์เฉพาะในยีน EGFR. ประกอบด้วยไพรเมอร์และโพรบสำหรับการตรวจจับ:

1. การกลายพันธุ์ของ G719X (G719S, G719C, G719A) ในเอ็กซอน 18,
2. การลบการกลายพันธุ์ของ exon 19 (รวมถึง 2235-2249del 15),
3. การกลายพันธุ์ของ S768I และ T790M ใน exon 20,
4. การกลายพันธุ์ของการแทรกสามประเภท (2307_2308insGCCAGCGTG, 2319_2320insCAC, และ 2310_2311insGGT),
5. การกลายพันธุ์ของ L858R และ L861Q ใน exon 21.

ระหว่างการตรวจจับการกลายพันธุ์, หากตัวอย่างมีเทมเพลต DNA ที่กลายพันธุ์:

• ไพรเมอร์และโพรบเฉพาะสำหรับการกลายพันธุ์ที่ตรวจพบจะจับกับเทมเพลต DNA.
• พีซีอาร์ การขยายเสียงจะเกิดขึ้น, ปล่อยสัญญาณเรืองแสง.
• การตรวจสอบแบบเรียลไทม์และเอาต์พุตความแรงของสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์จะดำเนินการโดยใช้เครื่องขยายสัญญาณ PCR เชิงปริมาณฟลูออเรสเซนต์.

หากตัวอย่างไม่มีเทมเพลต DNA ที่กลายพันธุ์:

• ไพรเมอร์และโพรบเฉพาะสำหรับการกลายพันธุ์จะไม่จับกับ DNA ของเทมเพลต, มิฉะนั้นการผูกมัดจะถูกปิดกั้น.
• ซึ่งจะส่งผลให้ไม่มีการขยาย PCR หรือยับยั้งการขยาย PCR.
• เพราะเหตุนี้, จะไม่มีการปล่อยสัญญาณเรืองแสง.

โดยรวม, ชุดนี้ช่วยให้สามารถวิเคราะห์ผลการตรวจจับเชิงคุณภาพผ่านการตรวจสอบสัญญาณเรืองแสงแบบเรียลไทม์ในระหว่างการขยาย PCR.

โต๊ะ 2 ส่วนประกอบหลักของชุดคิท

หมายเลขท่อ.	ชื่อป้ายกำกับ	ส่วนผสมหลัก	ข้อกำหนดการบรรจุ (12 การทดสอบ/ชุดอุปกรณ์)	ข้อกำหนดการบรรจุ (24 การทดสอบ/ชุดอุปกรณ์)
1	ของเหลวทำปฏิกิริยา G719X PCR	บัฟเฟอร์ PCR, dNTP, ไพรเมอร์และโพรบ G719X	1 หลอด (290ไมโครลิตร)	1 หลอด (580ไมโครลิตร)
2	S768I ของเหลวปฏิกิริยา PCR	บัฟเฟอร์ PCR, dNTP, S768I ไพรเมอร์และโพรบ	1 หลอด (290ไมโครลิตร)	1 หลอด (580ไมโครลิตร)
3	ของเหลวปฏิกิริยา PCR T790M	บัฟเฟอร์ PCR, dNTP, ไพรเมอร์และโพรบ T790M	1 หลอด (290ไมโครลิตร)	1 หลอด (580ไมโครลิตร)
4	ของเหลวปฏิกิริยา PCR L858R	บัฟเฟอร์ PCR, dNTP, ไพรเมอร์และโพรบ L858R	1 หลอด (290ไมโครลิตร)	1 หลอด (580ไมโครลิตร)
5	ของเหลวปฏิกิริยา PCR L861Q	บัฟเฟอร์ PCR, dNTP, ไพรเมอร์และโพรบ L861Q	1 หลอด (290ไมโครลิตร)	1 หลอด (580ไมโครลิตร)
6	ของเหลวปฏิกิริยา Ins PCR	บัฟเฟอร์ PCR, dNTP, อินไพรเมอร์และโพรบ	1 หลอด (290ไมโครลิตร)	1 หลอด (580ไมโครลิตร)
7	ของเหลวปฏิกิริยา Del PCR	บัฟเฟอร์ PCR, dNTP, ตั้งแต่ครั้งแรกและการสอบสวน	1 หลอด (290ไมโครลิตร)	1 หลอด (580ไมโครลิตร)
8	ของเหลวปฏิกิริยา PCR ควบคุมคุณภาพ	บัฟเฟอร์ PCR, dNTP, ไพรเมอร์และโพรบควบคุมคุณภาพ	1 หลอด (290ไมโครลิตร)	1 หลอด (580ไมโครลิตร)
9	ส่วนผสมของเอนไซม์	ส่วนผสมเอนไซม์ที่ประกอบด้วยเอนไซม์ Taq และเอนไซม์ UNG	1 หลอด (24ไมโครลิตร)	1 หลอด (48ไมโครลิตร)
10	สีย้อมอ้างอิง	สีย้อมร็อกซ์	1 หลอด (45ไมโครลิตร)	1 หลอด (90ไมโครลิตร)
11	เทมเพลตมาตรฐานภายใน	เทมเพลต DNA มาตรฐานภายใน	1 หลอด (100ไมโครลิตร)	1 หลอด (100ไมโครลิตร)
12	การควบคุมเชิงบวกที่อ่อนแอ	มีเทมเพลต DNA การกลายพันธุ์	1 หลอด (200ไมโครลิตร)	1 หลอด (200ไมโครลิตร)
13	การควบคุมที่ว่างเปล่า	ทริส-HCl กันชน (10มม)	1 หลอด (200ไมโครลิตร)	1 หลอด (200ไมโครลิตร)

สภาพการเก็บรักษาและอายุการเก็บรักษา:

1. อายุการเก็บรักษาของชุดคือ 9 เดือนเมื่อเก็บไว้ที่ -20°C±5°C และป้องกันไม่ให้ถูกแสง.
2. ลดการแช่แข็งและการละลายให้เหลือน้อยกว่า 6 ครั้งระหว่างการใช้งาน.
3. วันผลิตและวันหมดอายุระบุไว้บนฉลาก.

เครื่องมือที่ใช้บังคับ:

1. ชุดนี้เข้ากันได้กับ Stratagene MX3000P, เอบี 7500, และไลท์ไซเคิล 480 เครื่องขยายสัญญาณ PCR เชิงปริมาณฟลูออเรสเซนต์แบบเรียลไทม์.
2. ใช้ช่อง FAM เพื่อรวบรวมสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ของการขยายยีน EGFR, ช่อง VIC/JOE/HEX สำหรับสัญญาณขยายยีนมาตรฐานภายใน, และตั้งค่าสัญญาณอ้างอิง (ร็อกซ์).

ข้อกำหนดของตัวอย่าง:

1. DNA คุณภาพสูงเป็นสิ่งสำคัญ. ชุดนี้เหมาะสำหรับการตรวจหา DNA จีโนมมนุษย์ที่สกัดจากเนื้อเยื่อพยาธิวิทยาที่ฝังพาราฟินซึ่งได้รับการยืนยันจากแพทย์ว่ามีเนื้อเยื่อเนื้องอก. ตัวอย่างภายใน 3 มีการแนะนำปี.
2. ชุดสกัด DNA ของ QIAGEN (QIAamp ดีเอ็นเอ เอฟเอฟพีอี ชุดทิชชู่, หมายเลขแมว. 56404) ขอแนะนำ. ควรทดสอบความเข้มข้นและความบริสุทธิ์ของ DNA ที่สกัดด้วยเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV (OD260/OD280: 1.8-2.0). เจือจาง DNA เป็น 10-15ng/μL แล้วทดสอบทันทีหรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำกว่า -20°C โดยไม่ต้องแช่แข็งหรือละลายซ้ำๆ.

วิธีทดสอบ:

1. การเตรียมรีเอเจนต์:

1. ปล่อยให้ชุดอุปกรณ์มีอุณหภูมิห้อง, ละลายส่วนประกอบทั้งหมดจนหมด, และเครื่องปั่นแยกเพื่อ 10 วินาที.
2. กำหนดจำนวนปฏิกิริยา (n) จำเป็น. เตรียมตัว 7 ชนิดของการผสมปฏิกิริยา PCR กลายพันธุ์และการควบคุมคุณภาพ การผสมปฏิกิริยา PCR ตามวิธีการที่ระบุในตารางที่ 1 3.
3. $n-\text{จำนวนตัวอย่าง}+\text{การควบคุมที่ว่างเปล่า (1ต)}+\text{การควบคุมเชิงบวกที่อ่อนแอ (1ต)}$
4. บรรจุหลอดที่เตรียมไว้ 1-8 ของเหลวปฏิกิริยา PCR ลงในหลอดปฏิกิริยาตามปริมาณการบรรจุ23μLต่อหลุม.
5. ย้ายหลอดปฏิกิริยา PCR ไปยังพื้นที่เตรียมชิ้นงานทดสอบ. เก็บรีเอเจนต์ที่เหลือกลับเข้าไปในตู้เย็นที่อุณหภูมิ -20°C ±5°C เพื่อการแช่แข็งและป้องกันแสง.

โต๊ะ 3: วิธีการเตรียมระบบปฏิกิริยา PCR แต่ละระบบ

ส่วนประกอบ	สูตรของระบบปฏิกิริยาเดี่ยว	สูตรของระบบปฏิกิริยา n
ของเหลวปฏิกิริยา PCR	22.3ไมโครลิตร	22.3×n ไมโครลิตร
ส่วนผสมของเอนไซม์	0.2ไมโครลิตร	0.2×n ไมโครลิตร
สีย้อมอ้างอิง (ร็อกซ์)	0.4ไมโครลิตร	0.4×n ไมโครลิตร
เทมเพลตมาตรฐานภายใน	0.1ไมโครลิตร	0.1×n ไมโครลิตร

2. การเตรียมตัวอย่าง:

(พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)

1. การสกัด DNA ของตัวอย่าง:
   • ปฏิบัติตามคำแนะนำที่มาพร้อมกับชุดสกัด DNA จีโนมเชิงพาณิชย์ที่ซื้อมา.
2. การเพิ่มตัวอย่าง:
   • ก) เพิ่มจีโนมดีเอ็นเอ, การควบคุมเชิงบวกอย่างอ่อน, และการควบคุมชิ้นงานทดสอบเปล่าที่จะทดสอบในหลอดปฏิกิริยาที่มี 1-8 ส่วนผสมปฏิกิริยา PCR. แต่ละชิ้นงานทดสอบด้วย 8 ประเภทของส่วนผสมปฏิกิริยา PCR, ด้วยปริมาณเพิ่มเติม 2μL ต่อหลุม. ความเข้มข้นที่แนะนำของตัวอย่าง DNA คือ 10-15ng/μL.
   • ข) หากไม่สามารถวางท่อปฏิกิริยา PCR ที่มีแม่แบบเพิ่มเติมไว้บนเครื่องมือได้ทันทีเนื่องจากสถานการณ์ชั่วคราว, เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8 ℃ชั่วคราวและดำเนินการตรวจจับเครื่องมือโดยเร็วที่สุดภายใน 24 ชั่วโมง.

3. การขยาย PCR:

(พื้นที่ขยายกรดนิวคลีอิก)

1. สตาร์ทเครื่องมือและทำการตรวจสอบประสิทธิภาพของเครื่องมือด้วยตนเอง.
2. นำหลอดปฏิกิริยา PCR ที่เตรียมไว้ในพื้นที่เตรียมตัวอย่างและวางไว้ในตำแหน่งที่สอดคล้องกันในถังตัวอย่างของเครื่องมือ. บันทึกลำดับตำแหน่ง.
3. ตั้งค่าพารามิเตอร์ที่เกี่ยวข้องสำหรับการขยายกรดนิวคลีอิกตามตาราง 4 และเริ่มการขยาย PCR. หลังจากปฏิกิริยาเสร็จสิ้น, กำหนดเกณฑ์การเรืองแสงที่เหมาะสม (โดยทั่วไปคั่นกลางระยะการเติบโตแบบเอ็กซ์โปเนนเชียลภายใต้รูปแบบลอการิทึมของเส้นโค้งการขยาย) เพื่อรับค่า Ct สำหรับช่องต่างๆ และคำนวณค่า △Ct ที่เกี่ยวข้องตามเส้นโค้งการขยาย.

โต๊ะ 4: พารามิเตอร์ที่เกี่ยวข้องของการขยายกรดนิวคลีอิกของเครื่องมือ

เงื่อนไขปฏิกิริยา PCR	เฟส	เงื่อนไข	จำนวนรอบ
การรักษาด้วยอึ้ง	37℃	10 นาที (นาที)	1
ก่อนการเสื่อมสภาพ	95℃	5 นาที (นาที)	1
พีซีอาร์	95℃	15 วินาที (ส)	40
	60℃	60 วินาที (ส)
		(สัญญาณเรืองแสงที่รวบรวมเมื่อสิ้นสุดเฟสนี้)

การรับสัญญาณ:

• ยีน EGFR: สัญญาณเรืองแสงจะถูกรวบรวมจากช่อง FAM.
• ยีนมาตรฐานภายใน: สัญญาณเรืองแสงจะถูกรวบรวมจากช่อง HEX/VIC/JOE.

การวิเคราะห์ผลลัพธ์:

หลังจากทำปฏิกิริยาเสร็จแล้ว, เกณฑ์ถูกตั้งค่าตามเส้นโค้งการขยายเพื่อคำนวณ △Ct (△Ct = การตรวจจับการกลายพันธุ์ Ct – การตรวจสอบการควบคุมคุณภาพกะรัต) และตีความผลลัพธ์.

การตีความผลการทดสอบ:

1. การกำหนดประสิทธิผลของชุดอุปกรณ์:

1. การควบคุมเชิงบวกที่อ่อนแอ:
   • ค่า Ct ของช่อง FAM คือ ≤32 โดยมีระยะการเติบโตแบบเอ็กซ์โพเนนเชียลที่ชัดเจนในกราฟการขยายสัญญาณ.
2. การควบคุมที่ว่างเปล่า:
   • ช่อง FAM ไม่แสดงเส้นโค้งการขยายสัญญาณหรือเส้นตรงหรือเส้นเฉียงเล็กน้อย. ไม่มีระยะการเติบโตแบบทวีคูณที่ชัดเจน, ค่ากะรัตคือ ≥38.
3. ยีนมาตรฐานภายใน:
   • อยู่ในการควบคุมที่ว่างเปล่า, ค่า Ct ของช่อง HEX/VIC/JOE คือ <38 ด้วยระยะการเติบโตแบบทวีคูณที่ชัดเจน.
   • ในตัวอย่างที่ทดสอบและหลอดปฏิกิริยาบวกอย่างอ่อน, การขาดสัญญาณเป็นครั้งคราวในช่อง HEX/VIC/JOE เมื่อช่อง FAM มีสัญญาณอาจเกิดขึ้นเนื่องจากการยับยั้งการขยายมาตรฐานภายในโดยการขยายยีนเป้าหมาย.

2. การกำหนดประสิทธิผลของชิ้นงานทดสอบ:

1. ของเหลวปฏิกิริยา PCR ควบคุมคุณภาพ:
   • สำหรับช่อง FAM, กะรัต < 23, บ่งชี้ถึงการให้ยาเกินขนาดของจีโนม DNA ของตัวอย่าง. แนะนำให้ทำการทดสอบซ้ำหลังจากการเจือจาง.
2. ของเหลวปฏิกิริยา PCR ควบคุมคุณภาพ:
   • สำหรับช่อง FAM, 23 ≤ กะรัต ≤ 30, บ่งชี้ปริมาณ DNA ของตัวอย่างจีโนมในระดับปานกลาง.
3. ของเหลวปฏิกิริยา PCR ควบคุมคุณภาพ:
   • สำหรับช่อง FAM, 30 < กะรัต < 34, บ่งชี้ปริมาณ DNA ของตัวอย่างจีโนมที่ต่ำกว่า. ประเภทการกลายพันธุ์สามารถทดสอบได้เฉพาะในตัวอย่างที่มีปริมาณ DNA การกลายพันธุ์สูงกว่าเท่านั้น.
4. ของเหลวปฏิกิริยา PCR ควบคุมคุณภาพ:
   • สำหรับช่อง FAM, กะรัต ≥ 34, บ่งชี้ว่าปริมาณการเพิ่มของจีโนม DNA ของตัวอย่างต่ำเกินไป. ต้องมีการเตรียมตัวอย่างใหม่หรือเพิ่มปริมาณการใช้งานเพื่อการตรวจจับ.

3. การกำหนดผลการตรวจจับ:

หลังจากพิจารณาประสิทธิภาพการตรวจจับแล้ว, คำนวณค่า △Ct ของชิ้นงานการตรวจจับที่มีประสิทธิผล และกำหนดผลการตรวจจับตามขั้นตอนและตารางต่อไปนี้ 5 เพื่อยืนยันการมีอยู่ของการกลายพันธุ์ในตัวอย่าง.

1. ในการตรวจจับการกลายพันธุ์ของสิ่งส่งตรวจ, มูลค่ากะรัต > 36 บ่งชี้ว่าชิ้นงานทดสอบมีค่าลบหรือต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจจับล่างของชุดอุปกรณ์นี้.
2. ในการตรวจจับการกลายพันธุ์ของสิ่งส่งตรวจ, ถ้าค่า Ct เท่ากับ ≤ 36, คำนวณค่า △Ct ของหลอดปฏิกิริยานี้. หากค่า △Ct น้อยกว่าค่าจุดตัด △Ct ที่สอดคล้องกัน, ตัวอย่างนั้นถือว่ามีการกลายพันธุ์เป็นบวก. มิฉะนั้น, จะถือว่าการกลายพันธุ์เป็นลบหรือต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจจับล่างของชุดอุปกรณ์นี้.
3. การใช้เกณฑ์การพิจารณาข้างต้น, ประเภทการกลายพันธุ์ของตัวอย่างที่เป็นบวกของ G719X อาจเป็นหนึ่งใน G719S, G719C, และ G719A. ประเภทการกลายพันธุ์ของตัวอย่างเชิงบวกของ Ins อาจเป็นหนึ่งใน V769-D770insASV, H773-V774insH, และ D770-N771insG. สินค้านี้ไม่สามารถแบ่งแยกได้อีก.

โต๊ะ 5: การกำหนดผลลัพธ์

ของเหลวปฏิกิริยา	ประเภทการกลายพันธุ์	เชิงลบ	เชิงบวก
ของเหลวทำปฏิกิริยา G719X PCR	G719X	กะรัต > 36 หรือไม่มีค่า Ct	กะรัต ≤ 36, ∆Ct ≥ 7
S768I ของเหลวปฏิกิริยา PCR	S768I	กะรัต > 36 หรือไม่มีค่า Ct	กะรัต ≤ 36, ∆Ct ≥ 7
ของเหลวปฏิกิริยา PCR T790M	T790M	กะรัต > 36 หรือไม่มีค่า Ct	กะรัต ≤ 36, ∆Ct ≥ 7
ของเหลวปฏิกิริยา PCR L858R	L858R	กะรัต > 36 หรือไม่มีค่า Ct	กะรัต ≤ 36, ∆Ct ≥ 7
ของเหลวปฏิกิริยา PCR L861Q	L861Q	กะรัต > 36 หรือไม่มีค่า Ct	กะรัต ≤ 36, ∆Ct ≥ 7
ของเหลวปฏิกิริยา Ins PCR	อิน	กะรัต > 36 หรือไม่มีค่า Ct	กะรัต ≤ 36, ∆Ct ≥ 6
ของเหลวปฏิกิริยา Del PCR	ของ	กะรัต > 36 หรือไม่มีค่า Ct	กะรัต ≤ 36, ∆Ct ≥ 6

ข้อจำกัดของวิธีทดสอบ:

1. ความแม่นยำของผลการตรวจจับชิ้นงานขึ้นอยู่กับคุณภาพของการเก็บตัวอย่าง, การรักษา, และการจัดเก็บ. ข้อผิดพลาดในกระบวนการเหล่านี้อาจนำไปสู่ผลลัพธ์การตรวจจับที่ไม่ถูกต้อง. คุณภาพ DNA ที่ไม่ดีในระหว่างการรักษาสิ่งส่งตรวจอาจส่งผลให้เกิดผลลบลวง. สำหรับช่อง FAM ของของเหลวปฏิกิริยา PCR ควบคุมคุณภาพ, ตัวอย่างที่มีค่า Ct ระหว่าง 23 และ 30 บ่งบอกถึงคุณภาพ DNA ที่ค่อนข้างดีและการเติมตัวอย่างในระดับปานกลาง, ส่งผลให้ผลการตรวจจับแม่นยำที่สุด.
2. ผลลัพธ์เชิงลบที่ได้จากการตรวจจับสิ่งส่งตรวจไม่สามารถแยกแยะการมีอยู่ของการกลายพันธุ์ที่มีความอุดมสมบูรณ์ต่ำหรือการกลายพันธุ์ในตำแหน่งอื่นของยีน EGFR.
3. ผลการตรวจจับของชุดอุปกรณ์นี้มีจุดประสงค์เพื่อใช้อ้างอิงทางคลินิกเพื่อเป็นแนวทางในการใช้ยาเฉพาะบุคคล และไม่ควรใช้เป็นพื้นฐานเพียงอย่างเดียวสำหรับการวินิจฉัยทางคลินิก.

ดัชนีประสิทธิภาพของผลิตภัณฑ์:

1. ชุดนี้บรรจุเต็มโดยไม่มีเนื้อหาล้น. ฉลากมีเนื้อหาระบุตัวตนที่ชัดเจน. องค์ประกอบของชุดอุปกรณ์ถูกต้องโดยไม่ต้องทำซ้ำหรือส่วนประกอบขาดหายไป.
2. ตรวจพบการอ้างอิงเฉพาะโดยใช้ 7 ประเภทของของเหลวปฏิกิริยาการกลายพันธุ์ที่รวมอยู่ในชุดอุปกรณ์, และผลการตรวจจับทั้งหมดเป็นลบ.
3. ตรวจพบความไวของการกลายพันธุ์ที่สอดคล้องกันโดยใช้ 7 ประเภทของของเหลวปฏิกิริยาการกลายพันธุ์ที่รวมอยู่ในชุดอุปกรณ์, และผลการตรวจจับทั้งหมดเป็นบวก.
4. ขีดจำกัดต่ำสุดของการตรวจจับสามารถเข้าถึงได้ 1%, ช่วยให้สามารถตรวจจับการกลายพันธุ์ของยีน EGFR ประเภทต่างๆ ใน ​​DNA จีโนม 20ng.
5. ชุดนี้ใช้เพื่อตรวจจับการอ้างอิงที่แม่นยำของยีน EGFR ซ้ำๆ 10 ครั้ง, ด้วยค่าสัมประสิทธิ์การแปรผันภายในการทดสอบ (ประวัติย่อ) ของ ≤5%.

ข้อควรระวัง:

1. ชุดนี้มีไว้สำหรับการวินิจฉัยภายนอกร่างกายเท่านั้น.
2. อย่าผสมรีเอเจนต์จากชุดอุปกรณ์นี้กับรีเอเจนต์จากล็อตอื่น.
3. การควบคุมเชิงบวกเล็กน้อยในชุดอุปกรณ์นี้ไม่ติดต่อ แต่ควรได้รับการจัดการเนื่องจากวัสดุที่อาจติดเชื้อได้.
4. รีเอเจนต์ที่ตกค้างในชุดอุปกรณ์และของเสียจากการทดลองควรได้รับการจัดการตามแนวทางการกำจัดของเสียทางการแพทย์.

อ้างอิง:

1. แนวทางปฏิบัติทางคลินิกของ NCCN ในด้านเนื้องอกวิทยา – แนวทางการรักษามะเร็งปอดชนิดเซลล์ไม่เล็ก (ฉบับภาษาจีน), เวอร์ชัน 1.2009.
2. ฮวงเจี๋ย, ฉู่โชวฟาง, และคณะ. การจัดตั้งวัสดุควบคุมการกลายพันธุ์ของยีน EGFR ของมนุษย์. วารสารการวิเคราะห์เภสัชกรรมจีน, 2011, 31(9):1758-1763.
3. ฉันทามติของผู้เชี่ยวชาญเกี่ยวกับการตรวจหาการกลายพันธุ์ของยีนของตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตของผิวหนังในผู้ป่วยมะเร็งปอดชนิดไม่เล็กในประเทศจีน. วารสารพยาธิวิทยาจีน, 2011, 40(10).