-ชื่อสินค้า- ชุดทดสอบกรดนิวคลีอิกของไวรัสตับอักเสบบี (พีซีอาร์-วิธีโพรบเรืองแสง)
-ข้อกำหนดแพ็คเกจ-48 การทดสอบ/ชุดอุปกรณ์
วัตถุประสงค์การใช้งาน
- ชุดนี้มีไว้สำหรับการตรวจวัดปริมาณไวรัสตับอักเสบบี (HBV) กรดนิวคลีอิค (ดีเอ็นเอ) ในตัวอย่างซีรั่มหรือพลาสมา.
- ใช้สำหรับผู้ป่วยที่ต้องการทดสอบการติดเชื้อ HBV และผู้ที่ได้รับการรักษาด้วยไวรัสตับอักเสบบี.
- ออกแบบมาเพื่อติดตามการตอบสนองต่อการรักษาด้วยยาต้านไวรัสและประเมินประสิทธิภาพการรักษาโดยการติดตามระดับ DNA ของ HBV ในเลือดของผู้ป่วย.
- อย่างไรก็ตาม, การทดสอบไม่ควรใช้เพียงเพื่อเป็นตัวบ่งชี้อาการของผู้ป่วยเท่านั้น.
- ต้องใช้ควบคู่กับอาการทางคลินิกและการทดสอบในห้องปฏิบัติการอื่น ๆ เพื่อประเมินสภาพโดยรวมของผู้ป่วย.
- ชุดนี้ไม่เหมาะสำหรับการคัดกรองเลือด HBV.
หลักการทดสอบ
- ชุดอุปกรณ์นี้ใช้เม็ดบีดแม่เหล็กที่มีโครงสร้างเพื่อแยกกรดนิวคลีอิกของไวรัสและบริสุทธิ์ในหลอดขยายสัญญาณ PCR มาตรฐาน.
- จากนั้นเติมรีเอเจนต์การขยาย PCR ลงในหลอดเดียวกันโดยตรง, ช่วยให้เม็ดบีดมีส่วนร่วมโดยตรงในปฏิกิริยา PCR เชิงปริมาณเรืองแสง.
- ใช้เทคโนโลยีโพรบ TaqMan, โดยที่ 5' → 3′ กิจกรรม exonuclease ของกรดนิวคลีอิกของ Taq DNA polymerase จะทำให้โพรบ TaqMan ลดลงในระหว่าง PCR.
- การย่อยสลายนี้จะแยกกลุ่มผู้รายงานเรืองแสงออกจากกลุ่มที่ดับแล้ว, สร้างสัญญาณฟลูออเรสเซนต์.
- ระบบการตรวจจับ PCR ฟลูออเรสเซนต์แบบเรียลไทม์จะรวบรวมสัญญาณนี้แบบเรียลไทม์, ช่วยให้สามารถระบุปริมาณไวรัสในตัวอย่างเชิงปริมาณได้.
- ตัวอย่างซีรั่มทางคลินิกที่มีไวรัสตับอักเสบบีชนิดตายจะทำหน้าที่เป็นเครื่องสอบเทียบและควบคุมคุณภาพของชุดอุปกรณ์.
- ชุดอุปกรณ์จะตรวจสอบสารยับยั้ง PCR ในตัวอย่างโดยการตรวจจับมาตรฐานภายใน, ลดความเสี่ยงของผลลบลวง.
ส่วนประกอบ
| ชุดทดสอบกรดนิวคลีอิกของไวรัสตับอักเสบบี (วิธี PCR-ฟลูออเรสเซนต์โพรบ) สำหรับการวิจัย | ||||
| เขาจะเป็น ตัวเลข |
ส่วนประกอบของผลิตภัณฑ์ | ส่วนประกอบหลัก | ขนาดและปริมาณ | |
| ดีแอลบี | รีเอเจนต์การสกัดกรดนิวคลีอิก | HBV lysate ด้วยเม็ดแม่เหล็ก) | โซเดียมไฮดรอกไซด์, ฐานทนิส, ทราลาโทน เอ็กซ์-00.ลูกปัดแม่เหล็กแบบ Conformatioal | 5.5มล. x 1 ขวด |
| สวทช | น้ำยาล้าง HBV | โพแทสเซียมคลอไรด์, ไทรทัน เอ็กซ์-100 | 15.0ขวดมล x ลิตร | |
| 1 | PCR ขยายสารรีเอเจนต์แคตไอออน | HBV PCRReactionโซลูชั่น | ไพรเมอร์, โพรบ, ดีออกซีไรโบนิวคลีโอไซด์ ไตรฟอสเฟต, แมกนีเซียมไอออน PCR.Duffe | 1.10มล. x 2 หลอด |
| 2 | ผสมเอนไซม์ HBV | DNA polymerase และ uracil glycosylase | 110ไมโครลิตร 1 หลอด | |
| 3 | การสอบเทียบ ผลิตภัณฑ์ |
เครื่องสอบเทียบ HBV 1(10-3.0)×10*ไอยูวีมล | ตัวอย่างซีรั่มผลบวกของ HBV ค่าคงที่ (ปิดการใช้งาน) |
0.35 มล. x 1 หลอด |
| 4 | เครื่องสอบเทียบ HBV ②(1.0-3.0)×l0IUVml | ตัวอย่างซีรั่มผลบวกของ HBV ค่าคงที่ (ปิดการใช้งาน) |
0.35 มล. x ไอหลอด | |
| 5 | เครื่องสอบเทียบ HBV 3(1.0-3.0)×10*ไอยู/มล | ตัวอย่างซีรั่มผลบวกของ HBV ค่าคงที่ (ปิดการใช้งาน) |
0.35 หลอดมล x ลิตร | |
| 6 | เครื่องสอบเทียบ HBV ④(1.0-3.0)×10 ไอ/มล | ตัวอย่างซีรั่มผลบวกของ HBV ค่าคงที่ (ปิดการใช้งาน) | 0.35 มล. x 1 หลอด | |
| 7 | สินค้าควบคุมคุณภาพ | HBV บวกอย่างแรง C(10-5.0110)×10 ไอ/มล | ตัวอย่างซีรั่มผสมที่เป็นบวก BV (ปิดการใช้งาน) | 0.35 หลอดมล x ลิตร |
| 8 | การควบคุมคุณภาพเชิงบวกที่สำคัญของ HBV (10-100)ไอเอ็ม | ตัวอย่างซีรั่มผสมที่เป็นบวก BV (ปิดการใช้งาน) | 0.35 มล. x ไอหลอด | |
| 9 | การควบคุมคุณภาพเชิงลบของ HBV | ตัวอย่างเซรั่มผสม HBV ลบ (ปิดการใช้งาน) | 0.35 มล. x ไอหลอด | |
| 10 | ภายใน ฉลาก |
ฉลากภายใน HBV | เทมเพลตกรดนิวคลีอิกมาตรฐานภายใน | 60หลอดไมโคร x ลิตร |
หมายเหตุ: ก. พารามิเตอร์ของเครื่องสอบเทียบมีความแตกต่างแบบแบทช์ต่อแบทช์ 1 ถึง ④ และ ค่าคงที่ของ QC เชิงบวกที่แข็งแกร่งและ QC เชิงบวกที่สำคัญ (ทั้งหมดอยู่ในขอบเขตข้างต้น). สำหรับรายละเอียด, ดูเอกสารคำแนะนำที่แนบมากับชุดอุปกรณ์.
- อย่าผสมส่วนประกอบจากชุดอุปกรณ์ที่แตกต่างกัน!
- นำรายการทดสอบของคุณ: 0.2หลอดปฏิกิริยา PCR มล, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปตและทิปขนาดต่างๆ, และ ขาตั้งแม่เหล็ก, และใช้ขาตั้งแม่เหล็กที่เราแนะนำ.
เงื่อนไขการเก็บรักษาและวันหมดอายุ
- ชุดสกัดกรดนิวคลีอิก, ขนส่งที่อุณหภูมิห้องและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°C.
- ชุดขยายเสียง PCR, ขนส่งได้ไม่สูงกว่า 10 องศาเซลเซียส, เก็บไว้ที่ -20 °C ± 5 °C ห่างจากแสง, หลีกเลี่ยง
- การละลายน้ำแข็งซ้ำแล้วซ้ำเล่า (ไม่เกิน 3 ครั้ง).
- วันหมดอายุ: ชุดนี้ใช้ได้สำหรับ 12 เดือน, กรุณาใช้ภายในวันหมดอายุ. ดูฉลากสำหรับรายละเอียดวันที่ผลิตและวันหมดอายุ.
ใช้งานได้ เครื่องดนตรี
สำหรับใช้กับ LightCycler® 480, สแลน-96พี, Mx3005P, และเครื่องมือ PCR เรืองแสงแบบเรียลไทม์ ABI7500.
คำขอตัวอย่าง
- ประเภทตัวอย่างที่เหมาะสม: เซรั่มหรือพลาสมา
- การเก็บตัวอย่าง: ชุดนี้เหมาะสำหรับตัวอย่างซีรั่มหรือพลาสมา.
ตัวอย่างเซรั่ม: 5 เก็บเลือดดำจำนวนหนึ่งมิลลิลิตรจากผู้เข้ารับการทดลองโดยใช้กระบอกฉีดยาที่ปราศจากเชื้อ และวางในหลอดหมุนเหวี่ยงที่ปราศจากเชื้อที่อุณหภูมิห้องไม่เกิน 6 ชั่วโมงและปล่อยให้ตกตะกอนเอง, หรือปั่นเหวี่ยงโดยตรงที่ 1600 กรัม เพื่อ 5 นาทีและส่วนเหนือตะกอน (ระวังไม่ให้ดูดเม็ดเลือดแดง) จะถูกถ่ายโอนไปยังหลอดหมุนเหวี่ยงที่ปราศจากเชื้อ.
ตัวอย่างพลาสมา: 2 มล. หรือ 5 เก็บเลือดดำจำนวนหนึ่งจากตัวอย่างโดยใช้เข็มฉีดยาที่ปราศจากเชื้อ, ฉีดเข้าไปในหลอดเก็บตัวอย่างปราศจากเชื้อที่มีสารต้านการแข็งตัวของเลือด EDTA, ผสม, และทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องไม่เกิน 6 ชั่วโมงเพื่อให้ตัวอย่างตกตะกอนได้เอง, หรือปั่นเหวี่ยงโดยตรงที่ 1600 กรัม เพื่อ 5 นาทีเพื่อแยกพลาสมาและถ่ายโอนไปยังหลอดหมุนเหวี่ยงที่ปราศจากเชื้อ.
- พื้นที่จัดเก็บ: ตัวอย่างที่จะทดสอบหลังการรักษาข้างต้นสามารถนำไปใช้ทดสอบได้ทันที, หากไม่ทันเวลา ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำกว่า -20°C เพื่อหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ.
- ขนส่ง: ควรขนส่งตัวอย่างในกล่องโฟมที่มีน้ำแข็งหรือเหยือกน้ำแข็ง, ในสถานะแช่แข็งและปิดผนึก.
วิธีทดสอบ
(ฉัน) การเตรียมรีเอเจนต์ (พื้นที่เตรียมรีเอเจนต์)
การเตรียม HBV Lysate:
- ผสม HBV lysate ให้เข้ากัน (ดีแอลบี) ประกอบไปด้วยลูกปัดแม่เหล็ก.
- นำส่วนประกอบรีเอเจนต์ต่างๆ ออกและปล่อยให้ส่วนประกอบเหล่านั้นปรับสมดุลกับอุณหภูมิห้อง, ป้องกันจากแสง.
- ผสม HBV lysate และ HBV Internal Standard ในอัตราส่วน 100 ไมโครลิตร/คน + 1.0 ไมโครลิตร/คน, และผสมให้เข้ากัน.
- จ่ายส่วนผสมลงในหลอดขยายสัญญาณ PCR ทันที (0.2 หลอดเดียว มล, 0.2 หลอดออคเต็ต มล, หรือเพลต PCR 96 หลุม) ที่ 100 ไมโครลิตร/ดี, ตรวจสอบให้แน่ใจว่า HBV lysate อยู่ที่ด้านล่างของหลอด.
การเตรียมรีเอเจนต์การขยาย PCR:
- เวลาการกำหนดค่า: การเตรียมรีเอเจนต์จะดำเนินการหลังจากวางหลอดสกัดกรดนิวคลีอิกในชั้นวางแม่เหล็ก.
- การตระเตรียม: ขึ้นอยู่กับตัวอย่างที่จะทดสอบ, เตรียมการควบคุมคุณภาพเชิงลบของไวรัสตับอักเสบบี, การควบคุมคุณภาพเชิงบวกที่สำคัญของ HBV, การควบคุมคุณภาพเชิงบวกที่แข็งแกร่งของ HBV, และเครื่องสอบเทียบ HBV.
- สำหรับปริมาณ 1 ถึง ④, ใช้สารละลายปฏิกิริยา HBV PCR และส่วนผสมของเอนไซม์ HBV ในปริมาณที่สอดคล้องกัน, และผสมตาม (สารละลายปฏิกิริยา HBV PCR 43.0 ไมโครลิตร/คน + ผสมเอนไซม์ HBV (2.0 ไมโครลิตร/คน)), ผสมให้เข้ากันจนเกิดเป็น PCR-Mix ใช้งานได้ทันที.
(ครั้งที่สอง) การทำกรดนิวคลีอิกให้บริสุทธิ์ (พื้นที่การประมวลผลตัวอย่าง)
- เพิ่ม 100 μl ของตัวอย่างที่จะทดสอบหรือการควบคุมคุณภาพเชิงลบของ HBV, การควบคุมคุณภาพเชิงบวกที่สำคัญของ HBV, การควบคุมคุณภาพเชิงบวกที่แข็งแกร่งของ HBV, เครื่องสอบเทียบ HBV 1 ถึง ④ ไปยังหลอด PCR ที่มีการจ่ายไลเซต HBV; ผสมเบา ๆ โดยการเป่า 3 ถึง 5 ครั้ง; ทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 5 ถึง 10 นาที.
- ย้ายท่อ PCR ไปยังแท่นแม่เหล็ก, ออกไป 2-3 นาที, และดูดส่วนเหนือตะกอนโดยใช้ปิเปตหรืออุปกรณ์แรงดันลบ, ระวังอย่าถอดเม็ดแม่เหล็กออก.
- วางท่อ PCR ไว้บนขาตั้งแม่เหล็ก, เพิ่ม 250 ไมโครลิตรของสารละลายล้าง HBV (สวทช) ในแต่ละบ่อ, ออกไป 2 นาทีและดูดส่วนเหนือตะกอนโดยใช้ปิเปตหรืออุปกรณ์แรงดันลบ, ดูแลไม่ทิ้งสารตกค้าง.
การเติมรีเอเจนต์การขยาย (พื้นที่การประมวลผลตัวอย่าง)
- เพิ่ม 45.0 PCR-Mix ไมโครลิตรในแต่ละหลุม.
- ปิดฝาท่อแล้วกลับด้าน.
- ค่อยๆ สะบัดเม็ดบีดออกเพื่อให้แน่ใจว่า PCR-Mix ผสมกับเม็ดบีดอย่างทั่วถึง.
- ปั่นแยกท่อในแนวนอนทันที.
- ย้ายท่อ PCR ไปยังพื้นที่ตรวจจับ.
- วางไว้บนเครื่องมือ PCR แบบเรืองแสงเพื่อการตรวจจับ.
การขยาย PCR (โซนการตรวจจับ)
วางท่อปฏิกิริยา PCR ลงในเครื่องขยายเสียง, ตั้งค่าการควบคุมลบ HBV, HBV ควบคุมเชิงบวกอย่างแข็งแกร่ง, การควบคุมเชิงบวกที่สำคัญของ HBV, เครื่องสอบเทียบ HBV 1 ถึง ④ และตัวอย่างที่จะทดสอบตามลำดับที่เกี่ยวข้อง, และตั้งชื่อตัวอย่างและความเข้มข้นของเครื่องสอบเทียบ.
การตั้งค่าโปรแกรมขยายเสียง.
SLAN-96P จากตัวอย่าง (ไลท์ไซคเลอร์® 480, SLAN-96P และ Mx3005P, ABI7500 มีการตั้งค่าเดียวกัน. เมื่อตั้งค่าแล้ว, บันทึกไฟล์และรันโปรแกรมปฏิกิริยา
การเข้าถึงผลลัพธ์
- คำอธิบายของเส้นโค้งการขยาย: เส้นโค้งการขยายโดยทั่วไปจะเป็นรูปตัว S.
- การตั้งค่าพื้นฐาน: ขึ้นอยู่กับสถานการณ์การทดลอง, ควรเลือกส่วนที่มีค่าพื้นหลังเรืองแสงที่เสถียรเป็นช่วงการตั้งค่าพื้นฐาน.
- การตั้งค่าเกณฑ์: เพียงเกินจุดสูงสุดของเส้นโค้งการขยายของการควบคุมคุณภาพเชิงลบ.
- การวิเคราะห์ผลลัพธ์: เมื่อกำหนดเส้นพื้นฐานและเกณฑ์แล้ว, สามารถวิเคราะห์ผลลัพธ์ได้.
เลือกช่อง FAM เพื่อรับผลลัพธ์สำหรับตัวอย่างที่จะทดสอบและการควบคุมคุณภาพ; เลือกช่อง HEX หรือ VIC เพื่อให้ได้ผลลัพธ์สำหรับมาตรฐานภายใน. (บันทึก: โปรดดูคู่มือของเครื่องมือต่างๆ สำหรับการตั้งค่าโดยละเอียด)
ค่าอ้างอิง
ขีดจำกัดล่างของการตรวจจับและขีดจำกัดของปริมาณสำหรับชุดอุปกรณ์นี้คือ 5 ไอยู/มล, กำหนดโดยการทดสอบการวิจัยที่มีค่าอ้างอิง ≤40 สำหรับ Ct เป้าหมาย และ ≤40 สำหรับ Ct มาตรฐานภายใน.
การตัดสินความถูกต้องของการทดสอบ
- เครื่องสอบเทียบทั้งหมดเป็นบวกและมีค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์เชิงเส้น|ร|≥0.980.
- การควบคุมคุณภาพเชิงลบควรตรวจไม่พบและมีค่า Ct มาตรฐานภายใน ≤ 40.
- ส่วนควบคุมเชิงบวกอย่างยิ่งมีค่า Ct <25 และช่วงปริมาณของ (1.0-5.0) x 105 ไอยู/มล ส่วนควบคุมเชิงบวกวิกฤตมีค่ากะรัต <38 และช่วงปริมาณของ (10- 100) ไอยู/มล. ต้องเป็นไปตามข้อกำหนดข้างต้นในการทดสอบเดียวกัน, มิฉะนั้น, ผลการทดสอบถือว่าไม่ถูกต้องและต้องทดสอบซ้ำ.
การตีความผลการทดสอบ
- ถ้าผลตัวอย่างเป็น 5-2.0 x 109 IU/ml และกราฟการขยายแสดงรูปตัว S, ในขณะที่ค่า Ct ตัวอย่างคือ ≤40 และค่า Ct มาตรฐานภายในคือ ≤40, ผลลัพธ์จะถูกตัดสินว่าถูกต้องและสามารถรายงานค่าความเข้มข้นที่เป็นบวกและสอดคล้องกันได้โดยตรง.
- ถ้าผลตัวอย่างเป็น >2.0 x 109 IU/ml และกราฟการขยายแสดงรูปตัว S, ตัวอย่าง ค่ากะรัตคือ ≤40, และค่า Ct มาตรฐานภายในคือ ≤40, สามารถรายงานได้โดยตรงว่าเป็น DNA ของ HBV >2.0 x 109 ไอยู/มล. หากต้องการปริมาณที่แม่นยำ, ตัวอย่างสามารถเจือจางได้ด้านล่าง 2.0 x 109 IU/ml และทดสอบซ้ำ
- หากผลตัวอย่างเป็น HBV DNA <5ไอยู/มล, ค่า Ct ตัวอย่างคือ ≤40 และค่า Ct มาตรฐานภายในคือ ≤40, ผลลัพธ์จะถูกรายงานว่าความเข้มข้นของ DNA ของ HBV ต่ำกว่าขีดจำกัดล่างของการตรวจพบชุดอุปกรณ์; หากมาตรฐานภายในผิดปกติ (กะรัต >40 หรือไม่มีค่าเลย), ผลลัพธ์ของกลุ่มตัวอย่างไม่ถูกต้อง และควรค้นหาสาเหตุและแยกออก และควรทำซ้ำตัวอย่าง (หากผลการทดสอบซ้ำยังคงไม่ถูกต้อง, โปรดติดต่อเรา). (หากผลการทดสอบซ้ำยังคงไม่ถูกต้อง, โปรดติดต่อเรา).
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์