- ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์
| ข้อมูลจำเพาะ | 50ต | 100ต |
| แมว. เลขที่. | SN0325-D | SN0326-D |
| คอลัมน์การแยก RNA (ชุด) | 50 (ชุด) | 100 (ชุด) |
| คอลัมน์ทำความสะอาด DNA (ชุด) | 50 (ชุด) | 100 (ชุด) |
| เม็ดเลือดแดง lysis buffer10x | 60 มล | 2×60 มล |
| การสกัดอาร์เอ็นเอ กันชน 1 บวก | 30 มล | 2×30 มล |
| บัฟเฟอร์การกำจัดสารยับยั้ง | 30 มล | 2×30 มล |
| ล้างบัฟเฟอร์ 1 | 15 มล | 2×15 มล |
| บัฟเฟอร์การชะล้าง | 20 มล | 20 มล |
| คู่มือการใช้งาน | 1 | 1 |
- พื้นที่จัดเก็บ
ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) ในสภาพแวดล้อมที่แห้งและสามารถเก็บรักษาไว้ได้ 12 เดือน.
- คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์
3.1 ชุดนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.
3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดมีสารระคายเคือง; ขอแนะนำให้ใช้ความระมัดระวังที่จำเป็น (เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา).
3.3 การใช้ชุดอุปกรณ์นี้ต้องใช้อุปกรณ์เพิ่มเติม เช่น เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, ไนโตรเจนเหลว, คลอโรฟอร์ม, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และท่ออีพี.
- ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์
ชุดการทำให้บริสุทธิ์ RNA ให้วิธีการที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพในการทำให้บริสุทธิ์ RNA จากเลือดและเนื้อเยื่อของเหลวอื่น ๆ. เหมาะสำหรับของเหลวและเนื้อเยื่อชีวภาพส่วนใหญ่. ชุดการทำให้บริสุทธิ์ RNA นี้สามารถนำไปใช้กับตัวอย่างเลือดเกินกว่า 0.5 มล, และผ่านเทคโนโลยีการกำจัด DNA, RNA ที่สกัดนั้นแทบปราศจาก DNA จีโนม.
ชุดการทำให้บริสุทธิ์อย่างรวดเร็วของ RNA ช่วยให้สามารถสกัด RNA ทั้งหมดได้ (รวมถึงนิวเคลียร์ RNA และไซโตพลาสซึม RNA) จากเลือดภายใน 2 ชั่วโมง. RNA ที่บริสุทธิ์สามารถใช้โดยตรงสำหรับแอปพลิเคชันเช่น RT-พีซีอาร์, การซับภาคเหนือ, ฯลฯ. กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ทั้งหมดไม่จำเป็นต้องใช้รีเอเจนต์ที่เป็นพิษเช่นฟีนอลคลอโรฟอร์ม, ทำให้ชุดการทำให้บริสุทธิ์ RNA เหมาะสำหรับตัวอย่างอื่น ๆ ที่หลากหลาย.
- หลักและวิธีการทดลอง
- กระบวนการสกัด
ข้อควรระวังก่อนเริ่มการทดลอง:
ก. ก่อนใช้งาน, เพิ่มจำนวนเอทานอลที่ระบุเพื่อล้างบัฟเฟอร์ 1 ตามที่ระบุไว้ในฉลากขวดรีเอเจนต์, และทำเครื่องหมายตรวจสอบฉลากเพื่อระบุการเพิ่มเอทานอล.
B.Elution Buffer เป็นโซลูชัน 0.1x TE ที่มี EDTA จำนวนน้อยที่สุด. หาก EDTA ส่งผลต่อการทดลองครั้งต่อไป, ขอแนะนำให้ใช้น้ำที่ปราศจากไอออนที่ผ่านการฆ่าเชื้อแทนแทนบัฟเฟอร์การชะ.
- การประมวลผลตัวอย่าง: ใช้เลือด200μlลงในหลอด EP, เพิ่ม 80μlของเซลล์เม็ดเลือดแดง lysis บัฟเฟอร์ 10x, และผสมให้ละเอียดโดยการปิเปต.
- เพิ่ม 500บัฟเฟอร์การสกัด RNA μl 1 บวก, สั่นคลอนอย่างแรง, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12000 รอบต่อนาทีสำหรับ 3 นาที.
- โอนส่วนเหนือไปยังก การทำให้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ คอลัมน์, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที.
- เพิ่ม 250μlของเอทานอล ไปยังซุปเปอร์โนแลนต์, ปิเปตและมิกซ์, โอนของเหลวไปยังคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน.
- เพิ่ม 600บัฟเฟอร์การกำจัดสารยับยั้งμl ไปยังคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน.
- เพิ่ม 600μlล้างบัฟเฟอร์ 1 ไปยังคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12000 รอบต่อนาทีสำหรับ 30 วินาที, ทิ้งส่วนเหนือตะกอน.
(บันทึก: ยืนยันว่ามีการเพิ่มเอทานอลในการล้างบัฟเฟอร์ 1. การปรากฏตัวของเอทานอลส่งผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อการทดลองที่ตามมา. ดังนั้น, การอบแห้งเมมเบรนเป็นสิ่งสำคัญ. หลังจากการปั่นแยก, ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีเอทานอลเหลืออยู่ก่อนการชะล้าง, แล้วทิ้งขยะและท่อรวบรวม. หลังจากใช้ Wash Buffer 1, เมมเบรนในคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ควรมีสีเล็กน้อย. หลังจากการปั่นแยก, ค่อยๆ ถอดคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ออก, ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่ได้สัมผัสกับหลอดเก็บรวบรวมเพื่อป้องกันการรบกวนเอทานอล.)
- ทำซ้ำขั้นตอน 6.
- หมุนเหวี่ยงท่อว่างที่ 12000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที (เพื่อระเหยเอทานอลที่เหลืออยู่).
- วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ลงในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงหลอดใหม่, หยดบัฟเฟอร์การกำจัด100μlลงบนเมมเบรน, ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที (15℃ ~ 25 ℃), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที.
(บันทึก: eluting RNA ที่มีบัฟเฟอร์การกำจัด50μlสามารถเพิ่มความเข้มข้นของ RNA แต่ลดผลผลิต RNA ทั้งหมด.)
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์