혈액 총 RNA 추출 키트 (게놈 DNA 제거)

1. 시약 키트의 구성 요소

2. 저장

이 시약 키트는 실온에서 보관해야 합니다. (15-25℃) 건조한 환경에서는 보존 할 수 있습니다 12 개월.

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 키트는 분자 생물학 연구 목적으로 제작되었으며 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.; 필요한 예방 조치를 취하는 것이 좋습니다 (보호복과 고글을 착용하는 등).

3.3 이 키트를 사용하려면 고속 원심분리기 등 추가 장비가 필요합니다., 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 액체 질소, 클로로포름, 멸균 탈이온수, 및 EP 튜브.

4. 시약 키트 소개

RNA 정제 키트는 혈액 및 기타 유체 조직으로부터 RNA를 정제하는 빠르고 효율적인 방법을 제공합니다.. 그것은 대부분의 생물학적 체액 및 조직에 적합합니다. 이 RNA 정제 키트는 혈액 샘플을 초과하는 혈액 샘플에 적용 할 수 있습니다. 0.5 밀리리터, DNA 제거 기술을 통해, 추출 된 RNA는 사실상 게놈 DNA가 없다.

RNA 빠른 정제 키트는 총 RNA의 추출을 허용합니다. (핵 RNA 및 세포질 RNA 포함) 내부의 혈액에서 2 시간. 정제 된 RNA는 RT와 같은 응용 분야에 직접 사용될 수 있습니다.-PCR, 노던 블로팅, 등. 전체 정제 공정에는 페놀-클로로포름과 같은 독성 시약이 필요하지 않습니다., RNA 정제 키트 만들기 다양한 기타 샘플 유형에 적합합니다..

5. 실험 원리 및 절차

6. 추출과정

실험 시작 전 주의사항:

ㅏ. 사용하기 전에, 지정된 양의 에탄올을 첨가하여 완충액 세척하십시오 1 시약병 라벨에 표시된 대로, 에탄올의 첨가를 나타내는 라벨에 점검을 표시하십시오..

B. ELUTICE 완충액은 최소 양의 EDTA를 포함하는 0.1X TE 솔루션입니다.. EDTA가 후속 실험에 영향을 미치는 경우, 용리 완충을 대신하여 멸균 탈 이온수를 사용하는 것이 좋습니다..

1. 샘플 처리: 200μl의 혈액을 EP 튜브에 넣습니다, 추가하다 80적혈구 용해 완충액 μL, 피펫 팅으로 철저히 섞으십시오.
2. 추가하다 500μL RNA 추출 완충액 1 ...을 더한, 격렬하게 흔들어 섞습니다, 12000rpm에서 원심 분리하십시오 3 분.
3. 상청액을 a로 옮깁니다 DNA 정제 열, 12000rpm에서 원심 분리하십시오 1 분.
4. 추가하다 250에탄올 μL 상청자에게, 피펫과 믹스, 액체를 RNA 정제 컬럼으로 옮깁니다, 12000rpm에서 원심 분리하십시오 30 초, 상층액을 버린다.
5. 추가하다 600μL 억제제 제거 완충액 RNA 정제 컬럼으로, 12000rpm에서 원심 분리하십시오 30 초, 상층액을 버린다.
6. 추가하다 600μL 세척 완충액 1 RNA 정제 컬럼으로, 12000rpm에서 원심 분리하십시오 30 초, 상층액을 버린다.

(메모: 세척 완충액에 에탄올이 첨가되었음을 확인하십시오 1. 에탄올 존재는 후속 실험에 크게 영향을 미칩니다. 그러므로, 막 건조가 중요합니다. 원심분리 후, 용출 전에 에탄올이 남아 있지 않은지 확인하십시오., 그런 다음 폐기물 및 수집 튜브를 폐기하십시오.. Wash Buffer 사용 후 1, RNA 정제 컬럼의 막에는 약간의 색이 있어야합니다.. 원심분리 후, RNA 정제 컬럼을 조심스럽게 제거하십시오, 에탄올 간섭을 방지하기 위해 수집 튜브에 닿지 않도록.)

7. 단계 반복 6.
8. 12000rpm에서 빈 튜브를 원심 분리하십시오 2 분 (잔류 에탄올을 증발시키기 위해).
9. RNA 정제 컬럼을 새로운 원심분리기 튜브에 넣습니다., 100μL 용리 완충액을 막에 드립니다, 실온에서 배양하다 5 분 (15℃ ~ 25 ℃), 12000rpm에서 원심 분리하십시오 1 분.

(메모: 50μL 용리 완충제로 RNA를 용리하면 RNA 농도를 증가 시키지만 총 RNA 수율을 감소시킬 수 있습니다..)