ДНК-полимераза Taq
предмет номер：E001A Спецификация：500U/1000U/5000U Storage: Хранить при -20°C.
Внедрение продукции：
Этот продукт является ДНК -полимераза TAQ, обычно называют ферментом така, который является одной из наиболее широко используемых ДНК -полимераз. Он экспрессируется в Escherichia coli с клонированным геном термической ДНК -полимеразы Thermus Aquaticus, а затем очищается через несколько этапов. The ПЦР Продукты, амплифицированные с использованием этого продукта, имеют добавленную базу на 3′ конец, позволяя клонировать в T -векторы.
Содержание продукта：
| Компоненты | E001A-01（500U) | E001A-02（1000U) | E001A-03（5000U) |
| ДНК -полимераза TAQ (5U/мкл) | 100мкл | 200мкл | 1мл |
| смесь DNTP (10мМ каждый) | 100мкл | 200мкл | 1мл |
| 10× ПЦР Буфер (мг2+ плюс)
|
1мл | 2× 1 мл | 10× 1 мл |
Хранилище:
Хранить при -20°C., с минимальным сроком годности 12 месяцы.
Определение деятельности:
Использование активированной басовой сперматозоиды в качестве шаблона/праймера, потребление 10 нмоль общих нуклеотидов в виде кислотно-нерастворимого материала в пределах 30 минуты при 74 ° С определяется как 1 единица деятельности (ты).
Контроль качества:
Этот продукт подвергся качественному тестированию и не свободен от эндонуклеазной активности, экзонуклеазная активность, и загрязнение рибонуклеазой. Остаточная геномная ДНК -хозяина ниже 10 копии.
Использование продукта:
Усиление ДНК с использованием метода ПЦР; Определение последовательности ДНК.
Инструкции по использованию:
- Растворить и смешать все необходимые растворы для реакции ПЦР и поместите их на ледяную ванну или в холодильник. Рекомендуется аликвовать реакционную смесь ПЦР, чтобы избежать повторных циклов замораживания-оттаивания.
- Желательно установить систему реакции ПЦР на ледяной ванне или в холодильнике, После рекомендуемой реакционной системы для справки.
- ДНК избыточного шаблона может привести к неспецифическим продуктам ПЦР. Рекомендуемые количество шаблонов для различных типов шаблонов в объеме реакции 50 мкл следующие:
Геномная ДНК от животных и растений: 0.1-1мкг;
Геномная ДНК из Escherichia coli: 10-100из;
Плазмидная ДНК: 0.1-10из.
Рекомендуемая система реакции:
| Реагенты | 50icl Объем системы | Конечная концентрация |
| ДНК-полимераза Taq | 1мкл | 0.1ты |
| 10× ПЦР Буфер (мг2+ плюс) | 5мкл | 1× |
| смесь DNTP (10мМ каждый) | 1мкл | 0.2мМ каждый |
| Грунтовка i (10мкм) | 1мкл | 0.2мкм |
| Primer II (10мкм) | 1мкл | 0.2мкм |
| ДНК шаблона | 1мкл | - |
| DDH2О | До 50 мкл | - |
Примечание: Количество каждого компонента в реакционной системе может быть скорректировано в соответствии с фактическими требованиями.
- Тщательно пипетка и смешайте подготовленную реакционную систему, используя пипетку, Запечатайте трубки ПЦР, Обийся их соответствующим образом, и кратко центрифуга при комнатной температуре.
- Поместите приготовленные трубки ПЦР в ПЦР-машина, Установить условия реакции, и инициировать реакцию ПЦР.
Условия реакции:
| Метод/шаги | Настройка времени | Циклы |
| 95℃ (Предварительная де натурация) | 2-5мин | 1 |
| 95℃ (Денатурация) | 30сек | 25-35 Циклы |
| 55℃ -60 ℃ (Отжиг) | 30сек | |
| 72℃ (Расширение) | 1мин | |
| 72℃ (Окончательное расширение) | 10мин | 1 |
| 4℃ (Hold) | ∞ | - |
Примечание: Условия реакции могут быть скорректированы и оптимизированы в соответствии с фактическими требованиями.
Меры предосторожности:
- Время расширения может быть скорректировано на основе таких факторов, как длина и содержание GC продукта ПЦР. Время расширения на КБ продукта тесно связано со сложностью шаблона: Простые шаблоны требуют 20 секунды, Типичные шаблоны требуют 30 секунды, и сложные шаблоны требуют 1 минута.
- Настройка реакции ПЦР должна быть адаптирована к различным условиям, таким как шаблон, праймеры, Длина продукта ПЦР, и контент GC. Конечная концентрация праймеров обычно попадает в диапазон 0,1-1,0 мкм. Концентрация шаблона ДНК может быть скорректирована соответственно. Для сложных шаблонов или высокого содержания GC, Рекомендуется продлить предварительную денатурацию/денатурацию или время расширения и повысить температуру денатурации/отжига.
- Используйте назначенные области и пипетки до и после усиления, Носите перчатки, и менять их часто. После завершения реакции ПЦР, Не открывайте реакционные трубки сразу. Позвольте им достаточно остыть при 4 ° C или -20 ° C перед открытием, чтобы минимизировать риск загрязнения продукта ПЦР в лабораторной среде.
Отзывы
Отзывов пока нет.