Набор для экстракции общей РНК -стула

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0341	SN0342
Колонки для экстракции РНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Humic Acid Removal Reagent I	50мл	2х50мл
Reagent Buffer C Plus	30 мл	2х30мл
Буфер удаления ингибитора	30мл	2х30мл
Лизоцим	1мл	2х1мл
Протеиназа К	1мл	2х1мл
Промывной буфер 1	15 мл	2 × 15 мл
Элюирующий буфер	20 мл	20 мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25°С) under dry conditions and can be kept for 12 месяцы. Lysozyme and Proteinase K contain preservatives, возможность транспортировки при комнатной температуре. Для длительного хранения, it should be stored at -20°C.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор предназначен для исследовательских целей в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора содержат раздражители.; желательно принять необходимые меры предосторожности (например, носить защитную одежду и очки).

3.3 Для использования этого комплекта требуется дополнительное оборудование, такое как высокоскоростная центрифуга., водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, жидкий азот, хлороформ, стерильная деионизированная вода, и EP трубки.

4. Знакомство с набором реагентов

The Fecal Total RNA Purification Kit provides a fast and efficient method for purifying total RNA from feces and vomit, widely applicable to the extraction of Gram-positive bacteria, Грамотрицательные бактерии, and viral RNA in feces and vomit samples.

This kit effectively removes impurities and inhibitors from feces and vomit, reducing inhibition in subsequent downstream experiments such as ПЦР. The extracted RNA can be directly used for PCR, Саузерн-блоттинг, и т. д.. Весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа., making the RNA purification kit suitable for various other sample types.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Меры предосторожности перед началом эксперимента:

А. Перед использованием, добавьте указанное количество безводного этанола в СтиратьБуфер 1 как указано на этикетке флакона с реагентом., and mark with a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.

Б. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решение содержащий минимальное количество ЭДТА. If EDTA may affect subsequent experiments, it is recommended to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.

1. Образец обработки (Удаление ингибитора):

А: Add approximately 200mg of samples such as feces, add 1ml of Humic Acid Removal Reagent I, тщательно перемешать для 1-2 минуты, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты, and discard the supernatant.

Б: If the extracted sample is a virus sample, you can proceed directly to step 2. If the sample contains a high amount of inhibitors, it is recommended to perform the inhibitor removal step first, although it may reduce the yield of viral nucleic acid.

2. Образец лизиса:

А: For extracting nucleic acids from bacterial samples, добавлять 560μl of Buffer C Plus, 20мкл протеиназы К, and 20μl Lysozyme to the centrifuge tube from the previous step. Invert and mix thoroughly, переваривать при 85℃ для 5 минуты, inverting the tube 6-7 раз во время пищеварения.

Б: For extracting nucleic acids from virus samples, добавлять 560μl of Buffer C Plus and 20μl Proteinase K. Digest at 85℃ for 5 минуты, inverting the tube 6-7 раз во время пищеварения.

3. Центрифуга в 12,000 об/мин для 5 минуты, перенесите супернатант в новую центрифужную пробирку (перенесено около 500 мкл жидкости).
4. Add an equal volume of anhydrous ethanol, тщательно перемешать. Precipitation may occur, но это не влияет на последующие эксперименты.
5. Перенести полученную жидкость в колонку очищения РНК (примерно 650-700 мкл каждый раз), инкубировать при комнатной температуре в течение 2 минуты, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить собранные отходы, и снова вставьте пробирку для сбора в колонку очистки для следующего шага..
6. Place the RNA purification column into a new collection tube, добавлять 400мкл буфера удаления ингибитора, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить отходы, and place the nucleic acid purification column back into the tube for the next step.
7. Добавлять 500мкл промывочного буфера 1к колонке очистки РНК, центрифуга в 14,000 об/мин (20,00×г) для 2 минуты, extending the centrifugation time as needed to ensure membrane drying.

(Примечание: Присутствие этанола серьезно влияет на последующие эксперименты., поэтому сушка мембраны имеет решающее значение. После центрифугирования, Убедитесь, что этанол не присутствует до элюирования, then discard the waste and collection tube.)

8. Place the RNA purification column into a new centrifuge tube, добавлять 30мкл — 50 мкл элюирующего буферак мембране, инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минуты (15℃ -25 ℃), центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута.

(Примечание: Using 30μl of Elution Buffer to elute RNA can increase RNA concentration but may reduce total RNA yield.)

9. Повторите предыдущий шаг.

(Примечание: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted in the second wash or continue using the original collection tube to collect RNA.)