Набор для окрашивания пероксидазой спермы Solarbio лейкоцитов(н-толуидиновый метод)

Информация о товаре

• Код продукта: G3410
• Спецификация: 20Т
• Хранилище: Хранить при 2-8 ° C., со сроком годности 6 месяцы.

Содержание продукта:

Описание продукта:

Большая часть спермы содержит лейкоциты, В основном полиморфноядерные лейкоциты (PMNS, нейтрофилы). Иногда, Белые кровяные клетки можно отличить от сперматозоидов и сперматоцитов в мазках спермы с использованием метода окрашивания Papanicolaou. Различие лейкоцитов в основном опирается на различия в окрашивании, размер, и морфология ядра. Полиморфонуклеарные лейкоциты морфологически сходны с многоядерными сперматочками, Но полиморфонуклеарные лейкоциты окрашивают светло -голубые, в то время как спермы окрашивают свет красного цвета. Размер ядра также помогает в дифференциации: Ядро мононуклеарных лейкоцитов широко колеблется по размеру, от около 7 мкм для лимфоцитов до более чем 15 мкм для макрофагов. Количество лейкоцитов в сперме также может быть количественно определено с использованием других методов.

Принцип окрашивания пероксидазы для семенных лейкоцитов (ортотолуидиновый метод) заключается в том, что основным типом лейкоцитов в сперме являются пероксидаза-позитивные гранулоциты, который можно проверить с помощью окрашивания пероксидазой. Этот метод быстрый, недорогой, и практично для первоначального скрининга гранулоцитов. Хотя этот метод имеет преимущество в том, что он относительно прост в эксплуатации, он не может обнаружить следующее: ① Полиморфноядерные лейкоциты, которые уже активированы и выпустили свои гранулы; ② Другие типы лейкоцитов, которые не содержат пероксидазы, такие как лимфоциты, макрофаги, и моноциты. Этот продукт может быть использован для дифференциации полиморфонуклеарных лейкоцитов от многоядерных спермец, которые не содержат пероксидазы.

Операционные шаги (только для справки):

1. Подготовьте рабочее решение с ортотолуидином: Добавить 1 мл насыщенного раствора хлорида аммония, 1МЛ раствора ЭДТА, и 10 мкл окислителя до 9 мл раствора субстрата, хорошо перемешать, и использовать внутри 24 часы подготовки.
2. Тщательно смешать образец спермы, Смешайте 0,1 мл спермы с 0,9 мл рабочего раствора.
3. Встряхнуть суспензию спермы для 10 секунды и позвольте ему стоять при комнатной температуре для 20-30 минуты. Альтернативно, Используйте трубочный рокер для непрерывного возбуждения.
4. После 20-30 минуты, Смешайте суспензию сперма.
5. Поместите гемоцитометр горизонтально в влажную камеру при комнатной температуре, по крайней мере, для 4 минуты, чтобы позволить клеткам оседание.
6. Используйте 200 или 400-кратный фазовый контрастный микроскоп, чтобы наблюдать и учитывать, по крайней мере, 200 пероксидаза-позитивные клетки.

Технические характеристики:

• Реагент (А): Насыщенный раствор хлорида аммония 2 мл, хранится при 2-8 ° C..
• Реагент (Б): Решение ЭДТА 2 МЛ, хранится при 2-8 ° C..
• Реагент (С): Раствор ортотолоидинового субстрата 20 мл, хранить при 2-8°C, избегайте света.
• Реагент (Д): Окислитель 1 мл, хранится при 2-8 ° C..

Результаты окрашивания:

Пероксидаза-положительные клетки окрашивают коричневым, в то время как пероксидаза-отрицательные клетки остаются неожиданными.

Меры предосторожности:

1. Подготовьте рабочее решение с ортотолуидином непосредственно перед использованием и не храните его в течение длительного периода после подготовки.
2. Если температура окружающей среды в комнате окрашивания низкая, Используйте инкубатор или водяную ванну, чтобы завершить процесс окрашивания.
3. При рассмотрении подсчетных бассейнов, Продолжайте считать хотя бы 200 пероксидаза-положительные клетки на сетку до тех пор, пока не будут считать полные сетки; Не переставайте считать в середине сетки.
4. Для вашей безопасности и здоровья, носить лабораторные пальто и одноразовые перчатки во время работы.
5. Этот продукт предназначен только для исследовательских целей и не должен использоваться для клинической диагностики или других целей.