Соларбио Супероксиддисмутаза (ДЕРН) Набор для анализа активности

Супероксиддисмутаза (ДЕРН) Набор для анализа активности

Примечание: Необходимо предсказать 2-3 Большие образцы разности перед формальным определением.

Операционное оборудование: Спектрофотометр

Кот нет: BC0170

Размер: 50Т/24С

Компоненты:

Экстракционный реагент: 60 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент ⅰ: 15 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент Ⅱ: 160 мкл × 1. Хранение при 4℃. Смешайте пипетинг после центрифугирования.

Реагент Ⅲ: 11 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент Ⅳ: Порошок×1. Хранение при 4℃.

Реагент V: 2 мл×1. Хранение при 4℃. Добавить реагент ⅳ в реагент v перед использованием и встряхнуть с генератором, чтобы тщательно смешать. Это можно хранить 3 месяцы.

Описание продукта:

Супероксиддисмутаза (ДЕРН, ЕС 1.15.1.1) широко встречается у животных, растения, микроорганизмы и культивируемые клетки. Он катализирует анион супероксид с образованием H2O2 и O2. СОД - это не только энзим супероксидного аниона, но также основной фермент, продуцирующий H2O2, которая играет важную роль в биологической антиоксидантной системе.

Супероксидный анион (O2-) производится ксантиновой и ксантиноксидазной системой реакции. O2- может уменьшить синий тетразол для создания синего формазана, который обладает поглощением в 560 нм. SOD может удалить O2- и ингибировать образование метионина. Тем темнее синий цвет реакционного раствора, Чем ниже активность СОД. Чем легче синий цвет реакционного раствора, Чем выше активность СОД.

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки:

Спектрофотометр, настольная центрифуга, пипетка для переноса, 1 стеклянная кювета мл, ступка/гомогенизатор, лед и дистиллированная вода.

Операция:

я. Базовые приготовления:

1. Бактерии или клетки: сбор бактерий или клеток в центрифужную трубку, Откажитесь от супернатанта после центрифугирования. В соответствии с доли бактерий или клеток (104 клетки): Установка раствора (мл) из 1:5-10 для извлечения. Предполагается, что 5 миллион бактерий или клеток суммировали 1 мл реагента экстракции. Разделение бактерий или клеток ультразвуком (помещенный на лед, ультразвуковая власть 200 Вт или 20%, Рабочее время 3с, интервал 10 с, повторить для 30 раз). Центрифуга в 8000 ×g для 10 минуты в 4 ℃ для удаления нерастворимых материалов, и возьмите супернатант на льду перед тестированием.
2. Салфетка: в соответствии с доли веса ткани (г): Установка раствора (мл) из 1:5-10 для извлечения. Предполагается, что 0.1 г ткани с 1 мл реагента экстракции и полностью гомогенизируется на льду.
3. Центрифуга в, 8000 ×g для 10 минуты в 4 ℃ для удаления нерастворимых материалов, и возьмите супернатант на льду перед тестированием.
4. сыворотка (плазма) образец: Обнаруйте образец напрямую.

II. Определение процедура:

1. Предварительно разогрейте спектрофотометр для 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 560 нм и установите ноль дистиллированной водой.
2. Держите реагент ⅰ, Реагент Ⅲ, Реагент V в водяной бане для более чем, чем 5 минут при 37℃(млекопитающее) или

25℃ (другие виды).

3. Добавьте реагенты из следующего списка:

Реагент (мкл)	Пробирка (Т)	Контрольная трубка (С)	Пустая трубка (B1)	Пустая трубка (B2)
Образец	90	90	—	—
Реагент ⅰ	240	240	240	240
Реагент Ⅱ	6	—	6	—
Реагент Ⅲ	180	180	180	180
Дистиллированная вода	480	486	570	576
Реагент V	30	30	30	30

Тщательно перемешайте, а смесь инкубируется при комнатной температуре для 30 минуты. Добавить смесь в 1 мл стеклянную кювету, и обнаружить значение поглощения каждой трубки при 560 нм. ΔAt = at-ac，ΔAb = ab1-ab2. Если внизу есть осадки, тщательно перемешать, а затем измерить.

III. Расчет:

1. Процент запрета:

Процент ингибирования =[ΔAb -ΔAt]÷ ΔAb × 100%

Процент ингибирования должен составлять 30%~ 70% (значение близко к 50% будет более точный результат). Если расчетный процент ингибирования меньше, чем 30% или более чем 70%, Обычно необходимо отрегулировать сумму добавления образца и повторно определить. Если процент ингибирования слишком высок, образец должен быть правильно разбавлен. Если процент ингибирования слишком низкий, Образец должен быть представлен с более высокой концентрацией.

2. Определение единицы измерения: Одна единица активности фермента определяется как количество фермента катализирует ингибирование 50% в реакционной системе вышеупомянутой ксантин
3. Расчет

А. сыворотка (плазма)образец

ДЕРН (Ед/мл)"="[P ÷(1-П)× vrv]÷ против × f = 11,4 × p ÷(1-П)× f

Б. Салфетка, бактерии или культивируемые клетки

а) Концентрация белка:

ДЕРН (U/ML Prot) "=" [P ÷(1-П)× vrv]÷(Vs×Cpr)× f = 11,4 × p ÷(1-П)÷ CPR × f

б) Вес образца

ДЕРН (Е/г веса) "=" [P ÷(1-П)× vrv]÷(W × vs ÷ vsv)× f = 11,4 × p ÷(1-П)÷ w × f

с) Бактерии или количество клеток

ДЕРН (Ячейка U / 104)"="[P ÷(1-П)× vrv]÷(500× vs ÷ vsv)× f = 0,0228 × p ÷(1-П)× f

Веревка: Общий объем реакции, 1.026 мл; Против: Объем образца, 0.09 мл;

Всв: Объем экстракции, 1 мл;

КПР: Концентрация белка образца, мг/мл; Вт: Вес образца, г;

500: Общее количество бактерий и клеток, 5 миллион. П: Процент запрета, %;

Ф: Разбавление образца множество.

Примечание:

1. Образец и реагент ⅱ должны быть помещены на лед, когда
2. Когда есть много образцов, рабочее решение (в том числе реагент я, II и III) можно настроить в соответствии с таблицей. Реагент V должен быть добавлен
3. После завершения реакции, может быть сформировано осадки, который можно определить после

Экспериментальные примеры:

1. 1 g of echinochloa crusgalli добавляется в 1 ML реагента экстракции для гомогенизации. После того, как супернатант взят, операция выполняется в соответствии с этапами определения. Результаты показали, что ΔAT = AT — АС = 0.335-0.012 "=" 0.323, ΔAb = ab1 - ab2 = 0.957-0.003 "=" 0.954. Процент ингибирования = (ΔAB- ΔАТ)÷ ΔAb × 100% "=" 72%, и активность фермента рассчитывается в соответствии с массой образца.

Активность дерна (Ед/г массы) "=" 11.4 × процент ингибирования (1-Процент запрета) × w = 293.14 Ед/г массы.

2. 1 ML реагента экстракции добавляется в 0.1 G крысиной селезенки для гомогенизации. После того, как супернатант взят, операция выполняется в соответствии с этапами определения. Результаты показали, что ΔAT = AT- АС = 0.563-0.213 "=" 0.35, ΔAb = ab1- Ab2 = 0.957-0.003 "=" 0.954, Процент ингибирования = (ΔAb -ΔAt)÷ ΔAb × 100% = 31%

Активность дерна (Ед/г массы) "=" 11.4 × процент ингибирования (1-Процент запрета) × w = 196.71 Ед/г массы.

3. 10 миллион клеток экстрагируется и центрифугируется путем добавления 1 мл реагента экстракции, и тогда операция выполняется в соответствии с этапами определения. Результаты следующие: ΔAt = at — Ac = 614-0.015 = 0.599, ΔAb = ab1- Ab2 = 0.944-0.005 "=" 0.939, Процент ингибирования = (ΔAB- ΔАТ) × ΔAB ​​× 100% "=" 36.21%

Активность дерна (Ячейка U / 104) = Процент ингибирования ÷ (1-Процент запрета)× vts]÷(1000× vs ÷ vts) "=" 0.0065 Ячейка U / 104.

Рекомендации:

• Spitz D r, Оберли L w. Анализ на активность супероксиддисмутаза в гомогенатах тканей млекопитающих[Дж]. Аналитическая биохимия, 1989,179(1):8-18.
• Масайасу м, Хироши y. Упрощенный метод анализа активности супероксиддисмутазы для клинического использования[Дж]. Acta Chemical Clinic, 1979,92(3):337-342.

сопутствующие товары:

BC0190/BC0195 Полифенолксидаза (PPO) Набор для анализа активности

BC0210/BC0215 Фенилалнин аммиалиаза (Приятель) Набор для анализа активности

BC0200/BC0205 Каталаза (КОТ) Набор для анализа активности

BC0090/BC0095 Пероксидаза (ПОД) Набор для анализа активности