Solarbio окисленный глутатион (ГССГ) Набор для анализа содержания

Окисленный глутатион (ГССГ) Набор для анализа содержания

Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..

Операционное оборудование: Спектрофотометр/считыватель микропланшетов

Номер каталога: BC1185

Размер:100Т/96С

Компоненты:

Реагент I:100 мл×1. Хранение при 4℃. Реагент II: 130 мкл × 1. Хранение при 4℃. Реагент III: 20 мл×1. Хранение при 4℃. Реагент IV:2.5 мл×1. Хранение при 4℃.

Реагент V: Порошок × 1. Хранение при 4℃. Растворить с 2.5 мл дистиллированной воды, если будет использоваться раствор, затем расщепляются на более мелкие пакеты, хранить при -20℃.

Реагент VI:12.5 мкл × 1. Хранение при 4℃. Приготовить реагент VI и дистиллированную воду в соответствии с размером образца в соотношении 1:20 (В: В) перед использованием.

Стандартный: Пудра 10 мг × 1. Хранение при 4℃.

Описание продукта

Окисленный глутатион(ГССГ) является окисленной формой глутатиона (ГШ), также известный как Dithioneglutathione, образуется путем окисления двух молекул глутатиона. GSSG сводится к GSH с помощью глутатион редуктазы, так что большая часть тела находится в уменьшенной форме. Определение содержания GSH и GSSG и соотношения GSH/GSSG в клетках может отражать окислительно -восстановительный статус клеток. Этот комплект использует реакцию глутатиона и 5, 5′-Дитиобис-2-нитробеновая кислота (Dtnb) Чтобы произвести 5-тио-2- нитробензойная кислота. 5-Тио-2- нитробензоевая кислота имеет наибольшее поглощение на длине волны 412 нм, и 2-винилпиридин ингибирует снижение глутатиона в оригинале образцов, и затем используя глутатион редуктазу для уменьшения GSSG до GSH, Определение содержания окисленного глутатиона.

Технические характеристики

Минимальный предел обнаружения：3.211 мкг/мл

Линейный диапазон：3.9-125 мкг/мл

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки.

Аналитический баланс, ступка/гомогенизатор, охлажденная центрифуга, водяная баня, регулируемая пипетка, Спектрофотометр/ считыватель микропланшета, микро-стеклянная кювета/96-луночный планшет с плоским дном.

Процедура

я. Образец подготовка

1. 1. Образец ткани

Дважды промойте свежие ткани PBS, затем добавьте 0.1 G образца в гомогенизатор (Гомогенизатор был промыт реагентом I и помещен на лед перед использованием). Добавлять 1 мл реагента I (Доля ткани и реагентов может быть постоянной), полностью шлифовать на льду (Использование жидкого азота будет иметь лучший эффект шлифования). Центрифуга в 8000 × g и 4 ℃ для 10 минуты, Возьмите супернатант и поместите его в 4 ℃ для тестирования. (Супернатант можно хранить в -80 ℃ для 10 дни)

2. Образец крови

Плазма: Образец центрифугируется в 600 × g и 4 ℃ для 10 минуты. Поглощение верхней плазмы в другую трубку добавьте с тем же объемным реагентом I. Центрифуга в 8000 × g и 4 ℃ для 10 минуты, Возьмите супернатант и поместите его в 4 ℃ для тестирования. (Супернатант можно хранить в -80 ℃ для 10 дни)

Клетка крови:Образец центрифугируется в 600 × g и 4 ℃ для 10 минуты. Отбросить верхнюю плазму, промыть тройным объемом PBS для 3 раз (смешать клетку крови с центрифугой PBS в 600 ×g для 10 минуты), Добавьте равный объем реагента I. После смешивания, он помещен в 4 ℃ для 10 минуты. Центрифуга в 8000 ×g для 10 минуты, Возьмите супернатант и поместите его в 4 ℃ для тестирования. (Супернатант можно хранить в -80 ℃ для 10 дни)

3. Образец клеток

Сбор ячейки должен быть не менее 106, а затем дважды промыть PBS (Смешайте клетку с центрифуги PBS при 600 × g для 10 минуты), Смешайте осажденную клетку с объемом PBS для 3 раз. Повторное замораживание и оттаивание 2–3 раза (Предложите заморозить в жидком азоте, растворенная в 37 ℃ водяной бане). Центрифуга в 8000 ×g для 10 минуты, Возьмите супернатант и поместите его в 4 ℃ для тестирования. (Супернатант можно хранить в -80 ℃ для 10 дни)

II. Процедура

1. Предварительный нагрев спектрофотометра/считывателя микропланшетов для 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 412 нм, обнулить счетчик дистиллированной
2. Разогрейте реагент II в водяной бане для 30 минуты: 37℃ (млекопитающие) или 25℃ (другие виды).
3. Стандартное разбавление: Растворить стандарт с 1 мл дистиллированной воды (4℃) на концентрацию 10 мг/мл. Возьмите подходящий раствор, чтобы подготовить стандарт концентрации 125 мкг/мл、 5мкг/мл、31.25мкг/мл、15.625мкг/мл、7.8125мкг/мл、3.90625мкг/mland0 мкг/мл (Разбавление-это десятикратный разбавленный реагент I).

4. Добавлять 20 мкл разбавленного стандарта или образца до 0.5 МЛ центрифужная трубка, добавлять 1 мкл реагента II, инкубировать в 37 ℃ для 30 Через несколько минут после смешивания.
5. Сделайте стандартные кривые

После инкубации, добавлять 140 мкл реагента III, 20 мкл реагента IV, 20мкл реагента V, и 2 мкл реагента VI в стандартную трубку в последовательности. После быстрого смешивания, Поглощение света A1 и A2 30 песок 150 s соответственно измерялись в 412 нм. Поглощение (A2-A1) это абсцисса (Икс) и концентрация - это ордината (й), Создание стандартной кривой.

Добавлять 140 мкл реагента III, 20 мкл реагента IV, 20 мкл реагента V, и 2 Реагент мклоф VI в пробирки для образцов последовательно. После быстрого смешивания, Поглощение света A1 и A2 30 песок 150 s соответственно измерялись в 412 нм, ΔA = A2- А1.

III. Расчеты

Согласно стандартной кривой, образец ΔA в формулу (Икс), Рассчитайте концентрацию образца Y

(мкг/мл).

• Концентрация белка

GSSH (мкг / Mg Prot)= y × vrv ÷ vrv ÷ cpr = y ÷ cpr

• Вес образца

GSSH (мкг /г)= y × vrv ÷(VRV ÷ VSV × W.)= y ÷ w

• Cellamount

GSSH (мкг /106 клетка)= y × vrv ÷(VRV ÷ VSV × N.)= y ÷ n

• Объем решения

GSSH (мкг / мл)= y × vrv/vs = 2y

Н: Количество ячеек,106；

Веревка: Общий объем реакции, 0.203 мл；

Всв: Объем супернатанта был добавлен в систему реакции, 20 мкл = 0,02 мл； Вт: Вес образца, г;

КПР: Концентрация белка в супернатанте, мг/мл.

Примечания:

1. Выборка должна быть полностью гомогенизирована. Если тест не может быть выполнен временно, он может храниться AT-80 ℃.
2. Если содержание содержания GSSG в выборке неясно, Несколько градиентов можно разбавить перед измерением.
3. Этот метод использует скорость ферментативной реакции для расчета концентрации субстрата и полных показаний как можно точнее в 30 и 150
4. Реагент I содержал белковое осаждение, Супернатант не может быть использован для определения концентрации белка. Если содержание белка необходимо определить, Возьмите другую ткань.

Ссылка:

• Альперт А., Гилберт Х ф. Обнаружение окисленного и восстановленного глутатиона с помощью рециркуляции постколоночной реакции[Дж]. Аналитическая биохимия, 1985, 144(2):553-562.
• Owens C W I, Belcher r Колориметрический микрометод для определения глутатиона[Дж]. Биохимический журнал, 1965, 94(3): 705.

Сопутствующие товары：

BC1170/ BC1175 уменьшен глютатион (GSH) Комплект для анализа

BC1190/ BC1195 Глутатион Пероксидаза Комплект

BC0350/ BC0355 Глутатион S-трансфераза(Гф) Набор для анализа активности

BC1160/ BC1165 Глутатион редуктаза (Гр) Набор для анализа