Соларбио Малоновый диальдегид (МДА) Набор для анализа содержания

Малоновый диальдегид (МДА) Набор для анализа содержания

Примечание: Необходимо предсказать 2-3 Большие образцы разности перед формальным определением. Операционное оборудование: Спектрофотометр.

Кот нет: BC0020

Размер: 50Т/48С

Компоненты:

Компонент	Тип	Объем/количество	Хранилище
Экстракционный реагент	Жидкость	60 мл × 1	4°С
Реагент I	Жидкость	42 мл × 1	4°С
Реагент II	Пудра	—	4°С
MDA Рабочий реагент	Жидкость	20 ML Реагент i	4°С
		+ Реагент II
Реагент III	Жидкость	12 мл × 1	4°С

Примечание: Рабочее решение для обнаружения MDA трудно растворить, который можно нагреть на уровне 70 ℃ и сильно вибрировать, чтобы способствовать растворению. Или ультразвуковым лечением для содействия растворению.

Описание продукта:

• Перекись липидов генерируется через взаимодействие свободных радикалов кислорода с ненасыщенными жирными кислотами, в конечном итоге формирование соединений, таких как малонологичный (МДА). Уровень перекисного окисления липидов служит индикатором, который можно оценить путем измерения уровней MDA.
• В кислых и высокотемпературных условиях, коричнево-красное соединение, 3,5,5-Три метилсульфаметоксазола-2,4-двое кетон, синтезируется через реакцию конденсации между MDA и тиобарбитурной кислотой (ТБА). Это соединение демонстрирует максимальное поглощение при 532 нм. Оценка перекисного окисления липидов включает в себя колориметрический анализ. Однако, Наличие растворимых сахаров может мешать процессу обнаружения. Реакция растворимых сахаров с TBA дает цветовую реакцию с длинами волн поглощения при 450 NM и 532 нм. В этом наборе для анализа, Содержание MDA определяется дисперсией поглощения при 532 нм, 450 нм, и 600 нм.
• Из -за присутствия сахарозы в тканях растений и глюкозы в тканях животных, Комплект включает в себя две вычислительные формулы, адаптированные для сахарозы и глюкозы. Эти формулы подходят для оценки липидов.

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки:

Спектрофотометр, водяная баня, настольная центрифуга, пипетка для переноса,1 стеклянная кювета мл, ступка/гомогенизатор, лед и дистиллированная вода.

Процедура:

я. Базовые приготовления:

Бактерии или клетки:

Собирайте бактерии или клетки в центрифужную трубку. 5 миллион бактерий или клеток можно смешать с 1 мл реагента экстракции. Используйте ультразвуковое значение для разделения бактерий и клеток (помещенный на лед, Ультразвуковая власть 200 Вт, Ультразвуковое время 3 секунды, интервал 10 секунды, повторить для 30 раз). Центрифуга в 8000 ×g для 10 минуты в 4 ℃ для удаления нерастворимых материалов, и возьмите супернатант на льду перед тестированием.

Салфетка:

0.1 г ткани можно смешать с 1 ML реагента для экстракции и полностью гомогенизируется на ледяной ванне. Затем центрифуга в 8000 ×g для 10 минуты в 4 ℃ для удаления нерастворимых материалов, и возьмите супернатант на льду перед тестированием.

сыворотка:

Обнаруживать

II. Определение процедура:

1. Разогрейте спектрофотометр для более чем 30 минуты, установить ноль с дистиллированным
2. Добавьте реагенты из следующего списка:

Реагент (мкл)	Пробирка (Т)	Пустая трубка (Б)
MDA Рабочий реагент	600	600
Образец	200	—
Дистиллированная вода	—	200
Реагент Ⅲ	200	200

Смесь будет инкубирована при 100 ℃ для 60 минуты (плотно близко, чтобы предотвратить потерю влаги), Охлажденный на льду, и центрифугировал в 10000 ×g для 10 минуты при комнатной температуре для удаления нерастворимых материалов. Возьмите супернатант в 1 стеклянная кювета мл, и измерьте поглощение в 450 нм, 532 NM и 600 нм.

∆A450 = A450(Т)-A450(Б), ∆A532 = A532(Т)-A532(Б), ∆A600 = A600(Т)-A600(Б). Пустая трубка должна проверить один или два раза.

III. Расчет:

1. Салфетка, бактерии или культивируемые клетки

• Концентрация белка:

МДА (Nmol/Mg Prot)"="(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29× ∆A450)×Врв÷(Cpr×Vs)

= 5 ×(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29× ∆A450)÷Cpr

• Вес образца:

МДА (Вес нмоль/г)"="( 6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29× ∆A450)×Врв÷(W × vs ÷ vsv)

= 5 ×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29× ∆A450)÷Вт

• Cellamount:

МДА (nmol/104cell)"="( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 1.29× APly450)×Врв÷(400× vs ÷ vsv)

= 0,01 ×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29× ∆A450)

• сыворотка:

МДА (NMOL/ML)"="(6.45×(DA532 -DA600)-1.29× ΔA450)× vrv ÷ vs

= 5 ×(6.45×(DA532 -DA600)-1.29× ΔA450)

2. Растения ткани:

• Вес образца

МДА (Вес нмоль/г)"=" (6.45×(∆A532-∆A600)-0.56× ∆A450)×Врв÷(W × vs ÷ vsv)

= 5 ×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56× ∆A450)÷Вт

• Концентрация белка:

МДА (Nmol/Mg Prot)"="( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56× ∆A450)×Врв÷(Cpr×Vs)

= 5 ×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56× ∆A450)÷Cpr

Веревка: Общий объем реакции, 1 мл; Против: Объем образца, 0.2 мл;

Всв: Объем экстракции, 1 мл;

КПР: Концентрация белка образца, мг/мл; Вт: Вес образца, г;

400: Общее количество бактерий и клеток, 5 миллион.

Примечание:

Если обнаружено, что значение поглощения образца слишком низкое, Время ванны в кипящей воде может быть отрегулировано из 60 минут до 90 минуты или дольше. Обнаружение MDA в том же эксперименте должно быть расширено до того же времени, чтобы избежать ошибок.

Рекомендации

• Spitz D r, Оберли L w. Анализ на активность супероксиддисмутаза у гомогенатов Mammaliantissue[Дж]. Аналитическая биохимия,1989
• Масайасу м, Хироши y. Упрощенный метод анализа активности супероксиддисмутазы для клинического использования[Дж]. Химическая клиника

Сопутствующие товары:

BC3590/BC3595 Перекись водорода (H2O2) Набор для анализа содержания

BC1090/BC1095 Ксантиноксидаза (ХОД) Набор для анализа активности

BC0690/BC0695 глюкозосидаза (БОГ) Анализ активности комплект BC1270/BC1275 белок -карбонильный набор для анализа BC1280/BC1285 Диаминоксидаза Диаминоксидаза (Дао) Комплект для анализа активности BC1290/BC1295 Комплект для анализа анионов супероксидного анионов

Клиенты’ Обзоры продуктов Solarbio для справки