Набор для анализа содержания альбумина Solarbio (Бромкрезоловый зеленый колориметрия)

Обзор продукта

Компоненты продукта

Подготовка решения:

1. Решение разработки цвета:
   • Подготовьте решение для разработки цвета в соответствии с количеством образцов путем смешивания реагента One, Реагент второй, и реагент три в соотношении 10 мкл: 990мкл: 10мкл (1010мкл для 5 тесты). Тщательно перемешайте и используйте немедленно.
2. Стандартное решение:
   • Подготовить 10 MG/ML Стандартное решение альбумина. Перед использованием, взять 200 мкл 10 МГ/мл Стандартный раствор альбумина и добавьте 200 мкл раствора экстракции, чтобы подготовить 5 MG/ML Стандартное решение альбумина. Тщательно перемешайте и используйте немедленно.

Описание продукта:

• Альбумин:
  • Печень синтезирует основной белок в плазме человека.
  • Важное питательное вещество, которое поддерживает осмотическое давление в плазме.
  • Связывается с различными питательными веществами, гормоны, и наркотики.
  • Отражает состояние питания организма.
  • Используется для скрининга на заболевания, влияющие на метаболическую функцию печени (например, цирроз, повреждение печени, недоедание, Злокачественные опухоли).
• Метод обнаружения:
  • В ph 4.2 буферное решение, сывороточный альбумин несет положительный заряд.
  • В присутствии неионогенного поверхностно-активного вещества, альбумин связывается с отрицательно заряженным красителем бромкрезоловым зеленым..
  • Образует сине-зеленый комплекс..
  • Комплекс имеет пик поглощения при длине волны 630 нм.
  • Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации альбумина..
• Реакция:
  • Альбумин + Бромкрезоловый зеленый → Сине-зеленый комплекс (630 нм)

Примечание:

• До эксперимента, выбор 2-3 образцы с ожидаемыми большими различиями рекомендуется провести предварительный эксперимент.
• Если поглощение образца выходит за пределы диапазона измерения, для обнаружения рекомендуется разбавление или увеличение объема пробы.

Необходимые инструменты и расходные материалы (быть готовым):

• Видимый спектрофотометр/считыватель микропланшетов
• Низкотемпературная центрифуга
• Аналитический баланс
• Микростеклянные кюветы/96-луночные планшеты
• Регулируемые пипетки
• Раствор/гомогенизатор/ультразвуковой разрушитель клеток
• Лед и дистиллированная вода

Процедура:

Образец обработки (Объем образца можно соответствующим образом отрегулировать.; Конкретные соотношения могут быть упомянуты из литературы):

1. Образцы тканей:
   • Добавить раствор экстракции в соотношение массы образца (г) для извлечения объема раствора (мл) из 1:5~10 (рекомендую взвешивать 0,1 г образца и добавить 1,0 мл раствора экстракции).
   • Гомогенизировать образец в ледяной ванне, затем центрифуга в 4 ℃, 8000G для 10 минуты.
   • Отбросьте гранул и держите супернатант на льду для тестирования.
2. Образцы бактерий/клеток:
   • Добавить раствор экстракции в соотношение бактериального/клеточного количества (10^6) для извлечения объема раствора (мл) 5 ~ 10:1 (рекомендую добавить 1,0 мл раствора экстракции в 5 миллион бактерий/клетки).
   • Разрушить бактерии/клетки в ледяной бане, используя нарушение ультразвуковых клеток (власть 200 Вт, Ультразвуковое для 3 с, интервал 7 секунд, общее время 5 минуты).
   • Центрифуга при 4 ℃, 8000G для 10 минуты.
   • Отбросьте гранул и держите супернатант на льду для тестирования.
3. Жидкие образцы:
   • Измерение напрямую.
   • Если жидкость мутная, центрифуга и использовать супернатант для измерения.

1. Приготовление видимого спектрофотометра/считывателя микропланшетов:
   • Разогрейте видимый спектрофотометр/считыватель микропланшета, по крайней мере, по крайней мере 30 минуты.
   • Установить длину волны на 630 нм.
   • Ноль видимый спектрофотометр с дистиллированной водой.
2. Операционная таблица (Добавить следующие реагенты в микроэлементы Cuvettes/96-луночные таблички):

• Хорошо перемешайте и оставайтесь при комнатной температуре для 20 секунды.
• Измерить поглощение каждой трубки в 630 нм, Запись значений как a_test, A_standard, и a_blank.
• Рассчитайте ΔA_TEST = A_TEST — A_blank, и ΔA_standard = a_standard — A_blank.
• Обратите внимание, что необходимо измерить пустую трубку и стандартную трубку. 1-2 раз.

Примечание: Длина времени стояния может повлиять на результаты обнаружения. Рекомендуется реагировать непосредственно в микроэлементных кюветах/96-луночных пластинах для 20 секунды, а затем измерьте поглощение.

Расчет контента альбумина

1. Расчет по концентрации белка образца

Контент альбумина (мг/мг прот) = ΔA измерено × (C Стандарт ÷ ΔA стандарт) × v Образец ÷ (V Образец × CPR) "=" 5 × ΔA измеренное ÷ ΔA стандартное ÷ Cpr

2. Расчет по массе образца

Контент альбумина (мг/г массы) = ΔA измерено × (C Стандарт ÷ ΔA стандарт) × v Образец ÷ (Вт × В выборки ÷ В общей сложности выборки) "=" 5 × ΔA измеренное ÷ ΔA стандартное ÷ Вт

3. Расчет по количеству бактерий/клеток

Контент альбумина (мг/10^6 клеток) = ΔA измерено × (C Стандарт ÷ ΔA стандарт) × v Образец ÷ (V выборки × N ÷ V выборки, всего) "=" 5 × ΔA измеренное ÷ ΔA стандартное ÷ N

4. Расчет по объему жидкости

Контент альбумина (мг/мл) = ΔA измерено × (C Стандарт ÷ ΔA стандарт) × В выборки ÷ В выборки = 5 × ΔA измеренное ÷ ΔA стандартное

Определения:

• Стандарт С: Стандартная концентрация в пробирке, 5 мг/мл;
• V образец: Добавлен том образца, 0.02мл;
• V выборка всего: Общий добавленный объем экстракта, 1мл;
• КПР: Концентрация белка образца, мг/мл;
• Вт: Масса образца, г;
• Н: Общее количество бактерий/клеток, через 10^6

Примечания:

1. Если ΔA_test меньше 0.010 или оптическая плотность пробирки близка к оптической плотности пустой пробирки, вы можете увеличить объем образца перед измерением. Если ΔA_test больше, чем 0.5, Рекомендуется надлежащим образом разбавить супернатант образца с помощью раствора экстракции перед измерением. Примечание, чтобы одновременно отрегулировать формулу расчета.
2. Если образец становится мутным после добавления разработчика цвета, Рекомендуется надлежащим образом разбавить супернатант образца с помощью раствора экстракции перед измерением. Примечание, чтобы одновременно отрегулировать формулу расчета.

Экспериментальный пример:

1. Возьмите 20 мкл образца сыворотки человека, разбавить его 10 раз с раствором извлечения, Следуйте этапам измерения, и измерьте его, используя 96-луночную пластину. Расчет: ΔA_Test = a_test — A_blank = 0.426 — 0.124 "=" 0.302, ΔA_standard = a_standard — A_blank = 0.406 — 0.124 "=" 0.282. Рассчитано на основе объема жидкости: Контент альбумина (мг/мл) "=" 5 × ΔA_Test ÷ ΔA_Standard × 10 (Коэффициент разведения) "=" 53.546 мг/мл.