Solarbio β-galactosidase (β-GAL) Набор для анализа

β-galactosidase (β-GAL) Набор для анализа

Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..

Операционное оборудование: Microplate Reader/Spectrophotometer

Номер каталога: BC2585

Размер:100Т/48С

Компоненты:

Экстракт раствора: Жидкость 100 мл×1. Хранение при 4℃.

Solution I: Порошок×1. Хранение при -20℃. Добавлять 2.55 mL of distilled water to per bottle before use and dissolve it fully. The left reagent store at -20℃.

Solution Ⅱ: Жидкость 4 мл×1. Хранение при 4℃.

Solution Ⅲ: Жидкость 15 мл×1. Хранение при 4℃.

Стандартный: Жидкость 1 мл ×1. Хранение при 4℃. 5 μmol/mL p-nitrophenol solution.

Описание продукта

β-galactosidase (β-GAL, ЕС 3.2.1.23) is an enzyme found broadly in animals, растения, микроорганизмы и культивируемые клетки, which can catalyze the hydrolysis of β-galactosyl bonds and also has the function of transglycosylation. β-GAL can release stored energy for the rapid growth of plants, also catalyzes the degradation of polysaccharides, glycoproteins, and galactose terminal galactose residues in normal polysaccharide metabolism, cell wall component metabolism and during aging cell wall to release free galactose.

β-GAL can catalyze the p-nitro phenyl-β-pyran galactoside to p-nitro phenol. The product has characteristic of absorption at 400 нм. В этом комплекте, the β-GAL activity is quantified by measuring the increase in the color development at 400 нм.

Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки.

Ридер для микропланшетов или спектрофотометр, центрифуга, водяная баня, пипетка для переноса, микро-стеклянная кювета/96-луночный планшет с плоским дном, лед, mortar/homogenizer and distilled water.

Процедура

я. Preparation of standard samples:

1. Бактерии или клетки

Сбор бактерий или клеток в центрифужную трубку, after centrifugation discard supernatant. Suggest add 1 мл раствора экстракта 5 миллионов бактерий или клеток. Используйте ультразвуковое значение для разделения бактерий и клеток (помещенный на лед, ультразвуковая мощность 20%, рабочее время 3 секунды, интервал 10 секунды, повторить для 30 раз). Centrifuge at 15000×g for 20 Протокол в 4 ℃, чтобы удалить нерастворимые материалы и взять супернатант на льду перед тестированием.

2. Салфетка

Добавлять 1 мл раствора экстракта 0.1 г ткани, and fully homogenized on ice bath. Centrifuge at 15000×g for 20 минуты в 4 ℃ для удаления нерастворимых материалов, и возьмите супернатант на льду перед тестированием.

II. Определение

1. Preheat the microplate reader or spectrophotometer for more than 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 400 нм, установить ноль с помощью дистиллированной воды.
2. Standard Dilute the solution to 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 0 nmol/mL with distilled water.

3. Добавьте реагенты из следующего списка:

Реагент	Пробирка (Т)	Contrast Tube (С)	Стандартная трубка (С)
Solution I (мкл)	25	—	—
Дистиллированная вода (мкл)	—	25	—
Solution Ⅱ (мкл)	35	35	—
Образец (мкл)	10	10	—
Mix thoroughly and incubate the reaction for 30 minutes at 37℃ water bath.
Стандартный (мкл)	—	—	70
Solution Ⅲ (мкл)	130	130	130

Тщательно перемешать. Detect the absorbance of each tube at 400 nm and noted as AT, переменного тока, AS and AB. Calculate

ΔAT= AT — переменного тока, ΔAS = AS — АБ. Each test tube should be provided with one contrast tube.

III. Calculate:

1. Стандартная кривая

Standard curve established: According to the concentration of the standard tube (y nmol/mL) and absorbance ΔAS= AS — АБ (Икс), establish the standard curve. Add ΔA into the standard curve, and calculate the amount of product generated by the sample (NMOL/ML).

2. Расчет

• Концентрация белка ткани

Определение единицы измерения: Одна единица ферментативной активности определяется как количество ферментов, катализирующих образование 1 nmol of p-nitrophenol in the reaction system per hour, every mg protein.

β-GAL Activity(Ед/мг прот)"="(y×Vrv)÷(Vs×Cpr)÷T=14×y÷Cpr

• Вес ткани

Определение единицы измерения: Одна единица ферментативной активности определяется как количество ферментов, катализирующих образование 1 nmol of p-nitrophenol in the reaction system per hour, every g sample.

β-GAL Activity(Ед/г )"=" (y×Vrv)÷(W × vs ÷ ve)÷T=14×y÷W

• Бактерии или культивируемые клетки

Определение единицы измерения: Одна единица ферментативной активности определяется как количество ферментов, катализирующих образование 1 nmol of p-nitrophenol in the reaction system per hour, каждый 104 бактерии или клетки.

β-GAL Activity(Ячейка U / 104)"="(y×Vrv)÷(500×Vs÷Ve)÷T=0.028×y

КПР: Концентрация белка супернатанта (мг/мл); Веревка: Общий объем реакции, 0.07 мл;

Против: Сверхнациональный том, 0.01 мл; ве: Извлеките объем раствора,1 мл;

Т: Время реакции (мин), 30 minutes = 0.5 час; Вт: Вес образца, г;

500: 5 миллионы клеток или бактерий.

сопутствующие товары：

BC0340/BC0345 Glucogen Content Assay Kit

BC0360/BC0365 β-1,3-glucanase(β-1,3-GA) Набор для анализа активности