β-галактозидаза (β-гал) Набор для анализа
Примечание: Перед тестированием возьмите два или три разных образца для прогнозирования..
Операционное оборудование: Микропланшетный считыватель/спектрофотометр
Номер каталога: BC2585
Размер:100Т/48С
Компоненты:
Экстракт раствора: Жидкость 100 мл×1. Хранение при 4℃.
Решение я: Порошок×1. Хранение при -20℃. Добавлять 2.55 мл дистиллированной воды на бутылку перед использованием и полностью растворить ее. Left Reagent Store на -20 ℃.
Решение ⅱ: Жидкость 4 мл×1. Хранение при 4℃.
Решение ⅲ: Жидкость 15 мл×1. Хранение при 4℃.
Стандартный: Жидкость 1 мл ×1. Хранение при 4℃. 5 мкмоль/мл раствор p-нитрофенола.
Описание продукта
β-галактозидаза (β-гал, ЕС 3.2.1.23) Фермент, найденный широко у животных, растения, микроорганизмы и культивируемые клетки, который может катализировать гидролиз β-галактозильных связей, а также выполняет функцию трансгликозилирования. β-gal может выделять накопленную энергию для быстрого роста растений, также катализирует деградацию полисахаридов, гликопротеины, и остатки галактозы терминальных галактозы в нормальном метаболизме полисахаридов, Метаболизм компонентов клеточной стенки и во время стареющей клеточной стенки для высвобождения бесплатной галактозы.
β-gal может катализировать P-нитро фенил-β-пирановый галактозид с p-нитро фенолом. Продукт имеет характерное количество поглощения на 400 нм. В этом комплекте, активность β-гал определяется количественно путем измерения увеличения развития цвета при 400 нм.
Требуемые реагенты и оборудование, которые не входят в комплект поставки.
Ридер для микропланшетов или спектрофотометр, центрифуга, водяная баня, пипетка для переноса, микро-стеклянная кювета/96-луночный планшет с плоским дном, лед, раствор/гомогенизатор и дистиллированная вода.
Процедура
я. Подготовка стандартных образцов:
- Бактерии или клетки
Сбор бактерий или клеток в центрифужную трубку, После центрифугирования выбросить супернатант. Предложить добавить 1 мл раствора экстракта 5 миллионов бактерий или клеток. Используйте ультразвуковое значение для разделения бактерий и клеток (помещенный на лед, ультразвуковая мощность 20%, рабочее время 3 секунды, интервал 10 секунды, повторить для 30 раз). Центрифуга при 15000 × g для 20 Протокол в 4 ℃, чтобы удалить нерастворимые материалы и взять супернатант на льду перед тестированием.
- Салфетка
Добавлять 1 мл раствора экстракта 0.1 г ткани, и полностью гомогенизируется на ледяной ванне. Центрифуга при 15000 × g для 20 минуты в 4 ℃ для удаления нерастворимых материалов, и возьмите супернатант на льду перед тестированием.
II. Определение
- Разогреть считывателя или спектрофотометра микропланшета для более чем 30 минуты, отрегулировать длину волны, чтобы 400 нм, установить ноль с помощью дистиллированной воды.
- Стандартно разбавить раствор 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 0 nmol/мл с дистиллированной водой.
- Добавьте реагенты из следующего списка:
| Реагент | Пробирка (Т) | Контрастная трубка (С) | Стандартная трубка (С) |
| Решение я (мкл) | 25 | — | — |
| Дистиллированная вода (мкл) | — | 25 | — |
| Решение ⅱ (мкл) | 35 | 35 | — |
| Образец (мкл) | 10 | 10 | — |
| Тщательно перемешать и инкубировать реакцию для 30 минуты в 37 ℃ водяной бани. | |||
| Стандартный (мкл) | — | — | 70 |
| Решение ⅲ (мкл) | 130 | 130 | 130 |
Тщательно перемешать. Обнаруживайте поглощение каждой трубки в 400 NM и отмечен как в, переменного тока, Как и ab. Рассчитать
ΔAt = at — переменного тока, ΔAS = как — АБ. Каждая пробирка должна быть предоставлена одной контрастной трубкой.
III. Рассчитать:
1. Стандартная кривая
Стандартная кривая установлена: В соответствии с концентрацией стандартной трубки (y nmol/ml) и абсорбция Δas = как — АБ (Икс), установить стандартную кривую. Добавить ΔA в стандартную кривую, и рассчитайте количество продукта, генерируемого образцом (NMOL/ML).
2. Расчет
- Концентрация белка ткани
Определение единицы измерения: Одна единица ферментативной активности определяется как количество ферментов, катализирующих образование 1 Нмоль п-нитрофенола в реакционной системе в час, Каждый белок мг.
β-гал активность(Ед/мг прот)"="(Y × VRV)÷(Vs×Cpr)÷ t = 14 × y ÷ cpr
- Вес ткани
Определение единицы измерения: Одна единица ферментативной активности определяется как количество ферментов, катализирующих образование 1 Нмоль п-нитрофенола в реакционной системе в час, каждый образец G..
β-гал активность(Ед/г )"=" (Y × VRV)÷(W × vs ÷ ve)÷ t = 14 × y ÷ w
- Бактерии или культивируемые клетки
Определение единицы измерения: Одна единица ферментативной активности определяется как количество ферментов, катализирующих образование 1 Нмоль п-нитрофенола в реакционной системе в час, каждый 104 бактерии или клетки.
β-гал активность(Ячейка U / 104)"="(Y × VRV)÷(500×Vs÷Ve)÷ t = 0,028 × y
КПР: Концентрация белка супернатанта (мг/мл); Веревка: Общий объем реакции, 0.07 мл;
Против: Сверхнациональный том, 0.01 мл; ве: Извлеките объем раствора,1 мл;
Т: Время реакции (мин), 30 минуты = 0.5 час; Вт: Вес образца, г;
500: 5 миллионы клеток или бактерий.
сопутствующие товары：
BC0340/BC0345 Комплект для анализа содержания глюкогена
BC0360/BC0365 β-1,3-глюканаза(B-1,3-GA) Набор для анализа активности
Отзывы
Отзывов пока нет.