Набор для экстракции небольших количеств тканевой микроРНК

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0333	SN0334
Колонки для экстракции РНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Колонки для очистки ДНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Экстракция РНК Buffer II	30мл	2×30 мл
Буфер удаления ингибитора	30мл	2×30 мл
Промывной буфер 1	15 мл	2×15 мл
Элюирующий буфер	20 мл	20 мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

 

2. Хранилище

Этот набор реагентов следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) в сухом состоянии и устойчиво для 12 месяцы.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор предназначен для исследовательских целей в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора содержат раздражители.; желательно принять необходимые меры предосторожности (например, носить защитную одежду и очки).

3.3 Для использования этого комплекта требуется дополнительное оборудование, такое как высокоскоростная центрифуга., водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, жидкий азот, хлороформ, стерильная деионизированная вода, и EP трубки.

4. Знакомство с набором реагентов

This microRNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying microRNA from various tissues, suitable for most species. Tissues exceeding 100 mg can be processed using this RNA purification kit. The kit employs special DNA cleanup column technology to remove genomic DNA and large RNA fragments during the experimental process. In general, additional digestion on DNA columns is not required, preventing microRNA degradation.

The RNA rapid purification kit can extract plant microRNA within 1 час. The extracted microRNA can be directly used for RT-ПЦР, Нозерн-блоттинг, и т. д.. Весь процесс очистки не требует использования токсичных реагентов типа фенол-хлороформа., making the microRNA purification kit suitable for various other samples.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Меры предосторожности перед началом эксперимента:

А. Перед использованием, добавьте указанное количество безводного этанола в Стирать Буфер 1 Согласно этикетке на бутылке реагента, и отметьте проверку на этикетке, чтобы указать добавление безводного этанола.

Б. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решение содержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА повлияет на последующие эксперименты, it is recommended to use sterile deionized water instead of Elution Buffer.

1. Образец обработки:

А. Plant or Animal Tissues: Collect fresh tissues whenever possible. For plant and animal tissues, grind with liquid nitrogen, then quickly add 500μl of RNA Extraction Buffer II. Invert and mix thoroughly, avoiding tissue clumps in the lysate to prevent RNA degradation.

Б. Cell Tissues: Collect fresh growing cells in a 1.5 центрифужная пробирка мл, центрифуга в 13,000 об/мин для 1 мин, collect cells, добавлять 500μl of RNA Extraction Buffer II, vortex and shake well.

2. Инкубировать в56℃ для 1-3 мин. If the sample has a high polysaccharide content, it is advisable to skip this step.

3. Вортекс для 30 сек.

4. Центрифугируйте лизат для 10 min at 14,000 об/мин (20,000×г).

(Примечание: Polysaccharides from plant materials may result in sticky substances at this step, which can cut DNA in subsequent steps. Remove these substances during this step. После центрифугирования, transfer the supernatant to a new очистка ДНК column.)

5. Add the obtained supernatant to the DNA cleanup column (примерно 650-700 мкл каждый раз), центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 мин, собрать фильтрат (microRNA is in the filtrate at this point).
6. Estimate the volume of the filtrate accurately, добавлять 0.5 times the volume of absolute ethanol. If there is a small amount of precipitation, это не влияет на последующие эксперименты. Add the liquid to the RNA purification column, центрифуга в 13,000 об/мин для 1 мин.
7. Discard the waste and place the RNA purification column in a collection tube for the next step.
8. Добавлять 600мкл буфера удаления ингибитора, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 мин, выбросить отходы, and place the RNA purification column back into the collection tube for the next step.
9. Добавлять 700мкл промывочного буфера 1 к колонке очистки РНК, центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 2 мин, extend the centrifugation time appropriately to ensure a drier membrane.

(Примечание: Confirm the addition of absolute ethanol to Wash Buffer 1. The presence of ethanol has a severe impact on subsequent experiments. Поэтому, мембранная сухость имеет решающее значение. После центрифугирования, ensure the absence of ethanol before elution, выбросить отходы, and collect the tube.

После промывки промывочным буфером 1, Мембрана на колонке очистки РНК должна иметь только небольшой цвет. После центрифугирования, Осторожно удалить колонку очищения РНК, ensuring it does not touch the collection tube to avoid ethanol interference.)

10. Place the RNA purification column into a new centrifuge tube, добавлять 100мкл элюирующего буфера к мембране, инкубировать при комнатной температуре в течение 5 мин (15℃ to 25℃), центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 мин.

(Примечание: Eluting RNA with 50μl of Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)

11. Повторите предыдущий шаг.

Примечание: Для сбора РНК, элюированной во второй раз, можно использовать новую центрифужную пробирку., или можно использовать оригинальную пробирку для сбора РНК для продолжения сбора РНК..