ДНК-полимераза Taq
предмет номер：E001b Спецификация：500U/1000U/5000U Хранение: Хранить при -20°C.
Внедрение продукции：
Этот продукт является ДНК -полимераза TAQ, обычно называют ферментом така, который является одной из наиболее широко используемых ДНК -полимераз. Он экспрессируется в Escherichia coli с клонированным геном термической ДНК -полимеразы Thermus Aquaticus, а затем очищается через несколько этапов. The ПЦР Продукты, амплифицированные с использованием этого продукта, имеют добавленную базу на 3′ конец, позволяя клонировать в T -векторы.
Особенности продукта:
ДНК -полимераза Sanshibio Taq является улучшенной и скринированной ДНК -полимеразой TAQ. В дополнение к характеристикам самого традиционного фермента, Он также имеет более широкие преимущества после повторного тестирования.
Первый, Фермент Taq Sanshibio оснащен основным универсальным буфером, который оказывает хорошее усиление влияния на общее растение, животное, Микроб, и т. д.. ДНК или кДНК; он совместим с буферами большинства основных производителей на рынке; Модифицированный фермент в сочетании с основным универсальным буфером может достичь более сильного сопротивления, и могут переносить сырые экстракты ДНК, содержащие большое количество примесей; Он обладает более сильной стабильностью и может переносить несколько циклов замораживания-оттаивания; Для некоторых шаблонов с низким содержанием, Можно использовать количество добавленного фермента уменьшается, и количество ионов магния надлежащим образом увеличивается для достижения более чувствительного обнаружения.
Содержание продукта：
| Компоненты | E001b-01（500U) | E001b-02（1000U) | E001b-03（5000U) |
| ДНК -полимераза TAQ (5U/мкл) | 100мкл | 200мкл | 1мл |
| смесь DNTP (10мМ каждый) | 100мкл | 200мкл | 1мл |
| 10× ПЦР Буфер (мг2+ бесплатно)
|
1мл | 2× 1 мл | 10× 1 мл |
| Mgcl2 (25мм) | 1мл | 2× 1 мл | 10× 1 мл |
Хранилище:
Хранить при -20°C., с минимальным сроком годности 12 месяцы.
Определение деятельности:
Использование активированной басовой сперматозоиды в качестве шаблона/праймера, потребление 10 нмоль общих нуклеотидов в виде кислотно-нерастворимого материала в пределах 30 минуты при 74 ° С определяется как 1 единица деятельности (ты).
Контроль качества:
Этот продукт подвергся качественному тестированию и не свободен от эндонуклеазной активности, экзонуклеазная активность, и загрязнение рибонуклеазой. Остаточная геномная ДНК -хозяина ниже 10 копии.
Использование продукта:
Усиление ДНК с использованием метода ПЦР; Определение последовательности ДНК.
Инструкции по использованию:
- Растворить и смешать все необходимые растворы для реакции ПЦР и поместите их на ледяную ванну или в холодильник. Рекомендуется аликвовать реакционную смесь ПЦР, чтобы избежать повторных циклов замораживания-оттаивания.
- Желательно установить систему реакции ПЦР на ледяной ванне или в холодильнике, После рекомендуемой реакционной системы для справки.
- ДНК избыточного шаблона может привести к неспецифическим продуктам ПЦР. Рекомендуемые количество шаблонов для различных типов шаблонов в объеме реакции 50 мкл следующие:
Геномная ДНК от животных и растений: 0.1-1мкг;
Геномная ДНК из Escherichia coli: 10-100из;
Плазмидная ДНК: 0.1-10из.
Рекомендуемая система реакции:
| Реагенты | 50icl Объем системы | Конечная концентрация |
| ДНК-полимераза Taq | 1мкл | 0.1ты |
| 10× ПЦР Буфер (мг2+ бесплатно) | 5мкл | 1× |
| Mgcl2 (25мм) | 4мкл | 2мм |
| смесь DNTP (10мМ каждый) | 1мкл | 0.2мМ каждый |
| Грунтовка i (10мкм) | 1мкл | 0.2мкм |
| Primer II (10мкм) | 1мкл | 0.2мкм |
| ДНК шаблона | 1мкл | - |
| DDH2О | До 50 мкл | - |
Примечание: Количество каждого компонента в реакционной системе может быть скорректировано в соответствии с фактическими требованиями.
- Тщательно пипетка и смешайте подготовленную реакционную систему, используя пипетку, Запечатайте трубки ПЦР, Обийся их соответствующим образом, и кратко центрифуга при комнатной температуре.
- Поместите приготовленные трубки ПЦР в ПЦР-машина, Установить условия реакции, и инициировать реакцию ПЦР.
Условия реакции:
| Метод/шаги | Настройка времени | Циклы |
| 95℃ (Предварительная де натурация) | 2-5мин | 1 |
| 95℃ (Денатурация) | 30сек | 25-35 Циклы |
| 55℃ -60 ℃ (Отжиг) | 30сек | |
| 72℃ (Расширение) | 1мин | |
| 72℃ (Окончательное расширение) | 10мин | 1 |
| 4℃ （Hold) | ∞ | - |
Примечание: Условия реакции могут быть скорректированы и оптимизированы в соответствии с фактическими требованиями.
Меры предосторожности:
- Время расширения может быть скорректировано на основе таких факторов, как длина и содержание GC продукта ПЦР. Время расширения на КБ продукта тесно связано со сложностью шаблона: Простые шаблоны требуют 20 секунды, Типичные шаблоны требуют 30 секунды, и сложные шаблоны требуют 1 минута.
- Настройка реакции ПЦР должна быть адаптирована к различным условиям, таким как шаблон, праймеры, Длина продукта ПЦР, и контент GC. Конечная концентрация праймеров обычно попадает в диапазон 0,1-1,0 мкм. Концентрация шаблона ДНК может быть скорректирована соответственно. Для сложных шаблонов или высокого содержания GC, Рекомендуется продлить предварительную денатурацию/денатурацию или время расширения и повысить температуру денатурации/отжига.
- Используйте назначенные области и пипетки до и после усиления, Носите перчатки, и менять их часто. После завершения реакции ПЦР, Не открывайте реакционные трубки сразу. Позвольте им достаточно остыть при 4 ° C или -20 ° C перед открытием, чтобы минимизировать риск загрязнения продукта ПЦР в лабораторной среде.
Отзывы
Отзывов пока нет.