Набор для мелкомасштабного выделения геномной ДНК растений методом CTAB

1. Компоненты набора реагентов

Технические характеристики	50Т	100Т
Кот. Нет.	SN0201	SN0202
Колонки для экстракции ДНК (набор)	50 (набор)	100 (набор)
Реагентный буферный раствор A	30 мл	2 × 30 мл
Буферный раствор реагента C	30 мл	2 × 30 мл
Промывной буфер 1	15 мл	2 × 15 мл
РНКаза А	1мл	1мл
Элюирующий буфер	20 мл	20 мл
Инструкция по эксплуатации	1	1

2. Хранилище

Этот набор следует хранить при комнатной температуре. (15-25℃) в сухих условиях и может храниться в течение 12 месяцы. Колонки для экстракционной очистки ДНК можно хранить в прохладном и сухом помещении до 1 год. РНКаза А содержит консервант и может транспортироваться при комнатной температуре., но для длительного хранения, его следует хранить при -20 ℃.

3. Инструкции по использованию набора реагентов

3.1 Этот набор предназначен для исследовательских целей в области молекулярной биологии и не должен использоваться для диагностики или лечения заболеваний..

3.2 Некоторые компоненты набора содержат раздражители.; желательно принять необходимые меры предосторожности (например, носить защитную одежду и очки).

3.3 Для использования этого комплекта требуется дополнительное оборудование, такое как высокоскоростная центрифуга., водяная баня (металлическая ванна), вихревой смеситель, безводный этанол, жидкий азот, хлороформ, стерильная деионизированная вода, и EP трубки.

4. Знакомство с набором реагентов

The СТАБ-на базе завода Очистка ДНК Набор представляет собой улучшенный метод CTAB для очистки ДНК., использование специального связывающего буфера, который эффективно осаждает ДНК, и впоследствии собирает ДНК высокой чистоты через адсорбционную колонку..

 

Этот набор широко используется для растительных тканей и грибов., способный извлекать тотальную ДНК из образцов внутри 2 часы (включая митохондриальную ДНК и ДНК хлоропластов). Выделенная ДНК может быть непосредственно использована для последующих экспериментов, таких как ПЦР, Саузерн-блоттинг, и другие.

5. Экспериментальные принципы и процедуры

6. Процесс экстракции

Меры предосторожности перед началом эксперимента:

 

1. Буферы для реагентов A и C может выпадать в осадок в условиях низких температур. Рекомендуется нагревать при температуре 65°C. 5 минут и использовать после растворения осадков..
2. СтиратьБуфер 1 должно быть добавлено указанное количество безводного этанола, указанное на этикетке бутылки.. Отметьте этикетку после добавления этанола..
3. Элюирующий буфер представляет собой 0.1х ТЕ решениесодержащий минимальное количество ЭДТА. Если ЭДТА повлияет на последующие эксперименты, в качестве замены буфера для элюирования рекомендуется использовать стерильную деионизированную воду..

 

1. Обработка образцов:
2. Сбор и хранение материалов:

Свежесобранный материал, если не использовать сразу, следует поместить в жидкий азот и хранить при температуре -80°C.. Высушенные материалы можно хранить при комнатной температуре..

1. Если возможно, собирайте свежий материал, так как он содержит меньше полисахаридов и полифенолов.
2. При сборе грибов из жидкой культуры, отделить жидкость центрифугированием и собрать грибковые тела.
3. Измельчать вокруг 100 мг свежих проб или не более 20 мг сухого материала с использованием жидкого азота.

(Примечание: Различные количества образцов могут потребовать оптимизации посредством предварительных экспериментов перед использованием..)

3. Добавлять 550 мкл буфера для реагентов А и 10 мкл РНКазы А (10 мг/мл) чтобы убедиться в отсутствии комков тканей в измельченном образце. Комки ткани трудно лизировать и могут снизить выход ДНК.. Не смешивайте буфер для реагентов A и РНКаза Aперед использованием.
4. Инкубируйте при 65°C в течение 20-30 минуты, осторожно перевернуть 2-3 раз. Этот этап предназначен для лизиса клеток..
5. Центрифугируйте лизат для 5 минут в 14,000 об/мин (20,000×г).

(Примечание: На этом этапе некоторые растительные материалы могут содержать много липких веществ., которые могут расщеплять ДНК на последующих этапах. В идеале, удалите эти вещества, перенеся надосадочную жидкость в новую центрифужную пробирку после центрифугирования..)

6. Осторожно перенесите жидкость, полученную на предыдущем этапе, в новую центрифужную пробирку..

(Примечание: Примерно 500 мкл жидкости можно переносить; для некоторых видов, это может быть меньше, чем 500 мкл.)

7. Добавьте к лизату равный объем хлороформа и осторожно переверните, чтобы перемешать..

(Примечание: Например, добавлять 500 мкл хлороформа, если у вас есть 500 мкл лизата. Если объем лизата меньше 500 мкл, соответствующим образом отрегулируйте объем хлороформа.)

8. Центрифуга в 12,000 об/мин для 10 минуты.
9. Осторожно перенесите супернатант в новую центрифужную пробирку. (примерно 500 мкл).
10. Добавьте равный объем буфер для реагентов C и равный объем безводного этанола к лизату, и перемешать.

(Например, если ты добавишь 450 мкл буфера для реагентов C, затем добавьте 450 мкл безводного этанола. Если объем лизата меньше 450 мкл, пропорционально уменьшите количество реагентного буфера C. Некоторое осаждение произойдет при добавлении буфера для реагентов C., но это не повлияет на последующие эксперименты.)

11. Перенесите полученную жидкость в колонку для очистки ДНК. (набор), примерно 650-700 мкл каждый раз. Центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить собранные отходы, и снова вставьте пробирку для сбора в колонку очистки для следующего шага..
12. Повторить шаг 11, добавление оставшейся жидкости в колонку для очистки ДНК (набор) и центрифугировать при более чем 8,000 об/мин для 1 минута. Выбросьте отходы и пробирку для сбора..
13. Поместите колонку для очистки ДНК (набор) в новую пробирку для сбора, добавлять 300 мкл Стирать Буфер 1, центрифуга при более чем 8,000 об/мин для 1 минута, выбросить отходы, и снова вставьте колонку для очистки ДНК (набор) в трубку для следующего шага.

(Примечание: Убедитесь, что в смесь добавлен безводный этанол. Стирать Буфер 1.)

14. Добавлять 500 мкл промывочного буфера 1 в колонку очистки ДНК (набор), центрифуга в 14,000 об/мин (20,000×г) для 2 минуты, немного продлить время центрифугирования для получения более сухой мембраны.
15. Поместите колонку для очистки ДНК (набор) в новую центрифужную пробирку, открыть, и нагреваем при температуре 65°С в течение 2 минуты. Этот этап может быть продлен для максимально возможного испарения этанола, чтобы предотвратить влияние остатков этанола на последующие эксперименты..
16. Капать 100 мкл буфера для элюированияна мембрану, центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минуты.

(Примечание: 1. Элюирование ДНК с помощью 50 мкл элюирующего буфера может увеличить концентрацию ДНК, но снизить общий выход ДНК.. 2. Элюат можно повторно нанести на колонку для очистки ДНК для второго элюирования., центрифуга в 12,000 об/мин для 2 минут, чтобы собрать, что может улучшить выход ДНК.)