신규 식물 게놈 추출 키트의 소량의 DNA

1. 시약 키트의 구성 요소

명세서	50티	100티
고양이. 아니요.	SN0205	SN0206
DNA 추출 컬럼 (세트)	50 (세트)	100 (세트)
Reagent Buffer I	20 밀리리터	2×20 밀리리터
Reagent Buffer II	15 밀리리터	15 밀리리터
시약 완충액 C	30 밀리리터	2 × 30 밀리리터
용출 버퍼 1	15 밀리리터	2 × 15 밀리리터
세척 버퍼	20 밀리리터	20 밀리리터
RNase A	1밀리리터	1밀리리터
사용 설명서	1	1

2. 저장

이 키트는 실온에 보관해야 합니다. (15-25℃) 건조한 상태에서 보관할 수 있습니다. 12 개월. DNA 추출 정제 컬럼은 서늘하고 건조한 환경에 최대 1년 동안 보관할 수 있습니다. 1 년도. RNase A에는 방부제가 포함되어 있어 실온에서 운송 가능, 하지만 장기간 보관을 위해서는, -20℃에 보관해야 합니다.

 

3. 시약 키트 사용 지침

3.1 이 키트는 분자 생물학 연구 목적으로 제작되었으며 질병 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다..

3.2 키트의 일부 구성품에는 자극제가 포함되어 있습니다.; 필요한 예방 조치를 취하는 것이 좋습니다 (보호복과 고글을 착용하는 등).

3.3 이 키트를 사용하려면 고속 원심분리기 등 추가 장비가 필요합니다., 욕조 (금속 욕조), 소용돌이 믹서, 무수에탄올, 액체 질소, 클로로포름, 멸균 탈이온수, 및 EP 튜브.

4. 시약 키트 소개

The new plant genome DNA 정제 kit provides a rapid method for DNA purification. It effectively precipitates DNA with specific reagent buffers II and C, collecting high-purity DNA through adsorption columns.

This kit is widely applicable for isolating samples from plant tissues and fungi, enabling the extraction of total DNA from plants and fungi within 30 분. The extraction process doesn’t involve toxic reagents like phenol-chloroform. 추출된 DNA는 다음과 같은 후속 실험에 직접 사용될 수 있습니다. PCR 및 서던 블로팅.

5. 실험 원리 및 절차：

6. 추출과정

실험 시작 전 주의사항:

ㅏ. Reagent Buffer I and Reagent Buffer C tend to precipitate at low temperatures. 65 ° C에서 가열하는 것이 좋습니다 5 minutes until the precipitates dissolve before normal usage.

비. 사용하기 전에 세척 버퍼 1, add the specified amount of absolute ethanol as indicated on the reagent bottle label and mark a check (√) on the label to indicate the addition of absolute ethanol.

씨. The Elution Buffer is a 0.1x TE 솔루션 최소한의 EDTA 함유. EDTA가 후속 실험에 영향을 미치는 경우, it is recommended to substitute the Elution Buffer with sterile deionized water.

1. 샘플 처리:

ㅏ. 재료 수집 및 보관

새로 수집 된 재료를 즉시 사용할 수없는 경우, place them in liquid nitrogen for cooling and finally store at -80°C. 건조된 재료는 실온에서 보관 가능.

비. If conditions permit, collect fresh materials whenever possible, as fresh materials contain fewer polysaccharides and polyphenols.

씨. 액체배양에서 곰팡이를 채취할 때, separate the liquid and collect the fungal cells by centrifugation.

2. Weigh around 100 mg of fresh samples or not exceeding 20 mg of dry material and grind it with liquid nitrogen.

(메모: Different sample amounts may vary; it is advisable to optimize the sample amount through pre-experimental trials.)

3. 추가하다 400μl Reagent Buffer I and 10μl RNaseA (10 mg/ml), ensuring there are no clumps in the ground sample. Clumps are difficult to lyse, reducing the DNA yield. 또한, do not mix Reagent Buffer I and RNaseA before usage.

4. 65°C에서 배양하세요. 5 분, gently invert the mixture 2-3 타임스. This step is used for cell lysis. If samples are difficult to lyse, extend the incubation time, but not beyond 30 분.

5. 추가하다 130μl Reagent Buffer II 그리고 잘 섞으세요, then ice-bathe for 5 분 (this step is used for precipitating polysaccharides and proteins).

6. 용해물을 원심분리합니다. 5 분 14,000 rpm (20,000×g).

(메모: Some plant materials may contain a lot of viscous substances at this step, which can shear DNA in the subsequent steps. 그러므로, the ideal state is to remove these substances during this step. 원심분리 후, 상등액을 새로운 원심분리 튜브로 옮긴다. If there is a significant amount of flocculent material in the supernatant after centrifugation, it indicates that the initial sample quantity was too large. Consider reducing the initial sample amount.)

7. Carefully transfer the obtained liquid to a new centrifuge tube.

(메모: Approximately 450μl of liquid can be transferred; 일부 종의 경우, it may be less than 450μl.)

8. 같은 양의 것을 추가하십시오. 시약 완충액 C and an equal volume of absolute ethanol to the lysate and mix well.

(예를 들어: Add 450μl of Reagent Buffer C, then add 450μl of absolute ethanol. If the volume of the lysate is less than 450μl, reduce the amount of Reagent Buffer C proportionally. Adding Reagent Buffer C will cause slight precipitation, 하지만 후속 실험에는 영향을 미치지 않습니다..)

9. 얻은 액체를 DNA 추출 정제 컬럼에 첨가합니다. (전부) (매번 약 650-700μl), centrifuge at greater than 8,000 rpm 1 분, 수거된 폐기물을 폐기하다, 다음 단계를 위해 수집 튜브를 정제 컬럼에 다시 삽입합니다..

10. 단계 반복 9, add the remaining liquid to the DNA extraction purification column (전부), centrifuge at greater than 8,000 rpm 1 분, discard waste and the collection tube.

11. DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (전부) 수집 튜브에, 추가하다 300세척 완충액의 μl 1,centrifuge at greater than 8,000 rpm 1 분, discard waste, DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (전부) back into the tube for the next step.

(메모: Confirm the addition of absolute ethanol in Wash Buffer 1.)

12. 추가하다 500세척 완충액의 μl 1 DNA 추출 정제 컬럼으로 (전부), 원심분리기 14,000 rpm (20,000×g) ~을 위한 2 분, extend centrifugation time appropriately to ensure the membrane is adequately dry.

13. DNA 추출 정제 컬럼을 배치합니다. (전부) 새로운 원심분리 튜브에, leave it uncovered, 그리고 65°C에서 배양하세요. 2 분. Extend this step as needed to evaporate ethanol to prevent ethanol residue from affecting downstream experiments.

14. 피펫 100용출 완충액 μl onto the column membrane, 원심분리기 12,000 rpm 2 분.

(메모: 1. Using 50μl of Elution Buffer to elute DNA can increase DNA concentration but reduce the overall DNA yield; 2. The eluate containing DNA can be reapplied to the DNA extraction purification column and centrifuged at 12,000 rpm 2 minutes again to increase DNA yield.)