B형 간염 바이러스 핵산 분석 키트 (PCR-형광 프로브 방법) 연구용

【상품명】 B형 간염 바이러스 핵산 분석 키트 (PCR-형광 프로브 방법)

【패키지 사양】48 테스트/ 키트

의도 된 용도

• 이 키트는 B 형 간염 바이러스의 정량적 결정을위한 것입니다. (HBV) 핵산 (DNA) 혈청 또는 혈장 샘플.
• HBV 감염에 대한 검사가 필요한 환자와 B 형 간염에 대한 항 바이러스 요법을받는 환자에게 사용됩니다..
• 항 바이러스 치료에 대한 반응을 모니터링하고 환자 혈액에서 HBV DNA 수준을 추적하여 치료 효과를 평가하도록 설계되었습니다..
• 하지만, 검사는 환자의 상태의 지표로만 의존해서는 안됩니다..
• 환자의 전반적인 상태를 평가하기 위해 임상 증상 및 기타 실험실 검사와 함께 사용해야합니다..
• 이 키트는 HBV 혈액 선별 목적에 적합하지 않습니다..

테스트 원칙

• 이 키트는 표준 PCR 증폭 튜브에서 바이러스 성 핵산을 해독하고 정제하는 형태 자기 비드를 사용합니다..
• 그런 다음 PCR 증폭 시약이 동일한 튜브에 직접 첨가됩니다., 비드가 형광 정량적 PCR 반응에 직접 참여하도록 허용.
• Taqman 프로브 기술이 사용됩니다, 여기서 5 '→ 3′ TAQ DNA 폴리머 라제의 핵산 엑소 뉴 클레아 제 활성 PCR 동안 Taqman 프로브를 분해한다..
• 이 분해는 형광 리포터 그룹을 담금질 그룹과 분리합니다., 형광 신호 생성.
• 실시간 형광 PCR 검출 시스템은이 신호를 실시간으로 수집합니다., 샘플에서 바이러스 함량의 정량적 결정 가능.
• 비활성화 된 B 형 간염 바이러스를 함유하는 임상 혈청 샘플.
• 키트는 내부 표준을 감지하여 샘플에서 PCR 억제제를 모니터링합니다., 잘못된 부정의 위험을 완화합니다.

구성요소

B형 간염 바이러스 핵산 분석 키트 (PCR-형광 프로브 방법) 연구용
그는 될 것입니다 숫자	제품 구성		주요 구성 요소	크기와 수량
DLB	핵산 추출 시약	자기 구슬이있는 HBV 용 해물)	수산화 나트륨, TNUS베이스, 트랄라톤 x-00.confomatioal 자기 비드	5.5ML X 1 병
DWB		HBV 헹굼 솔루션	염화 칼륨, 트리톤 X-100	15.0ML X L 병
1	PCR 증폭 양이온 시약	HBV pcrreactionsolutim	프라이머, 프로브, 데 옥시 리보 뉴 클레오 시드 트리 포스페이트, 마그네슘 이온 Pcr.duffe	1.10ML X 2 튜브
2		HBV 효소 믹스	DNA 폴리머 라제 및 우라실 글리코 실라 제	110μl x 1 튜브
3	구경 측정 제품	HBV 캘리브레이터 cal(10-3.0)× 10*IUVML	일정한 값 HBV 양성 혈청 샘플 (비활성화)	0.35 ML X 1 튜브
4		HBV 캘리브레이터 cal(1.0-3.0)× l0iuvml	일정한 값 HBV 양성 혈청 샘플 (비활성화)	0.35 ML X I 튜브
5		HBV 캘리브레이터 cal(1.0-3.0)× 10*IU/ml	일정한 값 HBV 양성 혈청 샘플 (비활성화)	0.35 ML X L 튜브
6		HBV 캘리브레이터 cal(1.0-3.0)× 10 I/ml	일정한 값 HBV 양성 혈청 샘플 (비활성화)	0.35 ML X 1 튜브
7	품질 관리 제품	HBV 강하게 긍정적 c(10-5.0110)× 10 I/ml	BV- 양성 혼합 혈청 샘플 (비활성화)	0.35 ML X L 튜브
8		HBV 중요한 양성 품질 관리 (10-100)ium	BV- 양성 혼합 혈청 샘플 (비활성화)	0.35 ML X I 튜브
9		HBV 부정적인 품질 관리	HBV 음성 혼합 혈청 샘플 (비활성화)	0.35 ML X I 튜브
10	안의 상표	HBV 내부 레이블	내부 표준 핵산 템플릿	60μL X L 튜브

노트: ㅏ. 교정기의 매개 변수에는 배치 간 차이가 있습니다 ① 에게 ④ 그리고 강한 긍정적 QC 및 임계 양성 QC의 고정 값 (위의 범위 내에서). 자세한 내용, 키트에 첨부 된 지침 시트를 참조하십시오.

1. 다른 키트 로트에서 구성 요소를 혼합하지 마십시오!
2. 테스트 항목을 가져 오십시오: 0.2ML PCR 반응 튜브, 원심분리기, 피펫과 팁의 다양한 크기, 그리고 자기 스탠드, 권장되는 자기 스탠드를 사용하십시오.

저장 조건 및 만료 날짜

• 핵산 추출 키트, 실온에서 운반하고 2-8 ° C에서 저장됩니다.
• PCR 증폭 키트, 더 높은 곳에서 운송되었습니다 10 ℃, 저장 -20 ° C ± 5 빛에서 ° C, 피하다
• 반복적 인 동결-해동 (더 이상 3 타임스).
• 만료 날짜: 키트는 유효합니다 12 개월, 만료일 내에 사용하십시오. 생산 날짜 및 만료 날짜에 대한 자세한 내용은 레이블을 참조하십시오..

해당되는 악기

LightCycler®와 함께 사용합니다 480, SLAN-96P, MX3005P, 및 ABI7500 실시간 형광 PCR 기기.

샘플 요청

1. 적절한 샘플 유형: 혈청 또는 혈장
2. 샘플 수집: 이 키트는 혈청 또는 혈장 샘플에 적합합니다.

혈청 샘플: 5 정맥 혈액의 ml는 멸균 주사기를 사용하여 피험자로부터 수집하고 실온에서 멸균 원심 분리 튜브에 배치됩니다. 6 시간과 스스로 침전하기 위해 떠났다, 또는 1600g에 직접 원심 분리 5 분과 상청액 (적혈구를 흡인하지 않도록주의합니다) 멸균 원심 분리 튜브로 옮긴다.

혈장 샘플: 2 ML 또는 5 멸균 주사기를 사용하여 대상으로부터 정맥 혈액의 ml를 수집합니다., EDTA 항응고제를 함유 한 멸균 수집 튜브에 주사, 혼합, 그리고 그 이상으로 실온에서 떠났습니다 6 샘플이 자체적으로 침전 될 수있는 시간, 또는 1600g에서 직접 원심 분리했습니다 5 혈장을 분리하고 멸균 원심 분리 튜브로 옮겼습니다..

3. 저장: 위의 치료 후 테스트 할 샘플은 즉시 테스트에 사용될 수 있습니다., 시간이 없다면 반복적 인 동결 및 해동을 피하기 위해 -20 ° C 아래에 냉동 보관해야합니다..

4. 수송: 샘플은 얼음이나 얼음 주전자가있는 거품 상자로 운반해야합니다., 얼어 붙은 상태에서.

테스트 방법

(나) 시약 준비 (시약 준비 영역)

HBV 용 해물 준비:

1. HBV 용 해물을 철저히 섞습니다 (DLB) 자기 구슬을 포함합니다.
2. 다양한 시약 성분을 제거하고 실온으로 평형화 할 수 있습니다., 빛으로부터 보호됨.
3. HBV Lysate 및 HBV 내부 표준을 비율로 혼합 100 μL/사람 + 1.0 μL/사람, 그리고 잘 섞어주세요.
4. 혼합물을 즉시 PCR 증폭 튜브로 분배하십시오 (0.2 ML 단일 튜브, 0.2 ML 옥틴 튜브, 또는 96- 웰 PCR 플레이트) ~에 100 μl/웰, HBV Lysate가 튜브 바닥에 있는지 확인.

PCR 증폭 시약 제제:

• 구성 시간: 시약 제제는 핵산 추출 튜브가 자기 선반에 배치 된 후에 수행됩니다..
• 준비: 테스트 할 샘플을 기반으로합니다, HBV 부정적인 품질 관리를 준비하십시오, HBV 중요한 양성 품질 관리, HBV 강력한 양성 품질 관리, 및 HBV 캘리브레이터.
• ① ~ ④의 수량, 해당 양의 HBV PCR 반응 용액 및 HBV 효소 혼합물을 가져 가십시오., 그리고 섞는다 (HBV PCR 반응 용액 43.0 μL/사람 + HBV 효소 믹스 (2.0 μL/사람)), 철저히 혼합하여 즉각적인 사용을 위해 PCR-MIX를 형성합니다.

(II) 핵산 정제 (샘플 처리 영역)

1. 추가하다 100 테스트 할 샘플의 μl 또는 HBV 음성 품질 관리, HBV 중요한 양성 품질 관리, HBV 강력한 양성 품질 관리, HBV 교정기 cal ~ ④ ~ HBV Lysate가 분배 된 PCR 튜브에; 불어서 부드럽게 섞으십시오 3 에게 5 타임스; 실온에서 두십시오 5 에게 10 분.
2. PCR 튜브를 자기 스탠드로 옮깁니다, 떠나십시오 2-3 분, 피펫 또는 부압 장치를 사용하여 상청액을 흡인합니다., 자기 구슬을 제거하지 않도록주의하십시오.
3. PCR 튜브를 자기 스탠드에 보관하십시오, 추가하다 250 HBV 린스 용액의 μl (DWB) 우물에, 떠나십시오 2 분 피펫 또는 부압 장치를 사용하여 상청액을 흡인하고, 잔류 물을 남기지 않도록주의하십시오.

증폭 시약 첨가 (샘플 처리 영역)

• 추가하다 45.0 각각의 웰에 대한 μl의 PCR-MIX.
• 튜브를 덮고 뒤집습니다.
• PCR-Mix와 비드를 철저히 혼합하여 구슬을 부드럽게 튕기십시오..
• 튜브를 수평으로 즉시 원심 분리하십시오.
• PCR 튜브를 탐지 영역으로 옮깁니다.
• 탐지를 위해 형광 PCR 기기에 놓으십시오.

PCR 증폭 (탐지 구역)

PCR 반응 튜브를 증폭기에 넣으십시오, HBV 네거티브 컨트롤을 설정하십시오, HBV 강한 긍정적 인 제어, HBV 임계 양성 제어, HBV 캘리브레이터 cal ~ ④ 및 해당 순서로 테스트 할 샘플, 캘리브레이터의 샘플 이름과 농도를 설정하십시오..

증폭 프로그램 설정.

예제에서 SLAN-96P (LightCycler® 480, SLAN-96P 및 MX3005P, ABI7500은 동일한 설정을 가지고 있습니다. 일단 설정되면, 파일을 저장하고 반응 프로그램을 실행하십시오

결과에 대한 액세스

1. 증폭 곡선에 대한 설명: 증폭 곡선은 일반적으로 s 자형입니다.
2. 기준선 설정: 실험 상황에 따라, 안정된 형광 배경 값이있는 섹션은 기준선 설정 범위로 선택해야합니다..
3. 임계 값 설정: 음성 품질 관리의 증폭 곡선의 가장 높은 지점을 초과합니다..
4. 결과 분석: 기준선 및 임계 값 라인이 설정되면, 결과를 분석 할 수 있습니다.

테스트 할 샘플과 품질 관리의 결과를 얻으려면 FAM 채널을 선택하십시오.; 내부 표준의 결과를 얻으려면 Hex 또는 Vic 채널을 선택하십시오.. (메모: 자세한 설정은 다른 계측기의 매뉴얼을 참조하십시오.)

참조 값

이 키트의 감지 한계와 정량 한계는 다음과 같습니다. 5 IU/ml, 표적 CT의 경우 참조 값이 40 ≤40이고 내부 표준 CT의 경우 ≤40을 가진 연구 테스트에 의해 결정.

실험의 타당성에 대한 판단

1. 교정기는 모두 양수였으며 선형 상관 계수가있었습니다.|아르 자형|≥0.980.
2. 부정적인 품질 관리는 감지 할 수 없어야하며 내부 표준 CT 값 ≤ 40.
3. 강하게 긍정적 인 대조군은 CT 값을 갖는다 <25 및 정량 범위 (1.0-5.0) 엑스 105 IU/ml 비판적으로 긍정적 인 대조군은 CT 값을 갖는다 <38 및 정량 범위 (10- 100) IU/ml. 위의 요구 사항은 동일한 실험에서 충족되어야합니다., 그렇지 않으면, 테스트 결과는 유효하지 않은 것으로 간주되며 다시 테스트해야합니다..

테스트 결과의 해석

1. 샘플 결과가있는 경우 5-2.0 엑스 109 IU/ML 및 증폭 곡선은 S- 형을 나타냅니다, 샘플 CT 값은 ≤40이고 내부 표준 CT 값은 ≤40입니다., 결과는 유효한 것으로 판단되며 양성 및 해당 농도 값은 직접보고 할 수 있습니다..
2. 샘플 결과가있는 경우 >2.0 엑스 109 IU/ML 및 증폭 곡선은 S- 형을 나타냅니다, 샘플 CT 값은 ≤40입니다, 내부 표준 CT 값은 ≤40입니다, HBV DNA로 직접보고 할 수 있습니다 >2.0 엑스 109 IU/ml. 정확한 정량화가 필요한 경우, 샘플을 아래로 희석 할 수 있습니다 2.0 엑스 109 IU/ml 및 재시험
3. 샘플 결과가 HBV DNA 인 경우 <5IU/ml, 샘플 CT 값은 ≤40이고 내부 표준 CT 값은 ≤40입니다., 결과는 키트 검출의 하한 한계 이하의 HBV DNA 농도로보고됩니다.; 내부 표준이 비정상 인 경우 (코네티컷 >40 또는 가치 없음), 샘플의 결과가 잘못되었고 원인을 찾아서 제외하고 샘플을 반복해야합니다. (반복 테스트 결과가 여전히 유효하지 않은 경우, 문의하시기 바랍니다). (반복 테스트 결과가 여전히 유효하지 않은 경우, 문의하시기 바랍니다).