Kit per il test dell'acido nucleico del virus dell'epatite B (Metodo con sonda fluorescente PCR) Per la ricerca

【Nome del prodotto】 Kit per il test dell'acido nucleico del virus dell'epatite B (PCR-Metodo della sonda fluorescente)

【Specifica del pacchetto】48 Test/Kit

Destinazione d'uso

• The kit is intended for the quantitative determination of hepatitis B virus (HBV) acido nucleico (DNA) in serum or plasma samples.
• It is utilized for patients requiring testing for HBV infection and those undergoing antiviral therapy for hepatitis B.
• Designed to monitor the response to antiviral treatment and assess treatment effectiveness by tracking HBV DNA levels in patient blood.
• Tuttavia, the test should not be solely relied upon as an indicator of a patient’s condition.
• It must be used alongside clinical manifestations and other laboratory tests to evaluate the patient’s overall condition.
• This kit is not suitable for HBV blood screening purposes.

Principio della prova

• The kit employs conformational magnetic beads to both lyse and purify viral nucleic acids in a standard PCR amplification tube.
• PCR amplification reagent is then directly added to the same tube, allowing the beads to directly participate in the fluorescent quantitative PCR reaction.
• TaqMan probe technology is utilized, wherein the 5’→3′ nucleic acid exonuclease activity of Taq DNA polymerase degrades the TaqMan probe during PCR.
• This degradation separates the fluorescent reporter group from the quenched group, generating a fluorescent signal.
• The real-time fluorescent PCR detection system collects this signal in real-time, enabling the quantitative determination of the viral content in the sample.
• Clinical serum samples containing inactivated hepatitis B virus serve as calibrators and quality controls for the kit.
• The kit monitors PCR inhibitors in the sample by detecting internal standards, mitigating the risk of false negatives.

Componenti

Appunti: UN. Esistono differenze tra lotto e lotto nei parametri dei calibratori ① A ④ e il valori fissi di QC fortemente positivi e QC positivi critici (tutto all'interno dell'intervallo sopra indicato). Per dettagli, consultare il foglio istruzioni allegato al kit.

1. Non mescolare componenti provenienti da lotti di kit diversi!
2. Porta i tuoi articoli di prova: 0.2ml Provette di reazione per PCR, centrifuga, pipette e puntali di varie dimensioni, E supporto magnetico, e utilizza il nostro supporto magnetico consigliato.

Condizioni di conservazione e data di scadenza

• Kit per l'estrazione degli acidi nucleici, trasportato a temperatura ambiente e conservato a 2-8°C.
• Kit di amplificazione PCR, trasportato a non più in alto di 10 °C, conservato a -20 °C± 5 °C al riparo dalla luce, Evitare
• ripetuti congelamento-scongelamento (non più di 3 volte).
• Data di scadenza: Il kit è valido per 12 mesi, si prega di utilizzarlo entro la data di scadenza. See label for details of production date and expiry date.

Applicabile Strumenti

Da utilizzare con LightCycler® 480, SLAN-96P, Mx3005P, e strumenti per PCR a fluorescenza in tempo reale ABI7500.

Esempio di richiesta

1. Tipo di campione adatto: siero o plasma
2. Raccolta campioni: Questo kit è adatto per campioni di siero o plasma.

Campione di siero: 5 ml di sangue venoso vengono raccolti dal soggetto utilizzando una siringa sterile e posti in una provetta da centrifuga sterile a temperatura ambiente per non più di 6 ore e lasciato precipitare da solo, oppure centrifugato direttamente a 1600g per 5 minuti e il surnatante (facendo attenzione a non aspirare i globuli rossi) viene trasferito in una provetta da centrifuga sterile.

Campione di plasma: 2 ml o 5 ml di sangue venoso vengono raccolti dal soggetto utilizzando una siringa sterile, iniettato in una provetta di raccolta sterile contenente anticoagulante EDTA, misto, e lasciato a temperatura ambiente per non più di 6 ore per consentire al campione di precipitare da solo, oppure direttamente centrifugato a 1600g per 5 minuti per separare il plasma e trasferirlo in una provetta da centrifuga sterile.

3. Magazzinaggio: I campioni da analizzare dopo il trattamento di cui sopra possono essere utilizzati immediatamente per l'analisi, se non in tempo devono essere conservati congelati a una temperatura inferiore a -20°C per evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti.

4. Trasporto: I campioni devono essere trasportati in una scatola di schiuma con ghiaccio o in una brocca di ghiaccio, allo stato congelato e sigillato.

Metodo di prova

(io) Preparazione dei reagenti (zona di preparazione dei reagenti)

Preparation of HBV Lysate:

1. Thoroughly mix HBV lysate (DLB) containing magnetic beads.
2. Remove various reagent components and allow them to equilibrate to room temperature, protetto dalla luce.
3. Mix HBV lysate and HBV internal standard in a ratio of 100 µl/persona + 1.0 µl/persona, and mix thoroughly.
4. Dispense the mixture immediately into PCR amplification tubes (0.2 provette singole da ml, 0.2 tubi dell'ottetto ml, o piastre PCR da 96 pozzetti) A 100 µl/pozzetto, ensuring HBV lysate is at the bottom of the tube.

PCR Amplification Reagent Preparation:

• Tempo di configurazione: Reagent preparation is conducted after the nucleic acid extraction tubes have been placed in the magnetic rack.
• Preparazione: Based on the samples to be tested, prepare HBV negative quality control, Controllo di qualità positivo critico per HBV, HBV forte controllo di qualità positivo, e calibratore dell'HBV.
• For quantities of ① to ④, take corresponding amounts of HBV PCR reaction solution and HBV enzyme mixture, and mix according to (HBV PCR reaction solution 43.0 µl/persona + Miscela di enzimi HBV (2.0 µl/persona)), mixing thoroughly to form PCR-Mix for immediate use.

(ii) Purificazione degli acidi nucleici (area di elaborazione dei campioni)

1. Aggiungere 100 μl del campione da testare o controllo di qualità HBV negativo, Controllo di qualità positivo critico per HBV, HBV forte controllo di qualità positivo, Calibratore dell'HBV da ① a ④ nella provetta PCR in cui è stato dispensato il lisato dell'HBV; mescolare delicatamente soffiando 3 A 5 volte; lasciare a temperatura ambiente per 5 A 10 minuti.
2. Trasferire le provette PCR su un supporto magnetico, partire per 2-3 minuti, and aspirate the supernatant using a pipette or negative pressure device, facendo attenzione a non rimuovere le sfere magnetiche.
3. Conservare le provette PCR su un supporto magnetico, aggiungere 250 ml di soluzione di risciacquo HBV (DWB) a ciascun pozzo, partire per 2 minuti e aspirare il supernatante utilizzando una pipetta o un dispositivo a pressione negativa, facendo attenzione a non lasciare residui.

Aggiunta del reagente di amplificazione (area di elaborazione dei campioni)

• Aggiungere 45.0 μl di PCR-Mix in ciascun pozzetto.
• Cap the tube and invert it.
• Gently flick off the beads to ensure thorough mixing of the PCR-Mix with the beads.
• Instantaneously centrifuge the tube horizontally.
• Transfer the PCR tubes to the detection area.
• Place them on a fluorescent PCR instrument for detection.

Amplificazione PCR (zona di rilevamento)

Posizionare la provetta di reazione PCR nell'amplificatore, impostare il controllo negativo dell'HBV, Controllo positivo forte per HBV, Controllo positivo critico per HBV, Calibratore HBV da ① a ④ e campione da testare nell'ordine corrispondente, e impostare il nome del campione e la concentrazione del calibratore.

Impostazioni del programma di amplificazione.

SLAN-96P come esempio (LightCycler® 480, SLAN-96P e Mx3005P, ABI7500 hanno la stessa configurazione. Una volta impostato, salvare il file ed eseguire il programma di reazione

Accesso ai risultati

1. Descrizione della curva di amplificazione: La curva di amplificazione è generalmente a forma di S.
2. Impostazione di base: A seconda della situazione sperimentale, come intervallo di impostazione di base è necessario selezionare una sezione con un valore di fluorescenza di fondo stabile.
3. Impostazione della soglia: superare appena il punto più alto della curva di amplificazione del controllo di qualità negativo.
4. Analisi dei risultati: Una volta impostate la linea di base e le linee di soglia, i risultati possono essere analizzati.

Selezionare il canale FAM per ottenere i risultati per il campione da testare e il controllo di qualità; selezionare il canale HEX o VIC per ottenere i risultati per lo standard interno. (Nota: Fare riferimento ai manuali dei diversi strumenti per le impostazioni dettagliate.)

Valori di riferimento

Il limite inferiore di rilevamento e limite di quantificazione per questo kit è 5 UI/ml, determinato da test di ricerca con valori di riferimento ≤40 per Ct target e ≤40 per Ct standard interno.

Giudizio sulla validità dell'esperimento

1. I calibratori erano tutti positivi e avevano un coefficiente di correlazione lineare|R|≥0,980.
2. Un controllo di qualità negativo dovrebbe essere non rilevabile e avere un valore Ct dello standard interno ≤ 40.
3. I controlli fortemente positivi hanno un valore Ct <25 e un intervallo di quantificazione di (1.0-5.0) X 105 UI/ml i controlli criticamente positivi hanno un valore Ct <38 e un intervallo di quantificazione di (10- 100) UI/ml. I requisiti di cui sopra devono essere soddisfatti nello stesso esperimento, Altrimenti, i risultati del test sono considerati non validi e devono essere rieseguiti.

Interpretazione dei risultati dei test

1. Se il risultato del campione è 5-2.0 X 109 UI/ml e la curva di amplificazione mostra una forma a S, mentre il valore Ct del campione è ≤40 e il valore Ct dello standard interno è ≤40, il risultato viene giudicato valido e i valori positivi e di concentrazione corrispondenti possono essere riportati direttamente.
2. Se il risultato del campione è >2.0 X 109 UI/ml e la curva di amplificazione mostra una forma a S, the sample Il valore Ct è ≤40, e il valore Ct dello standard interno è ≤40, può essere riportato direttamente come HBV DNA >2.0 X 109 UI/ml. Se è necessaria una quantificazione precisa, il campione può essere diluito al di sotto 2.0 X 109 UI/ml e ritestato
3. Se il risultato del campione è HBV DNA <5UI/ml, il valore Ct del campione è ≤40 e il valore Ct dello standard interno è ≤40, il risultato viene riportato come concentrazione di HBV DNA inferiore al limite inferiore di rilevamento del kit; se lo standard interno è anormale (Ct >40 o nessun valore), il risultato del campione non è valido e la causa deve essere trovata ed esclusa e il campione deve essere ripetuto (se il risultato del test ripetuto è ancora non valido, Ci contatti per favore). (se il risultato della ripetizione del test non è ancora valido, Ci contatti per favore).