太陽組織および血液アルカリホスファターゼ (AKP/ALP) 活性アッセイキット

組織および血液アルカリホスファターゼ (AKP/ALP) 活性アッセイキット

注記: テスト前に予測のために 2 つまたは 3 つの異なるサンプルを取得します.

操作装置: 分光光度計

カタログ番号: BC2140

サイズ: 50T/24S

コンポーネント:

抽出試薬: 液体 30 mL×1本, 4℃で保存.

試薬 1: 液体 10 mL×1本, 4℃で保存し、光から保護します.

試薬 2: 液体 10 mL×1本, 4℃で保存し、光から保護します.

試薬 3: 液体 30 mL×1本, 4℃で保存し、光から保護します. 青緑色に変わる場合は使用できません.

標準: 液体 1 mL×1本, 10 μmol/mlフェノール標準溶液, 4℃で保存. 蒸留水で希釈します 2.5 使用前のμmol/ml.

製品説明:

AKP/ALPは亜鉛含有糖プロテアーゼです, これは、アルカリ疾患のさまざまな天然および合成リン脂質モノエステル化合物の加水分解. AKP / ALPは人間の臓器に広く分布しています, 主に肝臓で.

アルカリ疾患で, AKP/ALPは、リン酸二胞体の加水分解をフェノールに触媒します, そして、フェノールは4-アミノ酸ピリンおよびフェリシアニドカリウムと反応して、赤いキノン誘導体を形成します, で吸収性を検出できます 510 nm. AKP/ALP活性は、吸光度増加率を測定することで計算できます 510 nm.

必要だが提供されていない試薬と装置:

分光光度計, 卓上遠心分離機, 転送者, 1 mLガラスキュベット, 氷と蒸留水.

手順:

私. 酵素 準備:

追加 1 ML抽出試薬へ 0.1 G組織, 徹底的に挽く. 4℃での遠心, 10000 の回転数 10 分. テストのために氷上で上清を取ります. 血液サンプルは直接検出できます. 濃縮物が高い場合は、抽出試薬で希釈します.

Ⅱ. 決定 手順:

1. 予熱用分光光度計 30 分, 波長を調整して 510 nm, 蒸留してカウンターをゼロに設定します
2. 試薬を追加します 1.5 次のようにml cuvette:

試薬名 (μL)	A3チューブテスト	コントロールチューブA4	空白のチューブA2	標準チューブA1
蒸留水			20
標準溶液				20
上清	20
試薬 1	200	200	200	200
試薬 2	200	200	200	200
十分に混ぜ合わせてください, 37℃にとどまります 15 分.
試薬 3	600	600	600	600
上清		20
十分に混ぜ合わせてください, で吸収性を検出します 510 nm, A1として記録します, A2, A3, A4.

Ⅲ. AKP/ALPアクティビティの計算:

• タンパク質濃度:

単位の定義: 酵素活性の 1 単位は、次の生成を触媒する酵素の量として定義されます。 1 37のすべてのmgタンパク質で1分あたりの反応系のμmolフェノール.

AKP/ALP (U/mgプロット) =[c×(A3-A4)÷(A1-A2)×vs]÷(心肺蘇生×対比)÷t = 0.167×(A3-A4)÷(A1-A2)÷心肺蘇生法

• サンプル重量:

単位の定義: 酵素活性の 1 単位は、次の生成を触媒する酵素の量として定義されます。 1 37のすべてのgサンプルで1分あたりの反応系のμmolフェノール.

AKP/ALP (U/g重量) =[c×(A3-A4)÷(A1-A2)×vs]÷(W÷Ve×Vs)÷t = 0.167×(A3-A4)÷(A1-A2)÷W

• 血:

単位の定義: 酵素活性の 1 単位は、次の生成を触媒する酵素の量として定義されます。 1 37℃で1分あたり反応系におけるμmolフェノールすべてのml血清.

AKP/ALP (U/mL) =[c×(A3-A4)÷(A1-A2)×vs]÷vs÷t = 0.167×(A3-A4)÷(A1-A2)

C: 標準濃度, 2.5 μmol/mL;

ロープ: 総反応量, 1020 μL= 1.02 mL; 対: 上清の量, 0.02 mL;

ヴェ: 抽出量, 1 mL; W: サンプル重量, g;

T: 反応時間, 15 分;

心肺蘇生法: サンプルタンパク質濃度, mg/mL.

注記:

1. 試薬 1, 試薬 2 および試薬 3 から保護する必要があります
2. 試薬 3 Toblue-Greenが変更されている場合、使用できません.
3. 試薬を追加した後、徹底的にすぐに混ぜます 3 不完全を避けるため

実験例:

1. 0.1gのマウス膵臓を取り、追加します 1 ホモジネート用の抽出物溶液のml. 上清を服用した後, 決定手順に従って動作します. at =を計算します 0.324, ac = 0.037, ab = 0.022, as = 0.677. サンプル質量に従って酵素活性を計算します: AKP/ALP酵素活性 (U/g質量) = 0.167×(AT-AC)÷(as-ab) ÷w = 0.167×(0.324-0.037)÷(0.677-0.022)÷0.1 = 0.732 U/g
2. ウサギの血清を服用した後, 操作は、決定手順に従って実行されます, 酵素活性は次のように計算されます: at = 0.190, ac = 0.015, ab = 0.022, as = 0.677. 血液量によると, 酵素活性は次のように計算されます。: AKP/ALP酵素活性 (U/mL) = 0.167×(AT-AC) ÷ (as-ab) = 0.167×(0.190-0.015)÷(0.677-0.022)= 0.0446u/ml.

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